盐酸哈尔酚骆驼蓬碱对人肝癌细胞生长的影响与自噬诱导作用的研究

目的探讨低剂量盐酸哈尔酚骆驼蓬碱(harmol hydrochloride dihydrate,HHD)对肝癌细胞株HepG2生长的影响及其自噬诱导作用。方法用不同浓度的HHD作用于肝癌细胞株HepG224 h后四甲基偶氮唑盐(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活力,用流式细胞仪检测细胞凋亡,用Hoechst和PI双重染色方法观察细胞凋亡,用蛋白质印迹(western blotting,WB)的方法检测LC-3Ⅱ表达水平。结果MTT检测结果显示不同浓度的HHD作用于HepG2细胞24 h后,细胞活力随HHD浓度升高而降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。0、0.005、0.01 mg/mL HHD作用于HepG2细胞24 h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组(P<0.05)。0.01 mg/mL的HHD处理HepG2细胞24 h后,凋亡小体的形成明显增多(P<0.05)。Western blotting法检测发现0.01 mg/mL HHD作用细胞24 h后自噬标记蛋白LC-3Ⅱ表达显著升高。结论HHD抑制肝癌细胞株HepG2在体外生长,其诱导细胞自噬可能是抑制作用机制之一。

Streptomyces griseus ATCC 13273对去氢骆驼蓬碱的转化研究

利用微生物转化的方法,选取灰色链霉菌(Streptomyces griseus ATCC 13273)为转化菌株,对去氢骆驼蓬碱的转化进行研究。该菌株可以将去氢骆驼蓬碱转化为两种转化产物(记为H1和H2),通过MS、1H-NMR和13C-NMR分析,转化产物分别鉴定为哈尔酚和N-羟基去氢骆驼蓬碱。并对转化条件进行初步优化,优化后的转化条件为:初始pH 8.0,两步活化法以4%的接种量转接,48 h后加入底物(以N,N-二甲基甲酰胺溶解),发酵液中去氢骆驼蓬碱终浓度为0.25 mmoL/L,发酵时间为5 d。转化条件优化后H1和H2的产率分别达到8.70%和12.76%;该研究丰富了S.griseus ATCC 13273的作用底物范围,为哈尔酚和N-羟基去氢骆驼蓬碱的合成提供了一条新途径。