过敏性哮喘病理生理学机制研究进展

过敏性哮喘是IgE依赖的一类特殊的炎症疾病,具有反复发作性、气流受限和气道反应性增高的特点。除了遗传因素外,过敏原、呼吸道刺激物、呼吸道病毒感染和职业性暴露,都会通过不同的途径导致相同的结果：多细胞性的炎症、强烈的支气管反应和气道阻塞等。在过去的25 a里,哮喘的病理含义一直在随着复杂技术的使用和临床实践而完善,本文对哮喘发病过程中的病理生理机制予综述如下。

中性粒细胞在哮喘中作用的研究进展

哮喘是一种常见的具有异质性的慢性呼吸道疾病。近年来研究发现，在急性哮喘、持续性哮喘特别是一些糖皮质激素治疗无效的哮喘亚型中，中性粒细胞引起的气道炎症起主导作用。中性粒细胞在哮喘中的作用比较复杂，它可以通过释放一系列的细胞因子及炎症介质参与哮喘的病理过程。大量证据表明。中性粒细胞气道炎症是由辅助性T细胞（Th）17细胞和Th1细胞所调控，而不依赖于Th2细胞。现就中性粒细胞在哮喘中的作用，以及针对中性粒细胞性哮喘在新型小分子药物和生物制剂领域的治疗方法的研究进展加以综述。

镁离子在支气管哮喘气道重塑中的作用研究

目的:探讨镁离子在支气管哮喘(下称哮喘)豚鼠气管重塑中的作用机制。方法:将50只雄性豚鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B1组)、哮喘模型延续组(B2组)、高镁组(B3组)、低镁组(B4组)。用卵清蛋白复制哮喘气管重塑模型。观察血清镁离子浓度、气管壁各层厚度及脏器体重比。结果:1B1组血清镁离子浓度明显低于A组(P<0.05),气管壁各层厚度明显大于A组(P<0.01)。2B3组血清镁离子浓度明显大于B2组(P<0.05),气管壁各层厚度明显小于B2组(P<0.05)。3B4组小气管平滑肌厚度大于B2组(P<0.05)。结论:血清镁离子在哮喘豚鼠气管重塑中起调节作用。

CRTH2受体拮抗剂缓解大鼠哮喘模型气道炎症

目的:通过对大鼠哮喘模型嗜酸性粒细胞(EOS)上DP1/CRTH2受体及细胞因子变化的分析,研究DP1/CRTH2拮抗剂对大鼠哮喘模型气道炎症的影响和机制。方法:40只雄性SD清洁级大鼠,随机分为正常对照组、哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组、DP1受体拮抗剂BWA868C应用组,每组10只。用卵白蛋白(OVA)雾化诱喘。放射配体分析其外周血EOS上的PGD2受体;ELISA测定大鼠血中IL-4和IL-5及IFN-γ水平;肺组织病理切片,HE染色镜检。结果:CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组大鼠支气管壁EOS浸润显著减少,血清IFN-γ水平显著增高,IL-4、IL-5水平显著低于哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组(P<0.01);在肺泡灌洗液中EOS计数较哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组显著减少(P<0.01),外周血EOS计数与哮喘组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组相似,较正常对照组显著增加(P<0.01)。与正常对照组相比,哮喘组、CRTH2拮抗剂BAYu3405应用组和DP1受体拮抗剂BWA868C应用组外周血EOS上DP总结合和CRTH2受体结合容量显著增加(P<0.01),DP1无显著性差异(P>0.05)。结论:CRTH2受体(DP2)拮抗剂能缓解大鼠哮喘模型气道炎症,减少气道中EOS浸润,可能与CRTH2受体拮抗剂能通过拮抗EOS上增高的CRTH2结合容量,降低IL-4、IL-5和增高IFN-γ水平有关,DP1拮抗剂BWA868C对大鼠哮喘模型气道炎症无显著改善作用。

肥大细胞在实验性哮喘小鼠气道高反应性中的作用

目的:研究肥大细胞在实验性哮喘小鼠气道病理生理改变过程中的作用。方法:遗传性肥大细胞缺失W/Wv小鼠、正常同源基因+/+小鼠和培养骨髓肥大细胞重建的W/Wv小鼠分设对照组和实验组;实验组小鼠用10μgOVA两次致敏,17d后用1%OVA气道激发,隔天1次,共3次;第22天时检测其气道反应性,后取材观察其肺组织中肥大细胞数量、和肺组织的病理改变。结果:OVA致敏和激发可引起+/+小鼠和肥大细胞重建的W/Wv小鼠气道反应性增强,肺组织中肥大细胞数量明显增加,肺组织炎性病理改变明显;而OVA致敏和激发的W/Wv小鼠的上述指标改变不明显。结论:肥大细胞参与了OVA诱导的小鼠气道高反应性、肺组织炎症细胞浸润过程。

布地奈德对哮喘大鼠气道重塑及气道平滑肌中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨布地奈德对哮喘大鼠模型气道重塑及平滑肌中Toll样受体4表达的影响。方法:将30只SPF级SD大鼠随机分为支气管哮喘组(A组)、健康对照组(B组)、布地奈德治疗组(C组)3组,每组10只。制备大鼠肺组织病理切片,HE染色后观察各组气道结构改变情况,并测定支气管壁厚度(WAt/Pi)、支气管壁平滑肌厚度(WAm/Pi)及支气管平滑肌细胞核数(N/Pi),利用Western-Blot方法检测气道平滑肌中TLR4的蛋白表达。结果:光镜下可见A组支气管上皮细胞脱落、管壁炎症细胞浸润、杯状细胞增生、基底膜和平滑肌明显增厚,而C组上述改变较A组明显减轻。与B组比较,A组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及平滑肌细胞核数显著升高(P<0.01),与A组比较,C组支气管管壁厚度、平滑肌厚度及支气管平滑肌细胞核数显著降低(P<0.01)。A组的TLR4的蛋白水平明显高于B组及C组(P<0.01)。结论:吸入布地奈德可以防治气道重塑,可能通过抑制TLR4的表达实现。

诱导痰中炎性细胞及细胞因子在哮喘患者发病中的作用

目的:探讨白细胞介素13(IL-13)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)在哮喘中的发病机制以及诊疗意义。方法:采用酶联免疫吸附法(ELASE)测定33例哮喘患者诱导痰的上清液及血清中IL-13、TNF-α,同时用肺功能仪测定FEV1%pre及计数痰涂片中嗜酸粒细胞,与20例健康对照者的结果进行比较,同时分析IL-13、TNF-α与痰炎症细胞及FEV1%pre的关系。结果:1哮喘组痰LogIL-13的浓度2.09±0.25pg/ml、嗜酸粒细胞/白细胞%(EOS/Leu%)15.8±5.7%、痰TNF-α浓度58.38±13.28pg/ml高于对照组的LogIL-13的浓度1.71±0.19pg/ml、EOS/Leu%1.6±0.4%和TNF-α浓度15.20±4.99pg/ml,有显著性差异;2哮喘组痰IL-13浓度与痰内EOS/Leu%呈正相关(r=0.823,P=0.000),与FEV1%pre呈负相关(r=-0.752,P=0.000)。结论:哮喘发作时IL-13、TNF-α浓度及嗜酸粒细胞明显增高,提示IL-13可能通过对嗜酸粒细胞的调节从而参与哮喘的发病过程,同时IL-13参与哮喘呼吸道炎症及其呼吸道高反应性的发生机制。

地塞米松雾化吸入对哮喘患者诱导痰液中ECP、TNF-α、sIL-2R水平的影响

目的:诱导测定哮喘患者痰液ECP、TNF-α、slL-2R水平,评价吸入地塞米松防治哮喘的作用。方法:采用酶联免疫法及荧光免疫法对40例轻中度哮喘患者在吸入激素前后测定痰液中嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性白细胞介素2受体(slL-2R)水平。结果:吸入激素后诱导痰液ECP水平由300±122μg/L降至146±96μg/L、TNF-α由280±135ng/L降至132±53ng/L、slL-2R由497±136kU/L降至328±97kU/L。哮喘患者吸入激素前ECP与TNF-α,slL-2R均呈显著正相关(r=0.58,0.62,P<0.05)。吸入激素后各指标间无显著相关性。结论:吸入激素后哮喘患者诱导痰液中ECP、TNF-α、slL-2R浓度比吸入激素前明显降低。吸入激素可明显抑制气道炎性反应,其作用机制可能与抗炎作用有关。

支气管哮喘患儿流速-容量曲线指标的动态观察

目的:动态观察支气管哮喘患儿流速-容量曲线吸气、呼气指标在哮喘发作,支气管舒张试验和6m in跑步试验时的改变并探讨其演变规律。方法:将279例哮喘发作期患儿按年龄分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组,根据轻中重呼吸道阻塞分3组分别与正常对照组比较。100例阻塞性通气障碍患儿进行支气管舒张试验阳性;78例哮喘缓解期患儿6m in跑步试验阳性并小呼吸道阻塞进行前后流速-容量曲线指标的比较。主要测定指标:PEF、P IF、FEV1、F IV1、FEF50、F IF50。结果:哮喘发作期患儿各项指标随病情程度加重而下降。舒张试验和跑步试验前后比较PEF、FEV1、FEF50均有显著性差异(P<0.01)。FEF50/F IF50比值明显下降,舒张试验后上升,跑步试验后下降。结论:哮喘儿童流速-容量曲线指标可反映呼吸道阻塞的可逆性及易变性。PEF、FEV1、FEF50是观察呼吸道可逆性及反应性较敏感的指标;FEF50/F IF50比值可反映呼吸道病变的程度,吸气指标对监测哮喘患儿呼吸道功能有积极意义。

小儿哮喘肺功能分析

目的：观察小儿哮喘不同时期的肺功能变化及其临床意义。方法：用Ｇｏｕｌｄ ２４００肺量仪对２７１例小儿哮喘患者行肺功能测试（ＰＦＴ），并以１０６ 例健康儿童为对照组。哮喘缓解组中有２５例行蒸馏水（ＤＷ）吸入激发试验。结果：共有１８１ 例肺功能异常，其中发作组８９ 例，表现为ＦＶＣ，ＦＥＶ１，ＭＶＶ，ＰＥＦ，·Ｖ２５和·Ｖ５０都明显降低；缓解组９２例，ＭＶＶ、ＰＥＦ、·Ｖ２５和·Ｖ５０均降低。ＤＷ 吸入激发试验２５例，其ＦＥＶ１ 均降低２０～３０％ 。结论：小儿哮喘发作期存在大小气道功能障碍。缓解期仍存在小气道功能障碍和气道高反应性，ＰＥＦ和·Ｖ２５降低与病程长短有关。

哮喘患者的气道炎症表型及临床特征研究

【目的】分析哮喘患者的气道炎症表型分布及其临床特征。【方法】选取2012年1月至2015年8月本院收治的417例支气管哮喘患者为研究对象，其中，43例患者符合重症哮喘标准，374例为普通哮喘。比较不同程度哮喘患者的气道炎症分型、呼出气一氧化氮（FeNO）测定和肺功能特征。【结果】①两组患者的年龄、体质量指数（BMI）和诱导痰嗜中性粒细胞比较差异无统计学意义（P〉0．05）。两组的一秒用力呼气容积（FEV1）／用力肺活量（FVC），诱导痰嗜酸粒细胞和FeNO比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。②两组的不同表型构成比较，差异无统计学意义（P〉0．05），表型排序均为：嗜酸粒细胞型、混合细胞型、嗜中性粒细胞型、寡细胞型。③重症哮喘不同气道炎症表型的哮喘患者，FeNO、FEV1／FVC（％）和FEV1均具有统计学意义（P〈0．05），嗜中性粒细胞型是肺功能损害最严重的重症哮喘表型。【结论】嗜酸性粒细胞型是哮喘最常见的气道炎症表型，在重症哮喘患者中，嗜中性粒细胞型的肺功能最差。

25(OH)D3、IgE和FeNO在哮喘患者血清中的表达及其临床意义

【目的】探讨25-羟维生素D3[25(O H)D3]、免疫球蛋白E(IgE)和呼出气一氧化氮(FeNO)在哮喘患者血清中的表达及其临床意义。【方法】选取2016年8月至2017年12月在本院诊治的哮喘患者60例(哮喘组),另外选取同期在本院体检的健康成年人60例(对照组)。检测两组血清25(OH)D3、总IgE和FeNO水平、肺功能指标[用力肺活量(FVC)、1秒钟用力呼气量(FEV1)、最大呼气中段流量(MMEF)],分析血清25(OH)D3、血清总IgE和FeNO水平与肺功能指标的相关性。【结果】哮喘组患者的血清25(OH)D3水平显著低于对照组,血清总IgE和FeNO水平显著高于对照组(P<0.001);哮喘组患者的FVC、FEV1、MMEF水平均显著低于对照组(P<0.05);哮喘组患者的血清25(OH)D3水平与FVC、FEV1、MMEF水平呈正相关,血清总IgE和FeNO与FVC、FEV1、MMEF水平呈负相关。【结论】哮喘患者的血清25(OH)D3水平较低,血清总IgE和FeNO水平较高,且与肺功能密切相关。

利用抑制性消减杂交技术筛选大鼠哮喘相关基因

目的:利用哮喘大鼠模型筛选与哮喘发病相关的差异性表达基因。方法:采用抑制性消减杂交技术,以哮喘大鼠肺组织总RNA为检验子,对照大鼠肺组织总RNA为驱赶子,将消减杂交获得的DNA片断与pGEM-T Easy Vector连接,构建cDNA文库后,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆。将获得的阳性克隆插入片段进行测序分析,测序结果与GenBank数据库中cDNA和EST序列进行相似性比对,获得差异性表达基因的信息。结果:扩增消减cDNA文库获得300余个白色克隆,随即挑选36个测序,除去重复序列,结果中含有已知的基因4个,ESTs 2个及与任何序列无同源性的新基因片段3个。结论:成功构建了哮喘大鼠肺脏差异性表达基因的正向消减cDNA文库,筛选出数个与哮喘相关的差异表达基因。

支气管哮喘患儿发作期血清IL-12、IL-6与ET-1、CEC水平的相关性分析

【目的】探讨支气管哮喘患儿发作期血清白细胞介素-12(IL-12)、IL-6与内皮素-1(ET-1)、循环内皮细胞计数(CEC)水平的相关性。【方法】选取本院诊治的90例支气管哮喘患儿,根据患儿病情程度分为稳定期组和发作期组,每组45例。检测并比较血清IL-12、IL-6、ET-1、CEC水平,并分析发作期患儿血清IL-12、IL-6与ET-1、CEC的相关性。【结果】支气管哮喘患儿发作期血清IL-12水平低于稳定期,血清IL-6及ET-1、CEC水平高于稳定期,其差异均有统计学意义(P<0.05)。L-12、IL-6与ET-1偏相关系数=0.249,P=0.103,提示IL-12、IL-6与ET-1有直线趋势相关性;IL-12、IL-6与CEC偏相关系数=0.340,P=0.024,提示IL-12、IL-6与CEC有直线相关性。【结论】不同分期支气管哮喘患儿血清IL-12、IL-6、ET-1与CEC差异显著,发作期患儿血清IL-12、IL-6与血清ET-1、CEC关系密切,可有效评估患儿病情及指导临床诊治。

糖皮质激素对支气管哮喘患者嗜酸性粒细胞趋化因子作用临床探讨

目的:探讨糖皮质激素对支气管哮喘患者血清、痰液中嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)表达量的影响及其临床意义。方法:选取哮喘急性发作患者30例作为观察组,随机选取10名健康对照。通过对观察组用药前、后以及健康对照组所采集的血清以及诱导痰液上清中的嗜酸性粒细胞中趋化因子进行检测,并与哮喘患者肺功能进行相关性分析。结果:哮喘急性发作组,血清以及诱导痰液中eotaxin表达水平明显高于健康对照组,使用糖皮质激素控制症状后,eotaxin显著性下降,用药前后比较差异有显著性。哮喘发作组血清eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.51127,两者呈现负相关。痰液eotaxin浓度与FEV1%相关系数为r=-0.4276,两者呈现负相关。结论:经糖皮质激素治疗后,哮喘患者eotaxin指标明显下降,eotaxin与FEV1%呈负相关,说明糖皮质激素控制哮喘炎症反应的机制,可能与eotaxin下降有关,从而起到治疗哮喘的作用。

CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对哮喘大鼠气道炎症的影响

目的观察CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Treg）对哮喘大鼠气道炎症的影响。方法将卵白蛋白（OVA）免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞过继转移给哮喘大鼠，然后观察支气管肺泡灌洗液（BALF）中细胞计数及分类，ELISA检测BALF中IL-4、IL-5和IFN-1及血清OVA特异性IgE含量，HE染色观察肺组织的病理改变。结果与哮喘组比较，过继转移CD4^＋CD25^＋Treg细胞后哮喘大鼠BALF中细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞百分率降低（P〈0．05），嗜酸性粒细胞（Eos）百分率明显降低（P〈0．01）；BALF中IL4和IL-5含量明显降低，IFN-1含量明显升高，血清OVA特异性IgE含量明显降低（P〈0．05）；气道炎症明显减轻。结论过继转移OVA免疫耐受大鼠CD4^＋CD25^＋Treg细胞可以明显抑制哮喘的慢性气道炎症。

支气管哮喘患者气道黏膜中肥大细胞雌激素受体表达变化的研究

目的探讨雌激素受体在女性支气管哮喘患者气道黏膜肥大细胞中表达水平的变化。方法12例女性支气管哮喘患者和9例对照亚急性或慢性咳嗽女性患者，经纤维支气管镜取3级支气管黏膜组织，采用抗人肥大细胞类胰酶单克隆抗体标记肥大细胞，抗人雌激素受体（ER）单克隆抗体检测ER的表达，同时采用双标免疫染色对ER在肥大细胞中的表达进行定位分析。结果女性支气管哮喘患者气道黏膜中肥大细胞和雌激素受体阳性细胞数明显高于对照组（P〈0．01），雌激素受体阳性细胞在形态学上与肥大细胞相似；而且雌激素受体阳性细胞与肥大细胞的位置相吻合。结论提示雌激素可能通过气道黏膜中的肥大细胞雌激素受体表达的变化参与了女性患者哮喘发病机制中的作用过程。

Ca2＋／CaN-NFATc信号通路在哮喘大鼠淋巴细胞增殖和活化中的作用

目的探讨Ca2＋／CaN-NFATc信号通路在哮喘大鼠淋巴细胞活化、增殖中的作用。方法哮喘组和CsA（cyclospoin A，CaN的抑制物，环孢菌素A）干预组大鼠以卵蛋白溶液致敏及激发，对照组以生理盐水致敏及激发，无菌分离脾淋巴细胞，加PHA—P（终浓度为5μg／ml）培养24h，CsA干预组同时加入CsA稀释液（终浓度为1．0μg／ml）。检测淋巴细胞内[Ca2＋]i浓度、CaN活性、去磷酸化NFATc蛋白和CyclinE蛋白的表达、细胞周期各时相分布及上清液中IL-4和IL-2的水平。结果与对照组相比，哮喘组淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性[（81．21±14．39）V8（63．66±9．02）]增加（P〈0．05）；CyclinE蛋白的表达量[（0．9327±0．0370）VS（0．8374±0．0637）]增加（P〈0．01），处于G0／G1期的淋巴细胞比例[（89．3300±3．3850）VS（94．1260±1．4389）]减少，s期[（7．8600±2．8241）VS（4．0270±1．8650）]及S＋G2／M期比例[（10．6700±3．3850）V8（5．8740±1．4389）]增加（P均〈0．01））；上清液中IL4水平[（1．55±0．19）pg／ml vs（0．99±0．12）pg／m1]及IL-4／IL-2比值[（0．81±0．12）vs（0．49±0．49）]增加（P均〈0．01）。CsA可使哮喘大鼠淋巴细胞Ca2＋／CaN—NFATc的活性（47．19±7．16）下降（P〈0．05）；CyclinE蛋白的表达量（0．6840±0．0485）减少（P〈0．01），使处于S期（4．8600±1．9595）和S＋G2／M期（7．9900±1．9405）的淋巴细胞比例减少，G0／G1期比例（92．2100±1．9267）增加（P均〈0．01），细胞增殖受到抑制；使上清液中IL-4（0．47±0．09）pg／ml水平减少（P〈0．01），IL-4／IL-2比值下降（0．78±0．20）；淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性与IL4的水平及CyclinE蛋白的表达量均呈正相关（r=0．711，P〈0．01和r=0．749，P〈0．01）。结论哮喘大鼠淋巴细胞Ca2＋／CaN-NFATc的活性增加；其活性的增加可通过促进IL4的产生和分泌，导致Th1／Th2的失衡，也可通过促进Cyclin E蛋白的表达而引起淋巴细胞的增殖。

Y27632对哮喘气道重塑幼年大鼠气管平滑肌细胞骨架的影响

目的 探讨幼年哮喘气道重塑大鼠中气管平滑肌细胞骨架的变化及RhoA/ROCK信号通路的影响.方法 应用抗原致敏液对幼年SD大鼠激发8周,原代培养纯化气管平滑肌细胞（ASMC）,并给予Rho激酶抑制剂Y27632干预,通过免疫荧光、实时定量PCR、Western blot等方法,检测气管平滑肌细胞骨架F-actin、α-tubulin的变化.结果 （1）哮喘气道重塑组ASMC中F-actin平均灰度值高于对照组（P＜0.01）,加入Y27632预处理后,F-actin平均灰度值明显降低（P＜0.01）;（2）哮喘气道重塑组α-tubulin的荧光信号强度、密度较对照组增高,而Y27632干预组微管α-tubulin的荧光信号明显减弱（P＜0.05）;（3）哮喘气道重塑组α-tubulin蛋白的表达较对照组显著增加（P＜0.01）,Y27632预处理组α-tubulin蛋白的表达明显下降（P＜0.05）.结论 幼年哮喘气道重塑大鼠中存在着气管平滑肌细胞骨架的变化,RhoA/ROCK信号通路可能起着重要作用.

血清维生素D、TGF-β1水平与哮喘患者气道重塑的相关性

目的探讨支气管哮喘患者血清25-（OH）D3、TGF-β1水平与气道重塑发生的相关性。方法选择本院2015年1月至2016年1月呼吸科住院及门诊哮喘患者50例，分为可逆性气流受限组及不可逆性气流受限组；另选择本院同期健康体检者20例作为对照组。检测各组受检者血清中25-（OH）D，、TGF-β1的水平；行肺功能、胸部高分辨T（HRCT）检查，测量并计算支气管管壁厚度。结果对照组、可逆性气流受限组、不可逆性气流受限组血清TGF-β1的水平分别为[（0．249±0．010）pg／ml、（0．281±0．004）pg／ml、（0．313±0．024）pg／m1]，三组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；25-（OH）D3水平分别为[（28．550±5．100）ng／ml、（20．817±2．573）ng／ml、（13．515±3．511）ng／m1]，三组比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；对照组、可逆性气流受限组、不可逆性气流受限组的支气管管壁厚度与外径比值（T／D）及气道壁面积占气道总截面积百分比（WA％）分别为[（0．337±0．018、0．390±0．013、0．419±0．021）及（58．800±2．628、63．304±1．521、64．956±0．874）]，差异均有统计学意义（P〈0．01）；不可逆性气流受限组中，25-（OH）D，水平与TGF-β1、T／D、WA％呈负相关。结论维生素D抑制哮喘气道炎症、气道重塑的病理过程，维生素D缺乏是形成哮喘气道炎症、气道重塑的重要致病因素；维生素D水平降低与TGF-β1水平增高呈负相关，两因素共同作用促进哮喘气道重塑的形成。