卵孢小奥德蘑抗哈茨木霉菌株的筛选研究

以全国收集的26株卵孢小奥德蘑菌株为试材,采用人工抗逆境驯化和原生质体育种方法,研究了卵孢小奥德蘑菌株在逆境下的生长特性,以期为卵孢小奥德蘑优良菌株选育提供参考依据。结果表明:对采集的26株卵孢小奥德蘑菌株,经过(26℃,16 h;30℃,8 h)、(26℃,16 h;32℃,8 h)、(26℃,16 h;34℃,8 h)、(26℃,16 h;36℃,8 h)条件下进行耐高温菌株驯化,筛选出Sgw、H08gw、Lgw、Qgw、H09gw、H01gw等6株耐高温菌株;通过卵孢小奥德蘑菌株与哈茨木霉菌株的对峙试验,筛选出对木霉抗性较强的F2、Sgw、Lgw 3株菌株;以耐高温驯化菌株(Sgw、H08gw)、抗木霉菌株(F2、Sgw、Lgw)为母本进行原生质体融合,并在(26℃,16 h;32℃,8 h)条件下再生,筛选出4株抗逆性较强菌株Y1、Y4、Z1、Z9;经出菇验证,菌株Y4、Y1、Sgw耐高温,产量高,抗木霉污染。经对抗逆性菌株酶活性指标测定、抗性菌株转录组分析,发现抗木霉菌株菌丝细胞代谢能力,催化活性,细胞结构体等功能发生了变化,并通过信号转导、碳水化合物代谢、氨基酸代谢、过氧化物酶体等代谢通路,以达到抵御哈茨木霉侵染和高温胁迫的作用。Y4、Y1、Sgw菌株为该研究筛选的最终优良菌株,可作为生产上进一步优化培育。

哈茨木霉突变菌株hc-9对病原菌的拮抗作用

以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)突变菌株hc-9和出发菌株hc为试验材料,在25℃条件下,将其分别与四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)进行对峙培养,以明确哈茨木霉突变株对病原菌的拮抗作用。结果表明:哈茨木霉突变菌株hc-9与出发菌株hc相比,对四种病原真菌(立枯丝核菌、茄镰孢菌、核盘菌和茄链格孢菌)的抑制率不同,但对同种病原菌抑制率相近。由此可知,哈茨木霉突变菌株hc-9拮抗能力没有因抗性突变而降低,且哈茨木霉突变菌株hc-9的重寄生能力与哈茨木霉出发菌株hc相比没有明显差异。

哈茨木霉菌株WY-1对番茄的促生防病效果

以哈茨木霉(Trichoderma harzianum)菌株WY-1为研究对象,采用盆栽方法,测定不同浓度及施用方式对番茄幼苗的促生作用及常见病害的防控效果。结果表明,哈茨木霉菌剂浸种、灌根处理对番茄植株均有较好的促生作用,相对较为适宜的处理浓度为106CFU/m L;孢子浓度为106CFU/m L的哈茨木霉菌剂对番茄白粉病、灰霉病、叶霉病均有较好的防治效果,喷药后15 d对白粉病的相对防效为82.15%,对灰霉病、叶霉病喷药后接种、接种后喷药的相对防效分别为77.98%、56.82%和82.66%、72.37%。

紫外光诱导哈茨木霉产生腐霉利抗性菌株的研究

通过紫外光照射结合使用含药培养基培养得到了 3个哈茨木霉腐霉利抗性突变菌株。抗性菌株与亲本菌株相比较 ,其抗药性提高 1 0 0倍以上 ,与异菌脲、菌核净和甲基立枯磷存在交互抗性。抗性菌株在无药培养基上连续转移培养 8次 ,抗性程度未见下降。在适合度上 ,抗性菌株的菌丝生长速率有所下降 ,而在产孢能力、活体抑菌能力上有的抗性菌株要高于亲本菌株。

链霉菌菌株A与哈茨木霉T-23原生质体融合条件的研究

报道了链霉菌菌株和哈茨木霉菌株属间原生质体融合构建生防工程菌的前期研究成果 ,研究结果显示 :链霉菌菌株A与哈茨木霉T - 2 3分别以 10 0 0 μg/ml庆大霉素和 5 0～ 5 3℃热灭活 12 0min作为遗传标记 ;融合系统采用聚乙二醇 (PEG)作为促融剂 ,通过对PEG最佳分子量、浓度、处理时间的筛选 ,确立最佳融合技术系统 ,即内含 0 .0 5mol/LCa2 + 的 35 %PEG6 0 0 0 ,融合处理15min。所得融合子经过选择再生培养基培养后 ,在 132株融合子中初步筛选出 2株稳定的融合子。经孢子大小和DNA含量测定 ,确立一株为单倍重组体 。

哈茨木霉NF9菌株对水稻的诱导抗病性

在温室条件下用哈茨木霉NF9菌株进行种子处理,诱导水稻感病品种原丰早幼苗对稻瘟病和白叶枯病的抗病性,其抗性水平为中抗,对稻瘟病菌不同菌株(SY1、H16)以及对白叶枯病菌不同菌株(CR1、CR7)的抗性表现无显著差异。经木霉种子处理的水稻幼苗接种稻瘟病菌或白叶枯病菌后,过氧化物酶及苯丙氨酸转氨酶活性增强,在某一时段显著高于未经木霉种子处理的对照。诱导抗性可能是哈茨木霉NF9菌株的生防机制之一。

哈茨木霉 C184菌株对喀麦隆香蕉及大蕉根部病原菌的体外拮抗作用 (英文 )

体外测定了新近分离自喀麦隆香蕉及大蕉田间的哈茨木霉 (Trichoderma harzianum)菌株C184对香蕉和大蕉根部病原菌柱枝孢 (Cylindrocladium pteridis)及茄镰孢 (Fusarium solani) ,尖镰孢(Fusarium oxysporum)和曲霉 (Aspergillus sp.)的拮抗作用。在对峙培养中上述病原菌菌丝生长均受到明显抑制 ;在赛咯酚分层培养中木霉菌株对上述病原菌菌丝生长的抑制率为 6 7%～ 88% ;木霉菌株培养滤液对上述病原菌菌丝生长的抑制率为 5 2 %～ 87%。电镜下观察到木霉菌株对柱枝孢及镰孢霉的寄生过程 ,认为这可能是主要拮抗机制之一 ;此外木霉菌株在液体培养中产生的抗生素及细胞壁降解酶也可能是抑制病原菌菌丝生长的主要原因。

拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件优化

【目的】优化拮抗木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件,快速、高效获得绿色荧光标记菌株,为哈茨木霉及同类真菌的GFP标记提供参考,并为下一步研究其在不同环境中的定殖动态、分布规律及生防特性等打下基础。【方法】采用PEG-Ca Cl2介导的原生质体转化体系,从木霉菌株的菌龄、酶解时间、转化体系中质粒的含量及再生培养基中潮霉素B(Hm B)的浓度等方面对哈茨木霉gz-2菌株原生质体制备及转化条件进行优化,获得表达稳定的转化子,并与出发菌株的生长特性进行比较,评价转化效果。【结果】gz-2菌株培养36 h菌丝所形成的原生质体稳定性最好,菌丝体酶解3.5 h获得的原生质体数量最多,达11.67×106个/m L;每240μL转化体系中质粒DNA含量为40μL,得到的转化子数量最多,为8.67个/皿;再生培养基中Hm B含量为600μg/m L时可获得稳定的强转化子。【结论】筛选获得1株表达稳定的转化子GFP-gz-2菌株,该菌株在菌落形态、菌丝生长速率及产孢量上与出发菌株gz-2无显著差异,且具有较好的遗传稳定性。

玉米茎腐病生防菌哈茨木霉CCTH-2鉴定及其生物学特性

玉米茎腐病(CSR)对玉米产量和品质危害巨大。为尽快展开玉米茎腐病的有效防治,将吉林省玉米茎腐病的优势致病菌禾谷镰孢,与14株从玉米根际土壤中分离得到木霉菌株分别进行平板对峙试验。观察木霉对禾谷镰孢的抑制作用,筛选得到抑制效果较好的菌株CCTH-2和CCTH-6。复筛通过这2株木霉的发酵液、易挥发性代谢产物、难挥发性代谢产物对禾谷镰孢的抑制效果和对其他病原真菌的抑制效果,最终筛选到一株具有良好防效的木霉菌株CCTH-2;CCTH-2经过形态学和分子生物学鉴定显示,为哈茨木霉,并对其生物学特性进行初步研究。结果表明,平板对峙培养条件下CCTH-2对禾谷镰孢抑制率为82.83%,其发酵液、易挥发代谢物和难挥发代谢物对禾谷镰孢的抑制率为36.56%,46.75%,32.48%,具有显著抑制效果。生物学特性试验显示,CCTH-2菌落生长和产孢的最适培养基为PDA,最适温度为25℃,最适光照条件为全光照,外源添加Fe^(2+)有利于CCTH-2的生长发育,并且CCTH-2具有一定的适应环境酸碱度和盐含量变化的能力。因此,可以确认哈茨木霉CCTH-2是一株有着良好防效且潜力巨大的生防菌。

高温胁迫对香菇菌丝生长及其抗哈茨木霉能力的影响

拮抗和接种试验表明，胁迫温度及其处理时间共同影响香菇（Lentinulaedodes）菌丝生长及其抵抗哈茨木霉（Trichodermaharzianum）侵染的能力，3个供试菌株Q7、L607和Y2对高温胁迫的耐受能力不同，37～42℃短时间胁迫处理对菌丝生长及其抗哈茨木霉能力没有明显影响。Q7在37℃处理24h或39℃处理18h和24h，Y2在39℃处理24h和48h，菌丝体转移至PDA中正常温度（25℃）均能继续生长，

哈茨木霉T28发酵液提取物对致病疫霉的抑制及对体内酶活性的影响

为了更深入的探讨哈茨木霉菌株T28发酵液乙酸乙酯提取物对致病疫霉生长的抑制作用和机制,采用不同浓度的发酵液乙酸乙酯提取物对致病疫霉进行抑菌试验以及对其体内几种生理代谢酶活性影响进行试验。结果表明:不同浓度的提取物对致病疫霉菌丝生长、孢子囊萌发、孢子囊释放游动孢子均有抑制作用,其中稀释浓度为10倍和100倍时抑制效果较好,均与浓缩液无显著性差异。经提取物处理后致病疫霉菌体48h,与对照相比其保护酶(SOD、CAT、POD、GSH-Px)活性分别下降89.06%,86.96%,97.47%和97.63%,糖代谢酶(HK、PK、LDH)和TCA有氧分解代谢酶(SDH、MDH)分别下降93%,89.56%,88.5%,97.66%和97.43%,能量代谢酶(ATP)活性下降了98.5%和98.67%,MDA含量上升60.98%。研究表明哈茨木霉菌株T28发酵液乙酸乙酯提取物可降低致病疫霉菌体的代谢酶活性,提高菌体MDA含量。提取物处理后致病疫霉菌体遭受损坏,其糖代谢、三羧酸循环、能量代谢等生理活动不能正常进行,这可能是哈茨木霉菌株T28发酵液乙酸乙酯提取物抑制致病疫霉生长的机制之一。

木霉菌对杂交水稻生长影响差异的研究

[目的]通过比较哈茨木霉(Trichoderma harzianum)抗药性标记菌株TUV-13和野生型菌株T2-16对水稻生长影响的差异,筛选出对水稻生长有更好促进作用的菌株,进一步推动木霉生防菌株在水稻上的应用。[方法]采用不同浓度的TUV-13和T2-16孢子悬浮液对水稻进行人工接种(浸种处理),确定最适浸种浓度;室外盆栽试验采用常规方法测定水稻各个生长势指标。[结果]确定TUV-13和T2-16最适浸种浓度均为1×105个/ml;用此浓度的孢子悬浮液浸种均能提高种子活力,且TUV-13对水稻萌发的促进作用更显著,幼苗鲜重比经T2-16浸种处理增加4.85%,活力指数提高5.96%。盆栽试验显示,2个处理均能促进水稻植株根系和地上部分的生长,经TUV-13孢子悬浮液浸种的效果最显著。[结论]TUV-13对T优6135的生长具有更显著的促进作用,显示出TUV-13在水稻应用上的巨大潜力。

哈茨木霉在水稻体内的定殖及其对水稻纹枯病抗性的影响

以具有抗腈菌唑标记哈茨木霉TUV-13菌株的分生孢子悬浮液对水稻种子分别进行浸种、蘸根、叶面接种,栽培至2叶1芯期,从秧苗各组织分离回收菌株TUV-13。对经菌液处理的秧苗进行显微及超微观察结果表明,浸种处理能使TUV-13菌株在水稻秧苗的根、茎、叶中稳定定殖;而蘸根处理、叶面接种,TUV-13菌株只能在处理的局部区域定殖。TUV-13菌株定殖后,水稻秧苗与抗病相关的酶活性显著提高,对水稻纹枯病防效达82.9%。

草果疫病初步研究

从发病的草果茎杆上组织分离得到草果疫病病菌,用不同农药进行药剂筛选试验,经哈茨木霉(Trichoderma harzimum)不同菌株和病菌在PDA平板上对峙培养,结果表明:易保1000倍药液下病菌菌丝无法生长,百菌清600倍、易保1500倍、春雷霉素400倍药液对病原菌菌丝生长抑制率在60%以上;哈茨木霉不同菌株对草果疫病病原菌有很好的抑制力,且药物诱变和紫外线诱变的突变菌株抑菌效果比野生型菌株好。

草果叶斑病防治初步研究

从发病的草果叶片上分离得到草果叶斑病病原菌,进行药剂筛选试验,把不同处理的哈茨木霉(Tri-choderma harzimum)菌株和病原菌对峙培养,结果表明:春雷霉素400倍药液下病菌菌丝无法生长,金歌1 500倍、多菌灵800倍、易保1000倍、春雷霉素500倍药液对病原菌菌丝生长抑制率在61%以上;不同处理的哈茨木霉菌株对草果叶斑病病原菌均有抑制效果,且药物诱变和紫外线诱变的突变菌株比野生型菌株抑菌效果显著。