人脐带间充质干细胞来源外泌体降低脊髓损伤后血脊髓屏障的通透性

背景:研究发现,内皮素参与了脊髓损伤后血脊髓屏障的破坏,干细胞来源外泌体可降低血脊髓屏障的通透性,修复脊髓损伤。目的:观察人脐带间充质干细胞来源外泌体是否可以通过抑制内皮素1表达降低血脊髓屏障的通透性,进而修复脊髓损伤。方法:用超速离心法从人脐带间充质干细胞培养上清液中提取外泌体,透射电子显微镜观察其形态,Western blot检测tsg101、CD63的表达。80只SD大鼠随机分成假手术组、模型组、外泌体组、内皮素1组(n=20),采用改良Allen’s法制备大鼠脊髓损伤模型,内皮素1组用微量注射器直接向损伤部位注射10μL(1μg/mL)内皮素1,术后即刻及1,2 d,分别给予假手术组、模型组尾静脉注射200μL PBS,外泌体组、内皮素1组尾静脉注射200μL外泌体(200μg/mL)。脊髓损伤后第1,3,7,14,21天进行后肢运功功能评分;损伤后第7天通过伊文思蓝染色观察血脊髓屏障通透性,Western blot检测脊髓组织中紧密连接蛋白ZO-1、β-Catenin、Occludin和内皮素1的表达。结果与结论:①外泌体组BBB评分在损伤后3-21 d显著高于模型组(P<0.05),苏木精-伊红染色显示外泌体组脊髓损伤较模型组明显减轻;内皮素1组BBB评分较外泌体组显著降低(P<0.05),内皮素1组脊髓损伤较外泌体组加重;②模型组内皮素1表达量较假手术组显著增加(P<0.05),外泌体组内皮素1表达量较模型组显著降低(P<0.05);③与模型组比较,外泌体组血脊髓屏障伊文思蓝渗出量显著减少(P<0.05),紧密连接蛋白β-Catenin、Occludin、ZO-1的表达增加(P<0.05);与外泌体组比较,内皮素1组伊文思蓝渗出量显著增加(P<0.05),上述紧密连接蛋白表达量显著减少(P<0.05);④结果表明,人脐带间充质细胞来源外泌体通过下调内皮素1表达来保护血脊髓屏障的通透性,起到了修复脊髓损伤的作用。

补肾活血方促进脂肪间充质干细胞类髓核分化的作用机制

背景:干细胞移植是防治椎间盘退变的新思路,但移植后的干细胞如何顺利存活、增殖、分化,并恢复髓核细胞功能,是目前亟需克服的重点和难点。目的:探讨补肾活血方对脂肪间充质干细胞存活、增殖、类髓核分化的影响。方法:采用Transwell小室构建人脂肪间充质干细胞和人退变髓核细胞共培养模型。实验分为对照组、模型组、含药血清组、无药血清组,除对照组外,其余各组均用50μmol/L叔丁基过氧化氢干预24 h,然后含药血清组和无药血清组分别予以含体积分数20%补肾活血方含药血清或无药血清的DMEM低糖完全培养液干预48 h,取下层脂肪间充质干细胞,甲苯胺蓝染色法观察蛋白聚糖合成水平,Real-Time PCR法检测Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9的mRNA表达,Western blot法检测SOX9的蛋白表达,乳酸脱氢酶法检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞活性氧水平,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况。结果与结论:①与对照组相比,模型组坏死脱落细胞比例增加,甲苯胺蓝染色变浅,Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA和SOX9蛋白表达水平下降(P<0.05);与模型组相比,补肾活血方含药血清可显著减轻细胞损伤并促进Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、SOX9 mRNA和SOX9蛋白表达(P<0.05),但无药血清组改善不明显(P>0.05);②与对照组相比,模型组细胞毒性、活性氧水平、细胞衰老水平显著增加;与模型组相比,补肾活血方干预后共培养体系微环境得到明显改善(P<0.05),无药血清对共培养体系微环境改善作用不明显(P>0.05);③结果表明,补肾活血方可以促进脂肪间充质干细胞存活、增殖、类髓核分化。

脐血间充质干细胞来源外泌体治疗糖尿病足的研究进展

糖尿病足溃疡(DFU)是糖尿病最严重的慢性并发症之一,主要由外周血管闭塞引起,并伴有不同程度的感染。糖尿病足溃疡的治疗在临床医学中极具挑战性,它带来了坏疽、截肢甚至死亡风险。人脐血间充质干细胞来源的外泌体(HUMSCs-Exos)具有组织修复和再生的潜力,在支持或加速伤口愈合过程中的潜在用途已引起越来越多的关注。现对人脐血间充质干细胞来源的外泌体的生物学特性和功能、在糖尿病足溃疡创面愈合中的作用机制及给药方式进行综述,旨在为糖尿病足溃疡的治疗提供新思路。

脐带血间充质干细胞对角膜新生血管形成的抑制作用

目的:研究球结膜下注射人脐带血来源的间充质干细胞悬液治疗角膜碱烧伤新生血管的有效性。方法:本研究将30只新西兰家兔制备右眼碱烧伤模型,随机分实验组和对照组各15只(15眼)。实验组球结膜下注射脐带血来源间充质干细胞悬液,对照组不给予球结膜下治疗。采用裂隙灯生物显微镜观察并拍照记录注射后第5天,14天角膜新生血管情况,计算角膜新生血管面积。取两组角膜进行HE染色,观察角膜上皮愈合情况。结果:实验结果显示,第5天实验组和对照组之间的角膜新生血管面积差异没有显著性统计意义(P > 0.05),但第14天实验组的新生血管面积显著小于对照组(P < 0.05)。结论:本研究结果证明,球结膜下注射人脐带血间充质干细胞可抑制角膜新生血管并促进碱烧伤角膜上皮的修复。

人脐带间充质干细胞来源外泌体在肾缺血-再灌注损伤中的保护作用及其机制研究

目的探究人脐带间充质干细胞来源外泌体(hucMSC-Exo)在肾缺血-再灌注损伤(IRI)中的保护作用,明确瞬时受体电位阳离子通道蛋白(TRPC)6/聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)1信号通路在该过程中的重要作用及其调控机制。方法采用超速离心法提取hucMSC-Exo,通过透射电子显微镜(透射电镜)、纳米颗粒追踪分析和蛋白质印迹法对其进行鉴定。将SD大鼠随机分成假手术组(S组)、假手术+TRPC6抑制剂SKF96365组(SS组)、肾IRI组(IRI组)、外泌体处理组(EXO组)、外泌体+TRPC6抑制剂SKF96365组(ES组),每组6只。检测血清肌酐和血尿素氮水平,苏木素-伊红(HE)染色观察肾组织病理学改变并行Paller评分,蛋白质印迹法检测大鼠肾组织中坏死性凋亡关键分子,包括受体相互作用蛋白激酶(RIPK)1、RIPK3和混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)、TRPC6和PARP1的表达水平。结果透射电镜下观察到典型茶托样结构,纳米颗粒追踪分析结果显示所提取物质的平均直径为125.9 nm,蛋白质印迹法检测其表面标志CD9、CD63、CD81表达阳性,证实提取物为外泌体。与S组比较,IRI组血清肌酐、血尿素氮水平增加,肾组织病理损伤加重,Paller评分增加,TRPC6、PARP1蛋白相对表达量下降,RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白相对表达量增加(均为P<0.05);与IRI组比较,EXO组血清肌酐、血尿素氮水平降低,肾组织病理损伤减轻,Paller评分降低,TRPC6、PARP1蛋白相对表达量增加,RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白相对表达量下降(均为P<0.05);与EXO组比较,ES组血清肌酐、血尿素氮水平增加,肾组织病理损伤加重,Paller评分增加,TRPC6、PARP1蛋白相对表达量下降,RIPK1、RIPK3、MLKL蛋白相对表达量增加(均为P<0.05)。结论hucMSC-Exo可减轻大鼠肾IRI所致的坏死性凋亡,其保护机制与TRPC6/PARP1通路激活有关。

中药联合骨髓间充质干细胞调控脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的作用机制

背景:缺血性脑卒中是引起死亡和长期残疾的主要原因之一,且发病率仍在逐年上升,严重影响生存质量。血脑屏障损伤是导致脑缺血再灌注损伤预后不良的重要病理过程,但由于目前治疗方法有限,且受多种因素限制,急需寻求新的治疗方法修复血脑屏障损伤。目的:对中药联合骨髓间充质干细胞调控脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的相关机制进行综述,以便深入挖掘保护血脑屏障的新途径,为临床治疗提供辅助。方法:以“traditional Chinese medicine;bone marrow mesenchymal stem cells;blood-brain barrier;cerebral ischemia reperfusion injury”为英文关键词;以“中药,骨髓间充质干细胞,血脑屏障,脑缺血再灌注损伤”为中文关键词,检索万方、CNKI、PubMed、Web of Science等数据库2012-2022年期间文献,纳入血脑屏障受损相关机制及中药联合骨髓间充质干细胞调控血脑屏障相关机制的文献,排除陈旧及不符合标准的文献,共纳入97篇文献进行分析总结。结果与结论:(1)梳理了血脑屏障的生理结构与脑缺血再灌注损伤发生后血脑屏障结构的病理变化;(2)总结了中药联合骨髓间充质干细胞调控脑缺血再灌注损伤后血脑屏障的机制:包括调控紧密连接蛋白表达、抑制水通道蛋白4、基质金属蛋白酶9活性、促进血管新生、抑制炎性递质释放、调控外泌体;(3)总结发现中药联合骨髓间充质干细胞能改善受损血脑屏障通透性,为临床治疗效果提供辅助。

电针联合人脐带间充质干细胞移植对缺血性脑损伤大鼠血脑屏障及腺苷A2A受体、GSK-3β/β-catenin表达的影响

【目的】观察电针百会、风府、双侧肾俞穴联合人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)移植对缺血性脑损伤大鼠的脑保护作用及机制。【方法】将40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、移植组、联合组,每组10只。除正常组,其他各组大鼠建立脑缺血再灌注损伤模型。在造模结束24 h后,移植组大鼠给予0.5 m L 2×10^(6)个hUC-MSCs细胞悬液一次性尾静脉植入,联合组在移植组治疗基础上,给予电针百会穴、风府穴、双侧肾俞穴,每次30 min,每日1次,连续针刺3周。治疗结束后,苏木素-伊红(HE)染色法观察海马组织病理形态,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法观察脑组织细胞凋亡情况,免疫荧光法检测脑组织腺苷A2A受体(ADORA2A)表达,免疫组织化学法检测脑组织糖原合酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达,Western Blot法检测脑组织跨膜蛋白闭锁蛋白(Occludin)、胞质附着蛋白(ZO-1)表达。【结果】与正常组比较,模型组脑组织细胞凋亡率升高,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平升高,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平降低(P<0.05),HE染色结果显示,模型组海马组织结构明显异常;与模型组比较,移植组和联合组大鼠脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),海马组织病理程度明显减轻;与移植组比较,联合组脑组织细胞凋亡率降低,脑组织ADORA2A阳性表达率及GSK-3β蛋白表达水平降低,Occludin、ZO-1、β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。【结论】电针百会、风府、双侧肾俞穴联合hUC-MSCs可改善缺血性脑损伤大鼠血脑屏障,抑制脑组织ADORA2A、GSK-3β表达,提高β-catenin表达,抑制脑组织细胞凋亡,起到脑保护作用,且作用效果优于单纯hUC-MSCs移植。

基于Wnt/β-catenin信号通路的复方补肾活血颗粒对骨髓间充质干细胞成骨、成脂分化的影响

目的基于Wnt/β-catenin信号通路探讨复方补肾活血颗粒含药血清对人骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨、成脂分化的影响。方法取骨质疏松症患者骨髓,体外培养BMSCs,将细胞分为空白组和含药血清低、中、高剂量组(2%、5%、8%),CCK-8法检测细胞活力,碱性磷酸酶染色、茜素红染色观察成骨分化潜能,油红O染色观察成脂分化潜能,RT-PCR检测成骨分化相关基因Runt相关转录因子2(RUNX2)、Osterix(Osx)和成脂分化相关基因CCAAT/增强子结合蛋白α(C/EBPα)、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)γmRNA表达,Western blot检测RUNX2、Osx、C/EBPα、PPARγ、低密度脂蛋白受体相关蛋白(LRP)5及β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果与空白组比较,含药血清各剂量组细胞活力显著升高,其中以含药血清中剂量组效果最佳;含药血清各剂量组可促进BMSCs早期钙化和钙沉积形成,抑制脂滴形成;含药血清各剂量组BMSCsRUNX2、OsxmRNA和蛋白表达升高,C/EBPα、PPARγmRNA和蛋白表达降低,LRP5和β-catenin蛋白表达明显升高,其中含药血清高剂量组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论复方补肾活血颗粒含药血清对BMSCs成骨分化相关因子表达有明显促进作用,并可抑制BMSCs成脂分化,其机制与激活Wnt/β-catenin信号通路,进而调节成骨-成脂平衡有关。

补肾生血药对顺铂损伤的小鼠骨髓间充质干细胞的影响

目的:观察补肾生血药对顺铂损伤的骨髓间充质干细胞(BMSC)的影响,探讨补肾生血改善化疗后骨髓抑制的机制。方法:将50只SD雄性大鼠随机分为空白对照组、补肾生血药组,每组25只,分别制备补肾生血血清和空白血清,原代培养BALB/c小鼠BMSC,随机分组,CCK-8法确定顺铂和补肾生血血清干预浓度。干预48 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,酶联免疫吸附试验法检测培养液中造血调控因子含量。结果:干预48 h后,骨髓细胞凋亡率明显增高(P<0.01),补肾生血血清组G_(1)期细胞比例显著降低(P<0.05),S期细胞比例显著增加(P<0.05),增殖期细胞比例明显增加(P<0.05)。补肾生血血清组骨髓细胞凋亡率明显降低(P<0.001),G_(1)期细胞比例显著降低(P<0.05),增殖期细胞比例显著增加(P<0.05),IL-3含量明显升高(P<0.01),TNF-α、TGF-β、IFN-γ含量显著降低(均P<0.05)。结论:补肾生血药能减轻顺铂造成的BMSC凋亡,促进细胞进入增殖期,促进造血生长因子分泌,减少造血抑制因子分泌,提示该药对化疗后骨髓抑制具有一定的改善作用。

人脐血间充质干细胞激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B通路对脑缺血再灌注大鼠的神经保护作用

目的探究人脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCBMSCs)调控磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide3-kinase/protein kinase B,PI3K/Akt)通路对脑缺血再灌注损伤大鼠周细胞表达和神经功能变化的影响。方法取雄性SD大鼠共72只,随机分组为假手术组、模型组、干细胞组、干细胞+抑制剂组,每组18只。除假手术组外,剩余各组均建立脑缺血再灌注模型。造模成功后,模型组尾静脉注射0.1 mL的磷酸盐缓冲盐溶液(phosphate-buffered saline,PBS),干细胞组尾静脉注射0.1 mL含有2×106个hUCBMSCs的PBS,干细胞+抑制剂组尾静脉注射0.1 mL含2×106个hUCBMSCs的PBS及腹腔注射PI3K/Akt抑制剂LY294002(0.03 mg/100 g),LY294002每天给药1次,直至处死。术后1、3、7、14 d测定改良神经功能缺损评分(modified neurological severity scores,mNSS)。术后7、14 d,采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色法检测大鼠脑梗死面积,尼氏染色检测大脑皮质缺血半暗带正常神经元细胞数,免疫组织化学法检测大脑皮质缺血半暗带血小板衍生生长因子受体-β(platelet derived growth factor receptor-β,PDGFRβ)阳性周细胞的数量,免疫印迹法检测大脑皮质缺血半暗带PI3K/Akt通路相关蛋白p-Akt及Akt的表达。结果术后7 d,4组各项指标整体差异均有统计学意义(P<0.001)。与假手术组比较,模型组的大鼠正常神经元细胞数[(55.42±4.75)个vs.(8.50±1.64)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(1.00±0.00 vs.0.47±0.06,P=0.002)均降低,脑PDGFRβ+周细胞数量[(1.08±0.29)个vs.(13.67±2.47)个,P<0.001]增加;与模型组比较,干细胞组大鼠的mNSS评分[(6.33±0.71)分vs.(4.78±0.98)分,P<0.001]和脑梗死率(32.66%±1.76%vs.14.60%±0.52%,P<0.001)均降低,正常神经元细胞数[(8.50±1.64)个vs.(23.17±1.77)个,P<0.001]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(13.67±2.47)个vs.(28.50±3.19)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.47±0.06 vs.0.83±0.18,P=0.017)均增加;与干细胞组比较,干细胞+抑制剂组的大鼠mNSS评分[(4.78±0.98)分vs.(6.11±0.78)分,P=0.002]和脑梗死率(14.60%±0.52%vs.27.85%±0.59%,P<0.001)均增加,正常神经元细胞数[(23.17±1.77)个vs.(11.83±0.88)个,P=0.003]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(28.50±3.19)个vs.(20.33±1.44)个,P=0.007]和p-Akt/Akt(0.83±0.18 vs.0.36±0.11,P=0.003)均降低。术后14 d,4组各项指标整体差异均有统计学意义(P<0.001)。与假手术组比较,模型组的大鼠正常神经元细胞数[(57.08±3.79)个vs.(11.25±5.52)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(1.00±0.00 vs.0.53±0.12,P=0.002)均降低,脑PDGFRβ+周细胞数量[(2.00±0.25)个vs.(13.42±1.04)个,P<0.001]增加;与模型组比较,干细胞组大鼠的mNSS评分[(4.89±0.78)分vs.(2.33±0.87)分,P<0.001]和脑梗死率(32.58%±1.96%vs.11.78%±1.92%,P<0.001)均降低,正常神经元细胞数[(11.25±5.52)个vs.(31.00±1.89)个,P<0.001]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(13.42±1.04)个vs.(31.42±3.66)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.53±0.12 vs.0.93±0.12,P=0.004)均增加;与干细胞组比较,干细胞+抑制剂组大鼠的mNSS评分[(2.33±0.87)分vs.(4.44±0.53)分,P<0.001]和脑梗死率(11.78%±1.92%vs.25.25%±2.76%,P<0.001)均增加,正常神经元细胞数[(31.00±1.89)个vs.(13.83±1.04)个,P=0.002]、脑PDGFRβ+周细胞数量[(31.42±3.66)个vs.(20.67±1.42)个,P<0.001]和p-Akt/Akt(0.93±0.12 vs.0.53±0.09,P=0.005)均降低。结论hUCBMSCs可能通过激活PI3K/Akt通路促进周细胞的存活募集,发挥神经保护的作用,进而促进脑缺血再灌注损伤大鼠的神经功能恢复。

人脐血间充质干细胞(hUCMSCs)复合PHAs生物材料诱导软骨再生的研究

目的:研究人脐血间充质干细胞(Human umbilical cord mesenchymal stem cells,hUCMSCs)经基因诱导成软骨后复合支架材料,构建组织工程软骨,探究软骨再生过程中,移植物在宿主体内的营养代谢及宿主免疫反应。方法:从人脐带血中分离、扩增、培养人脐血间充质干细胞并鉴定;在倒置相差显微镜观察细胞的形态,成软骨诱导后复合支架载体,体外共培养1周,植入SD大鼠体内,分时段取材(7d,14d,28d)后,进行大体形态学观察,组织化学染色、软骨特异性基质成分蛋白多糖及Ⅱ型胶原纤维的表达变化检测;对照组SD大鼠移植同种异体胸骨剑突软骨;空白对照组SD大鼠不做任何处理。结果:HE染色结果显示:实验组和对照组炎症反应未见明显差异。大体形态学观察及组织学染色结果均显示,实验组28d左右可见成熟软骨形成。糖蛋白多糖检测结果显示新生软骨组织在实验组和对照组无显著差异。宿主表现为局部的纤维囊壁包裹弱炎症反应。结论:hUCMSCs构建的组织工程软骨,软骨再生情况良好,支架材料按时吸收,宿主弱免疫反应,在干细胞治疗软骨缺损方面显示出了一定的临床潜力。

低氧支持的脐带间充质干细胞对脐血单个核细胞体外扩增的影响

目的:探讨低氧支持的脐带间充质干细胞(UC-MSC)对人脐血单个核细胞的体外扩增的影响。方法:将分离的脐血单个核细胞(MNC)接种在预先建立的UC-MSC层上,在低氧(3%O2)条件下分组培养,实验分组为常氧(常氧^(+)脐血MNC)、低氧(低氧^(+)脐血MNC)、UC-MSC(常氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)、UC-MSC^(+)低氧(低氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)共4组。为进一步探讨SCF^(+)FL^(+)TPO(SFT) 3种因子组合在低氧支持的UC-MSC培养体系中脐血MNC体外扩增的作用,实验进一步分组为A(常氧^(+)UC-MSC^(+)SFT^(+)脐血MNC)、B组(低氧^(+)UC-MSC^(+)脐血MNC)、C(低氧^(+)UC-MSC^(+)SFT^(+)脐血MNC)共3组,培养0、7、10、14 d检测各组总有核细胞数(TNC)、 CD34^(+)细胞数、集落形成单位(CFU)数及CD34^(+)CXCR4^(+)、CD34^(+)CD49d^(+)、CD34^(+)CD62L^(+)细胞数并进行比较分析。结果:UC-MSC^(+)低氧组较低氧组、UC-MSC组能有效地扩增脐血TNC、CD34^(+)细胞、CFU数(P<0.05),并可明显提高脐血CD34^(+)细胞上黏附分子和CXCR4的表达(P<0.05);经过14 d的培养,C组各时间点检测指标水平均明显高于A、B组(P<0.05),A组7、10 d扩增效果明显优于B组(P<0.05)。结论:低氧支持的UC-MSC可有效扩增脐血造血细胞,加入SFT因子组合可明显扩增脐血MNC并能提高脐血CD34^(+)细胞上黏附分子和CXCR4的表达。

补肾活血解毒方联合脐带间充质干细胞外泌体移植对急性肝衰竭的影响

目的:探讨中药补肾活血解毒方联合大鼠脐带间充质干细胞外泌体(UCMSCs–EXO)移植调控转化生长因子β1(TGF–β1)/Smad通路对急性肝衰竭模型肝细胞凋亡和肝功能的影响。方法:取健康成年SD大鼠,随机分组给药后制备含药血清。取健康SD大鼠随机分为联合给药组、外泌体对照组、中药对照组、空白对照组和正常组,除正常组外均进行造模成功后并给药处理,对大鼠肝功能指标进行测定。肝卵圆细胞和原代肝细胞培养后分别加入不同的含药血清,孵育后诱导细胞凋亡。凋亡诱导结束后,细胞计数试剂盒–8(CCK–8)法检测细胞活性,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;免疫荧光法检测凋亡肝细胞TGF–β1表达,Western blot法对细胞中Smad2/3磷酸化(P–Smad2/3)、Smad7、TGF–βⅡ型受体磷酸化(P–TβRⅡ)和TGF–β1蛋白表达进行检测。结果:联合给药组、外泌体对照组、中药对照组大鼠的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平均低于空白对照组大鼠(P<0.05),且联合给药组大鼠的AST和ALT水平低于外泌体对照组、中药对照组大鼠(P<0.05);联合给药组细胞活性高于外泌体对照组和中药对照组(P<0.05);联合给药组凋亡细胞少于外泌体对照组和中药对照组(P<0.05);联合给药组的TGF–β1表达低于外泌体对照组、中药对照组细胞(P<0.05);联合给药组P–TβRⅡ、P–Smad2/3、TGF–β1蛋白表达低于外泌体对照组和中药对照组,Smad7蛋白表达高于外泌体对照组和中药对照组(P<0.05)。结论:中药补肾活血解毒方结合UCMSCs–EXO能够改善急性肝衰竭大鼠肝功能并且能够通过调控TGF–β1/Smad通路抑制急性肝衰竭模型肝细胞凋亡。

脐血间充质干细胞移植对脑梗塞大鼠模型神经功能的影响

目的 探讨人脐血间充质干细胞移植对脑梗死大鼠神经功能的影响。方法 选取48只SD大鼠,随机分为4组,每组12只,分别为空白组、模型组、PBS组和移植组。空白组为正常老鼠,不做任何处理,其余3组均采用线栓法制作脑梗死大鼠模型,模型组只做成大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,移植组于造模成功后1 d经鞘内移植含1×106个脐血间充质干细胞的细胞悬液10μL;PBS组经同样方法注射10μL PBS溶液。移植后第1、3、7天进行神经功能评分,于第3、7天进行尼氏体计数、TUNEL法检测神经元细胞凋亡率、TTC评价梗死体积。结果 (1)与空白组相比,模型组和PBS组的神经功能评分、梗死体积及细胞凋亡数明显增加,尼氏体明显减少(P<0.05);(2)与模型组和PBS组相比,移植组梗死体积明显减小,细胞凋亡减少,尼氏体明显增多,神经功能评分明显改善(P<0.05)。结论 脐血间充质干细胞通过抑制细胞凋亡,缩小梗死体积,有效促进了脑梗死大鼠神经功能的恢复。

人骨髓间充质干细胞对脐血T淋巴细胞转化的影响

为研究间充质干细胞 (mesenchymalstemcell,MSC)的免疫调节作用 ,从人骨髓中分离培养间充质干细胞 ,并通过其形态的均一性及流式细胞术检测其表面标志以鉴定其纯度。将分离培养的间充质干细胞接种于 96孔板中 (分别为 2 0 0 0个 孔组与 10 0 0个 孔组 ) ,与经分离的脐血T淋巴细胞共培养 3天 ,以单独培养的脐血T淋巴细胞为对照组 ,加入植物血凝素 (PHA)刺激 6 0小时 ,H3 TdR标记后用液体闪烁计数仪检测 ,以观察MSC对脐血T淋巴细胞转化的影响。结果显示 ,当接种 2 0 0 0个MSC时 ,其对T细胞的增殖起抑制作用 (抑制率为 33.4 % ) ;而接种 10 0 0个MSC时 ,其对T细胞的增殖起促进作用 (促进率为 2 2 .5 % )。由此得出结论 ,MSC免疫调控作用与其加入细胞数量相关 ,当MSC数量多时表现为负调控 。

外胚层间充质干细胞的获取及应用

背景:外胚层间充质干细胞是一种成体干细胞,获取便捷、来源丰富,在机体组织修复与免疫调节等方面发挥着重要作用。目的:总结综述外胚层间充质干细胞获取与应用方面的最新进展。方法:检索Web of Science数据库中相关文章,检索词为“Ectodermal mesenchymal stem cells,Stem cell therapy,Spinal cord injury,Neurodegenerative disease,sepsis”,检索要求为研究原著与综述,检索时限为数据库建库至2021年,筛选出相关文献85篇,结合文献追溯法对所得文献进行分析总结。结果与结论:①外胚层间充质干细胞来源丰富、获取简便,其来源可以是牙组织、鼻黏膜和角膜组织等。与中胚层间充质干细胞相同的是,它们都具备多系分化能力和免疫调节功能。②而外胚层间充质干细胞与牙组织与神经组织具有同源性,因此具备更好的牙细胞、神经细胞分化能力,在牙组织修复、脊髓损伤修复、神经退行性疾病治疗等方面具有独特的优势,因此具备极为广阔的应用前景。③外胚层间充质干细胞的免疫调节功能同样不能忽视,目前虽仅有少量文献报道将其应用于脓毒血症等免疫疾病,但研究发现其免疫调节机制与中胚层间充质干细胞等并无二致,同时其还具备获取方式相对低损伤性等优势,因此外胚层间充质干细胞具有极佳的临床应用前景。

间充质干细胞与脐血联合移植的Ⅰ期临床观察

为促进无关供体脐血移植( UD- UCBT)患儿的造血干细胞( HSC)植入和造血恢复,我们在 2001年 9月至 2003年 3月,以自体或异基因双亲(母亲或父亲)骨髓源性间充质干细胞( MSC)联合脐血移植的Ⅰ期临床观察,探讨 MSC是否可促进 HSC植入及造血恢复、对 GVHD的影响及安全性.

冻存人脐血间充质干细胞向类肝细胞的诱导分化

目的:分离培养人脐血间充质干细胞,观察其冻存复苏后向肝细胞定向分化的能力。方法:实验于2004-01/2006-01在四川大学华西医院感染性疾病中心生物治疗国家重点实验室进行。采用密度梯度离心与直接贴壁相结合的方法,1×107L-1和1×108L-1两种接种密度进行人脐带血间充质干细胞的分离,观察细胞生长及检测其表面抗原。将第6代的人脐带血间充质干细胞采用梯度冷冻技术冻存6个月,复苏后培养至第8代时,加入肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子-4联合诱导28d。将第8代人脐带血间充质干细胞爬片与诱导28d后的类肝细胞爬片共培养,第8代人脐带血间充质干细胞爬片与未诱导培养28d的人脐带血间充质干细胞爬片共培养作为阴性对照。检测加入肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4后不同时间点及共培养28d后的人脐带血间充质干细胞中CK8&18、白蛋白和糖原的表达。结果:①密度梯度离心收获的单个核细胞培养传代后,能获得均一贴壁的间充质干细胞,第5代细胞中,CD44阳性的细胞达97.9%。②人脐血间充质干细胞冻存复苏后,活细胞约为70%,复苏后接种密度为1×107L-1的生长状态优于1×108L-1。③添加肝细胞生长因子和成纤维细胞生长因子4后,可以在细胞内检测到CK8&18、白蛋白及糖原的表达。④与类肝细胞共培养28d后,人脐血间充质干细胞中小部分细胞中同时表达CK8&18和白蛋白,并有糖原的表达。结论:人脐血间充质干细胞可采用密度梯度离心法结合直接贴壁法分离获得,并可冷冻保存;复苏后在肝细胞生长因和成纤维细胞生长因子4的联合诱导下,能定向分化为表达CK8&18,并合成白蛋白和糖原的类肝细胞,类肝细胞可能具有诱导人脐血间充质干细胞向肝系细胞定向分化的作用。

间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响

背景:近年来,间充质干细胞在再生障碍性贫血中的作用受到广泛关注,但是其作用机制尚不清楚。目的:观察脐血间充质干细胞和骨髓间充质干细胞对再生障碍性贫血患者造血支持及T淋巴细胞分泌功能的影响。方法:收集48例再生障碍性贫血患者和48例健康者的骨髓和健康产妇脐血,采用流式细胞法分离骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞;将2种间充质干细胞分别与脐血单个核细胞共培养,计数红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位数目;将间充质干细胞与植物血凝素刺激的再生障碍性贫血患者T淋巴细胞共培养,ELISA检测T细胞分泌的白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素水平。结果与结论:(1)正常骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞与脐血单个核细胞共培养后,其红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位数目明显增多(P<0.05)。(2)再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞与脐血单个核细胞共培养后,其刺激红系爆式集落形成单位和粒-巨噬细胞集落形成单位形成的能力明显减弱(P<0.05)。(3)与植物血凝素诱导的T细胞对照组相比,正常骨髓间充质干细胞共培养可明显抑制T细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素(P<0.05)。正常脐血干细胞共培养组也显示出了相似的抑制效果。(4)与正常骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞共培养组相比,再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞共培养组抑制T细胞分泌白细胞介素2、白细胞介素4和γ-干扰素的能力明显降低(P<0.05)。(5)结果表明再生障碍性贫血患者骨髓间充质干细胞存在功能缺陷,且对造血功能支持及对T细胞分泌功能的抑制作用明显弱于正常的骨髓间充质干细胞和脐血间充质干细胞,提示再生障碍性贫血患者间充质干细胞可能通过减弱其造血支持及抑制T细胞的功能来影响病理进程。

不同培养基培养人脐血间充质干细胞的差异

背景:脐血间充质干细胞为干细胞领域的研究热点,但目前传代及扩增此类细胞尚无简单、有效、完美培养方法。目的:采用不同的培养基分离培养融合状态的间充质干细胞,以筛选一种较好的体外培养人脐血间充质干细胞的方法。方法:无菌条件下取正常足月剖宫产新生儿的脐血,随机分为5组:低糖DMEM(Dulbecco改良的Eagle培养基)组、高糖DMEM组、α-DMEM组、低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组。用淋巴细胞分离液分离脐血的单个核细胞。将脐血单个核细胞接种于含体积分数为10%胎牛血清的上述培养基中,放置于37℃、体积分数为5%的CO2培养箱内培养,倒置显微镜观察细胞数量和形态的变化并用流式细胞技术分析细胞的表面抗原。结果与结论:①各组间充质干细胞培养48h后贴壁细胞数和细胞存活率的比较:低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组的贴壁细胞数明显多于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05),细胞存活率亦明显高于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05)。②各组间充质干细胞在不同培养时间下生长状态的比较:培养第3,6,9,12,15,18,21天低糖DMEM+干细胞因子组、低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组细胞增殖的速度均快于低糖DMEM组、高糖DMEM组、α-DMEM组(P<0.05)。低糖DMEM+干细胞因子组与低糖DMEM+骨髓间充质干细胞培养上清组比较差异无显著性意义。结果可见人脐血间充质干细胞与骨髓间充质干细胞培养上清或干细胞因子共孵育,对脐血间充质干细胞体外分离培养及扩增有支持作用。