哇巴因结合肽拮抗哇巴因抑制钠泵作用的研究

目的 获得特异性的哇巴因结合肽 (OCP) ,拮抗或阻断哇巴因 (EO)对Na+ 、K+ ATP酶的抑制作用 ,为高血压的治疗提供理论和实验依据。方法 采用生物淘洗的方法 ,筛选噬菌体展示 12肽库。随机挑选所筛出的结合肽 ,经扩增、DNA提取及测序 ,获得其基因序列 ,然后推导出其氨基酸序列。选择序列一致率最高的肽序列 ,进行肽合成。采用红细胞86Rb摄取率实验测定OCP拮抗EO对Na+ 、K+ ATP酶的抑制作用。结果 Leu Leu Ala Asp Thr Thr His His Arg Pro Trp Thr为筛选肽序列一致率最高的肽序列。红细胞86Rb摄取实验结果表明 ,OCP可以阻断EO对红细胞膜钠泵的抑制作用 ,可以使红细胞摄86Rb率从 6 0 %升高到 80 %左右 ,呈现一定的剂量依赖关系。结论 本实验结果不仅获得了特异性OCP ,而且为高血压的治疗以及与EO相关疾病的诊断、治疗提供了一条新的途径。

特异性哇巴因结合肽的筛选及其结合活性的测定

目的 本研究的目的在于寻找特异性哇巴因结合肽(Ouabainconjugatedpeptide,OCP) ,降低哇巴因水平。 方法 利用噬菌体随机肽库表面呈现技术筛选出OCP ,通过测序 ,分析 ,获得氨基酸序列 ,合成筛选出的 12肽 ,采用放射性配基受体结合法 (radioligandbindingassay ,RRA)检测哇巴因结合肽与哇巴因的结合能力。结果 从噬菌体 12肽库中筛选出 3种多肽 ,其中肽A(12肽 )的筛选一致率达到 0 6 7(8/12 )。RRA实验结果显示 ,合成的肽与3 H ouabain具有一定的结合能力 ,平衡解离常数为 1 0 87nmol·L-1,受体密度为12 0pmol·g-1Pro ,IC50 =1 4 6× 10 -4mol·L-1,而且两者之间的结合无相互协同作用。结论 特异性OCP的获得 ,不仅获得了与哇巴因特异结合的蛋白质序列 。