西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达基因的筛选及表达分析

【目的】本研究旨在筛选西方蜜蜂Apis mellifera采集蜂咽下腺中高表达的基因,为进一步筛选和研究蜜蜂采集行为相关基因提供依据。【方法】基于前期已获得西方蜜蜂3日龄工蜂(3 d_W)、10日龄哺育蜂(10 d_N)、10日龄采集蜂(10 d_F)、21日龄哺育蜂(21 d_N)和21日龄采集蜂(21 d_F)的咽下腺转录组数据,筛选咽下腺差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),并对10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的DEGs进行GO和KEGG富集分析;利用qPCR检测西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的4个DEGs(LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735)在不同发育时期(卵、幼虫、蛹、刚出房工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄采集蜂)和21日龄采集蜂组织(腹、胸、触角、上颚腺、咽下腺、蛰针、足、肠道、翅和脑)中的表达量。【结果】比较转录组结果表明,164个上调表达的DEGs在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量明显高于在3日龄工蜂、10日龄哺育蜂和21日龄哺育蜂咽下腺中的表达量,且在10日龄采集蜂咽下腺中的表达量也高于在10日龄哺育蜂咽下腺中的表达量;105个下调表达的DEGs的表达趋势与上述164个DEGs的相反。GO分析结果表明,10日龄和21日龄采集蜂咽下腺中高表达的164个DEGs显著富集于硫酸盐跨膜转运蛋白活性、硫化合物跨膜转运蛋白活性、铁离子结合和氧化还原酶活性;下调表达的105个DEGs显著富集于核糖体、细胞内核糖核蛋白复合物和核糖核蛋白复合物;KEGG通路分析结果表明,105个下调表达的DEGs显著富集于核糖体以及淀粉和蔗糖代谢两个通路。qPCR检测结果显示,LOC409889,LOC406114,LOC408453和LOC100578735均在21日龄采集蜂中表达量最高;LOC406114和LOC100578735在21日龄采集蜂咽下腺中的表达量最高,而在其他组织中表达量较低或不表达。【结论】本研究通过比较转录组筛选鉴定了西方蜜蜂采集蜂咽下腺中高表达的DEGs,为深入研究采集蜂咽下腺的功能提供了数据,同时也为研究西方蜜蜂的采集行为及采集力强蜂种的分子选育提供新的视角。

棉铃虫幼虫脑和咽下神经节的三维结构构建

【目的】解剖棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)5龄幼虫脑和咽下神经节及其内部神经髓形态结构,并分析和构建幼虫脑和咽下神经节以及各神经髓的三维结构模型。【方法】采用免疫组织化学方法解剖脑和咽下神经节的内部神经髓结构,利用激光共聚焦显微镜获取脑和咽下神经节扫描图像,然后利用AMIRA三维图像分析软件进行图像分析,从而构建脑和咽下神经节的三维结构模型,并测量脑和咽下神经节以及内部各神经髓的体积,并分析了相对比例。【结果】棉铃虫5龄幼虫脑和咽下神经节由围咽神经索连接在一起。脑主要由前脑、中脑和后脑3部分组成。前脑内包括视叶、蕈形体和中央体等形态结构较明显的神经髓。此外,前脑还包括其他位于脑的左右两侧以及背侧和腹侧大量神经髓区域,约占脑总神经髓的59.65%。这些神经髓区域边界不明显。中脑主要包括1对触角叶;后脑位于脑的腹侧和触角叶的下方,体积较小。咽下神经节由3个神经节融合构成,从前到后分别为上颚神经节、下颚神经节和下唇神经节,由于融合的紧密程度高,3个神经节间的边界不明显。【结论】阐明了棉铃虫5龄幼虫脑和咽下神经节的神经髓形态结构,构建了脑和咽下神经节以及内部神经髓的三维结构模型。三维模型可以任意旋转,能从任何角度观察脑、咽下神经节和内部不同神经髓的结构及其它们之间的空间关系。本研究结果对研究棉铃虫脑和咽下神经节信息接收、处理及调控行为的机制奠定了解剖学基础。

西方蜜蜂咽下腺与繁殖力的发育遗传研究

应用条件和非条件分析的方法对 3品种西方蜜峰的蜂群繁殖力和工蜂咽下腺重量进行了发育遗传研究。结果表明 ,除蜂群的起始繁殖群势和 1日龄工蜂咽下腺重量外 ,其它各个时期均检测到显著或极显著的基因型方差 ,说明二性状主要受遗传决定。条件遗传分析发现 ,在某些无法检测到非条件方差的时期存在显著水平的条件方差 ,表明在不同时期有基因的新表达。同一性状不同时期的相关分析表明 ,除 1月 31日群势、1日龄工蜂咽下腺重量分别与其它各阶段没有检测到遗传相关外 ,其余各时期之间均检测到显著或极显著的基因型相关 ,表明控制这二性状早期表现的遗传效应并不是以相同的方式调节后期的表现。成对性状之间的相关分析表明 ,除了 1月 31日群势、1日龄工蜂咽下腺重量与蜂群产浆量没有检测到遗传相关外 ,其它各时期均检测到显著或极显著的遗传相关 ,说明除 1月 31日、1日龄两个阶段外的其它时期对二性状进行改良均有效。

饲粮蛋白质水平对意大利蜜蜂咽下腺发育及产浆量的影响

本试验旨在研究饲粮蛋白质水平对产浆期蜜蜂咽下腺发育及产浆量的影响。选择35群群势、蜂王年龄和质量一致的意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica),随机分为7组,每组5群,每群为1个重复。对照组饲喂油菜花粉,试验组分别饲喂蛋白质水平为15%、20%、25%、30%、35%及40%的试验饲粮。试验测定各群采食量、工蜂咽下腺蛋白质含量、腺小囊面积、蜂王浆产量(产浆量)及王台接受率。结果表明,饲粮蛋白质水平对蜜蜂采食量、产浆量及工蜂咽下腺发育均具有显著影响(P<0.05),且有很强的规律性,即随着饲粮蛋白质水平的提高,各指标呈现先升高后降低的变化趋势,并以饲粮蛋白质水平为30%时,蜂群采食量、工蜂咽下腺小囊面积最大,咽下腺蛋白质含量、产浆量、王台接受率最高。由此得出,饲粮蛋白质水平达到30%时,工蜂咽下腺发育最好,且能够获得最好的生产性能。

意大利蜂工蜂咽下腺细胞超微结构与分泌活性

对浙农大１号（Ｅａ）、本意（Ｅｂ）和原意（Ｅｅ）不同日龄工蜂咽下腺细胞进行了电镜和光学显微镜观察和比较，发现Ｅａ蜂群许多日龄的咽下腺细胞存在非常丰富的线粒体、粗面内质网、分泌颗粒和分泌块，并且细胞核面积大，核仁数目多．这不仅说明分泌活性的特征，而且也显示了细胞能量供应、运行机制和分泌活性都处于旺盛阶段；而Ｅｂ、Ｅｅ均不及Ｅａ．３个类型的意蜂工蜂在２１日龄时咽下腺细胞均出现解体现象．观察结果初步揭示了Ｅａ王浆高产性能和咽下腺细胞超微结构。

经口咽下颌骨劈开入路处理上颈椎或上、下颈椎腹侧病变

目的:探讨经口咽下颌骨劈开入路处理上颈椎或上、下颈椎腹侧病变的临床效果。方法:采用经口咽唇面下颌骨劈开入路处理伴有下颌关节僵直的陈旧性寰枢椎脱位1例,行TARP钢板内固定术;处理枢椎体肿瘤1例,行C2椎体肿瘤切除,异形钛网笼置入重建椎体,同期行后路C1￣C3椎弓根钉棒植骨内固定术。采用经口、舌、唇面下颌骨劈开入路处理C1￣C5肿瘤1例,行肿瘤切除,异形钛网笼置入重建C2￣C4椎体,同期后路C1￣C5附件肿瘤切除,枕颈植骨融合内固定术。随访观察治疗效果。结果:病变部位显露满意,顺利完成手术操作。随访12￣24个月,2例肿瘤患者的肿瘤切除彻底,前路椎体重建满意,后路内固定稳妥,临床症状消失,行走正常;1例寰枢椎陈旧性脱位患者的寰枢椎达解剖复位,颈髓减压充分,C1￣C2前路内固定稳妥,临床症状消失。结论:经口咽下颌骨劈开扩大入路适合于处理同时累及上下颈椎的腹侧病变或患者张口困难的上颈椎腹侧病变。

日粮蛋白质水平对浙农大1号意大利蜜蜂产浆及咽下腺发育的影响

试验旨在研究不同蛋白质日粮对浙农大1号意蜂产浆期生产性能、蜂王浆成分和工蜂咽下腺发育的影响。选择15群群势相当的浙农大1号意蜂,按试验要求随机分为2个试验组和1个对照组,每组5群蜂,每群为1个重复,试验组分别饲喂蛋白质水平为20%(20%P)和30%(30%P)的全价人工配合日粮,对照组饲喂油菜花粉,测定各群采食量、蜂王浆产量、王台接受率、蜂王浆成分、咽下腺腺泡面积及咽下腺蛋白质含量。结果表明,日粮蛋白质水平对工蜂咽下腺发育有显著性影响(P<0.05),20%蛋白质日粮组咽下腺腺泡面积和蛋白质含量显著高于30%蛋白质日粮组和对照组(P<0.05);20%蛋白质日粮组蜂群采食量、蜂王浆总产量、王台接受率及蜂王浆中10-HDA、粗蛋白、酸度与30%蛋白质日粮组、对照组均无显著影响(P>0.05)。结果显示,对于浙农大1号意蜂,20%蛋白质日粮组工蜂咽下腺发育显著优于30%蛋白质日粮组,2种蛋白质日粮与花粉组相比,蜂王浆产量、王台接受率及蜂王浆成分无显著影响。

早期洗胃在新生儿咽下综合征的疗效观察

目的探讨治疗新生儿咽下综合征的有效方法。方法将患儿随机分为2组,实验组于生后8小时内予1%碳酸氢钠液洗胃,对照组于生后8小时以后开始洗胃,将两组患儿各日龄段痊愈情况进行统计学处理。结果实验组56例中有31例出生24小时痊愈,对照组42例中有10例出生24小时痊愈,经两组患儿各日龄段痊愈例数比较,x^2=9．83,P＜0．01,差异有统计学意义。结论早期洗胃对预防咽下综合征患儿频繁呕吐具有重要临床意义。

意大利工蜂咽下腺结构观察

通过研究意大利蜜蜂Apis mellifera工蜂咽下腺的结构及形态,为蜜蜂形态学和蜜蜂生理学以及王浆分泌生理提供新知识。采用光学显微镜、扫描电镜、HE染色石蜡切片和透射电镜,从形态学和细胞学水平对意大利工蜂咽下腺的结构和功能做了详尽探究和分析。意大利工蜂咽下腺由多个卵圆形腺泡组成,每个腺泡的直径约为120×180μm,腺泡之间有微气管相连,腺泡外侧有神经细胞,神经细胞的胞体直径约为12μm。每个腺泡是由多细胞构成,最外层有0.1～0.2μm的结缔组织膜,内部有壁细胞、酶原细胞和王浆分泌细胞,其中王浆分泌细胞分布较多,细胞直径约为16～18μm,细胞核直径约为6μm。由咽下腺的形态结构和细胞类型推断,意大利工蜂咽下腺主要分泌王浆,也具有分泌消化酶的功能,同时了解到分泌消化酶和王浆的途径。

咽下缩肌入路解剖喉返神经在神经修复术中的应用

目的:探讨在喉返神经修复术中,经咽下缩肌入路解剖显露神经,以利于神经修复的可行性。方法:2007-2010年11例单侧喉返神经损伤患者,术中切断咽下缩肌,自入喉处向近心端显露喉返神经,继而行神经粘连松解术1例,神经断端吻合后表面自体静脉套接术10例。手术前后喉镜检查评价手术效果。结果:所有患者均顺利游离显露咽下缩肌后方喉返神经,行喉返神经修复术,术后8例患者(73%)发音接近正常,2例患者(18%)发高音时略有嘶哑,1例患者(9%)正常发音时有嘶哑。其中1例行喉返神经松解术,术后喉镜提示声带活动完全恢复,10例行喉返神经断端吻合术,术后仅1例完全恢复声带活动,2例部分恢复,其余7例无明显活动。结论:喉返神经修复术中,经咽下缩肌入路解剖显露神经,有利于神经修复。

改良新生儿抚触治疗咽下综合征疗效观察

目的:探讨改良新生儿抚触治疗婴儿咽下综合征的效果。方法:将咽下综合征患儿110例随机分为两组,常规治疗组55例,使用常规药物吗叮啉或洗胃术治疗。新生儿抚触组55例,全部采用抚触按摩的方法治疗。两组均于出生12h后进行。结果:两组患儿各日段痊愈例数比较,差异有统计学意义(P<0.05),出生24h内痊愈率比较,差异有极显著性(P<0.01)。两组患儿第5日体重变化比较,差异有统计学意义(P<0.05),新生儿抚触组患儿体重回升快于常规药物组。结论:改良新生儿抚触治疗咽下综合征效果明显,与传统的药物治疗或洗胃术治疗相比,此方法简便易行,对身体无伤害,在爱抚的同时达到治疗目的,更容易让产妇接受。

三种鞘翅目昆虫的脑和咽下神经节的神经解剖学及5-HT阳性反应模式研究(英文)

采用树脂石蜡(CP)组织包埋连续切片技术,结合免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)染色法,首次对三种甲虫(榆紫叶甲、小青花金龟、马铃薯瓢虫)的脑进行了详细观察研究,分析了三种甲虫脑组织结构特征,初步构建了三种甲虫脑内5-HT抗原系统免疫组化反应模式。结果显示,分类地位相近的三种甲虫脑结构大小相差悬殊:小青花金龟脑结构相对发达,蕈形体结构显著,具有发达的冠和叶,嗅叶发达;马铃薯瓢虫和榆紫叶甲的冠极度退化,嗅叶相对不发达;但榆紫叶甲具有十分发达的网膜后纤维和围咽神经。5-HT阳性纤维在三种甲虫的所有神经纤维网中几乎都有分布,且反应模式相似,但各神经纤维网特别是神经节层染色强度差异显著。5-HT阳性胞体有成群分布现象,且在三种甲虫脑中的空间分布位置基本一致。结果表明,三种甲虫可能由于长期生活习性的不同,在进化压力作用下产生了适应辐射,榆紫叶甲的分类地位可能相对较为低等。不同昆虫脑内5-HT阳性反应产物分布模式的相似性表明,5-HT在不同昆虫中极有可能发挥着相似的生理功能,而且5-HT可能参与调节饮食行为及视觉系统的敏感度。

不同浓度碳酸氢钠液洗胃对新生儿咽下综合症的影响

目的观察不同浓度的碳酸氢钠液洗胃对新生儿咽下综合征疗效的影响。方法将我院儿科88例咽下综合征患儿,随机分为对照组(A组)和实验组(B、C、D、E四组),分别采用温开水和浓度为1.0%、1.5%、2.0%、2.5%的碳酸氢钠液洗胃。观察患儿呕吐、腹胀、胃潴留情况及体重变化情况。结果治疗组在呕吐、腹胀、胃潴留等方面都明显优于对照组,有显著性差异(p<0.05),但实验组之间无差异(p>0.05)。实验组患者体重与对照组比较无差异(p>0.05)。结论1.0%的碳酸氢钠治疗新生儿咽下综合征疗效满意,并发症少,值得临床优先应用。

咽下缩肌的形态特征及其临床意义

目的：为提高全喉切除术后患者用发音管发音重建的成功率，选择最能影响发音重建成功的咽下缩肌进行研究。方法：对４０具正常成人尸体标本咽下缩肌的解剖结构进行了详细的观察和测量。测量咽下缩肌各起点处的宽度，在甲状软骨板后缘的厚度；止点的长度；环咽肌后壁的测量；并用组织切片法观察咽缝的结构。结果：发现咽下缩肌不仅有起于甲状软骨和环状软骨的肌纤维，而且有起于第１气管环的肌纤维和肌腱。咽缝不是呈线状，而是呈条带状。结论：对发音重建行咽缩肌切断术有重要的临床意义。

榆紫叶甲Ambrostoma quadriim-pressum脑及咽下神经节GABA阳性神经元分布模式的构建

采用树脂石蜡(CP)组织包埋切片技术,结合免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)双染法,初步构建了榆紫叶甲脑及咽下神经节GABA阳性神经元的分布模式.结果显示,榆紫叶甲脑结构比较特殊:视叶不发达,但具内髓板;嗅叶不发达;蕈形体冠高度退化,而根叶相对发达;中央复合体结构明显;后脑经由围咽神经束与咽下神经结相连,咽下神经结非常发达.榆紫叶甲的所有髓区几乎都有GABA免疫阳性纤维分布.一侧脑半球及咽下神经节共存在约2 800个GABA阳性神经元,分布广泛,且趋向于集群分布.该研究表明榆紫叶甲的脑结构及GABA阳性神经元的分布模式与榆紫叶甲的生活习性、进化地位等密切相关.

王浆高产蜜蜂和原种意大利蜜蜂咽下腺发育蛋白质组分析

【目的】对王浆高产蜜蜂(浆蜂)(A.m.ligustica)和原种意大利蜜蜂(原意)(A.m.ligustica)1、3、6日龄工蜂咽下腺进行蛋白质组研究,揭示咽下腺在此阶段的发育特征。【方法】采用双向电泳方法对浆蜂和原意咽下腺进行蛋白质组研究,通过与已鉴定蛋白功能的咽下腺和蜂王浆蛋白质组图谱比较,推断部分蛋白的功能。【结果】浆蜂咽下腺在3个日龄表达的蛋白数(210、192、230)分别显著的高于原意(169、188、212),两蜂种均在6日龄表达蛋白最多(P<0.05)。浆蜂咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为119个,其中21个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,14个蛋白显著下调;原意咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为107个,其中15个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,19个蛋白显著下调(P<0.05)。1日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为145个,其中28个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,14个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为65个,原意为24个;3日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为138个,其中31个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,19个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为54个,原意为50个;6日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为175个,其中44个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,25个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为55个,原意为37个(P<0.05)。与原意相比,浆蜂咽下腺发育3个日龄特有蛋白点总数为72个。从3日龄开始在浆蜂和原意咽下腺的蛋白表达谱中出现大量的王浆主蛋白点。【结论】从工蜂羽化到6日龄这一阶段内,浆蜂咽下腺蛋白表达明显比原意活跃,6日龄是2蜂种表达最为活跃的阶段。咽下腺发育过程中的共有蛋白为咽下腺发育所必需的管家蛋白,但它们的表达模式存在较大差异。不同日龄的特异蛋白表明咽下腺在不同的发育阶段需要不同的蛋白来调控。两蜂种工蜂咽下腺都从3日龄就开始分泌蜂王浆。