应用白消安构建唯支持细胞综合征小鼠动物模型

目的:构建稳定、可靠的小鼠唯支持细胞综合征模型。方法:60只SPF级NIH小鼠分成两组,分别给予30 mg/kg白消安腹腔注射及睾丸冷冻(0℃)30、60 min处理。于处理后2、4及8周,观察小鼠的生存率、睾丸重量及生精功能的变化,并对精子发生障碍程度进行定量化分析。结果:各组小鼠的基础体重值及处理后小鼠的生存率均无明显差异(P>0.05)。白消安处理后第4及8周,睾丸重量(g)(4周:0.04±0.01;8周:0.05±0.01)均显著低于对照组(4周:0.09±0.03;8周:0.11±0.02)(P<0.05),生精小管呈"唯支持细胞综合征"样改变,Johnsen评分(4周:3.86±0.50;8周:2.70±0.67)较对照组(4周:9.60±0.25;8周:9.76±0.43)均显著降低(P<0.01);睾丸冷冻30及60 min后,第2、4及8周睾丸重量(g)(冷冻30 min,2周:0.07±0.02;4周:0.06±0.01;8周:0.09±0.01)(冷冻60 min,2周:0.05±0.01;4周:0.04±0.02;8周:0.04±0.02)显著低于同期对照侧(2周:0.11±0.01;4周:0.11±0.01;8周:0.12±0.00)(P<0.05),睾丸形态学上易见生精小管萎缩、脱落、坏死及纤维化。各期冷冻组Johnsen评分(冷冻30 min,2周:4.70±0.67;4周;2.70±0.84;8周:6.10±1.14;冷冻60 min,2周:1.67±0.58;4周:1.20±0.45;8周:1.00±0.00)均显著低于同期对照组(2周:9.60±3.23;4周:9.60±0.55;8周:9.70±0.45)(P<0.01)。结论:白消安处理对小鼠的生存率无明显影响,可用来制备稳定、可靠的小鼠唯支持细胞综合征模型。

唯支持细胞综合征病理变化和发病机制

目的:观察唯支持细胞综合征(SCOS)患者睾丸的病理变化,并探讨其可能的发病机制。方法:选取70例SCOS睾丸标本,通过光镜、电镜观察形态学改变,采用免疫组化方法分析其中40例石蜡标本中GATA-4及Inhibin-α的表达。并测定患者周围血激素水平。结果:①光镜下主要表现为曲细精管内生精细胞完全缺如,生精上皮仅由支持细胞组成,支持细胞显著增生,排列疏松、紊乱,部分曲细精管广泛纤维化、玻璃样变性、皱缩、塌陷,甚至管腔闭锁。间质细胞形态正常,相对增生。②电镜下主要表现为界膜胶原纤维增生,支持细胞胞浆内质网较丰富,有轻微扩张,部分线粒体嵴消失,甚至空泡变,支持细胞胞浆内出现较多自噬体。③40例SCOS睾丸标本免疫组化染色显示,GATA-4均呈阴性表达,Inhibin-α均呈阳性表达。④血清卵泡刺激素(FSH)值较正常成年男性水平升高,差异有统计学意义(P<0.01),而黄体生成素(LH)、睾酮(T)差异无统计学意义(P>0.05)。结论:支持细胞的线粒体病变及其功能受损是SCOS的病变基础,血清FSH浓度升高、GATA-4在支持细胞的表达缺失可能与SCOS的发生有关。

唯支持细胞综合征患者睾丸组织Boule基因5'调控序列甲基化分析

目的:探讨唯支持细胞综合征(SCOS)患者睾丸组织中Boule基因5'调控序列甲基化状态。方法:收集梗阻性无精子症患者(12例)和SCOS无精子患者(15例)睾丸组织穿刺标本,门诊检查排除精索静脉曲张、隐睾、感染等疾病。试剂盒法提取患者睾丸组织基因组DNA,利用生物信息学方法分析Boule基因5'调控序列的序列特征,采用亚硫酸氢钠测序法检测睾丸组织中Boule基因甲基化状态。结果:Boule基因5'调控区存在一个Cp G岛,SCOS患者Boule基因的甲基化水平(61.4%)显著高于梗阻性无精子症患者(21.7%)(P<0.01),共14个Cp G位点甲基化有显著性差异,分别为-58 bp、-50 bp、-48 bp、-38 bp、-28 bp、-24 bp、-20 bp、-15 bp、-1 bp、+5 bp、+8 bp、+15 bp、+29 bp和+58 bp。结论:SCOS患者Boule基因的甲基化水平显著高于梗阻性无精子症患者,推测这种甲基化变化可能与精子发生障碍有关。

308例唯支持细胞综合征患者睾丸生精功能与生殖激素的相关性分析

目的分析生殖激素的比值在评估睾丸生精功能上的应用价值。方法回顾性分析308例在外院诊断为非梗阻性无精子症,睾丸病理为唯支持细胞综合征且来我院要求供精人工授精的临床资料。按照体外射出精液是否有精子,分为隐匿精子组和无精子组,比较两组间的生殖激素水平和遗传学指标差异,分析这些指标对评估唯支持细胞综合征患者的睾丸生精功能的价值。结果研究对象FSH/LH比值均值为2.4,其中隐匿精子组2.0,无精子组2.5,两者差异有统计学意义(P=0.001),而两组FSH、LH、PRL、T、FSH/T比值以及LH/T比值比较无显著差异。两组染色体和AZF基因比较有显著统计学差异(P<0.001)。结论 FSH/LH比值联合染色体和AZF基因等指标在评估唯支持细胞综合征患者的睾丸生精功能上比睾丸体积、精液量、精液PH值、FSH、LH、PRL、T、FSH/T比值以及LH/T比值更具有参考价值。

唯支持细胞综合征(附168例报告)

目的:探讨唯支持细胞综合征患者生殖激素水平与诊断的关系。方法:采用RIA法和化学发光法检测168例唯支持细胞综合征患者血清中的生殖激素FSH、LH、T、PRL值。结果:唯支持细胞综合征患者血清中FSH值升高,LH水平亦可升高,但FSH值升高程度大于LH升高程度;T、PRL值正常。结论:无精子症患者中,只要FSH值升高,即使T、PRL值正常,无论LH水平升高与否,即可确诊唯支持细胞综合征。患者生精功能受损,难以生育。

显微睾丸取精术治疗唯支持细胞综合征效果分析(附79例报告)

目的探讨显微睾丸取精术(MD-TESE)治疗唯支持细胞综合征(SCOS)的效果,分析部分指标对获精率的预测价值。方法回顾性分析2018-04-2019-10间在郑州大学第一附属医院接受MD-TESE的79例SCOS患者的临床资料。统计手术获精率及其与年龄、睾丸体积、FSH、T、FSH/LH的相关性。结果 17例(21.52%)患者成功取精。取精成功和失败者的年龄、睾丸大小、FSH、睾酮及FSH/LH值差异无统计学意义(P>0.05)。病因明确者(包括AZFc区缺失、隐睾、睾丸炎、细胞毒性药物)取精率较高,为58.33%(7/12)。结论 SCOS大多病因不明,MD-TESE是患者获得精子生育亲生子代的可行方法。有明确病因的患者获精率较高。获精率与年龄、睾丸大小、FSH值、FSH/LH值无关。

唯支持细胞综合征患者的睾丸病理和性激素分析

目的 分析唯支持细胞综合征不育患者曲细精管的不同病理改变及其血清性激素水平,探讨是否可以为睾丸活检取精子或生精细胞提供参考。方法 测定107例唯支持细胞综合征患者的睾丸容积和血清性激素水平,做睾丸活组织检查,按活检结果分为完全无生精细胞与有生精细胞两组,并比较两组间差异有无显著性意义。结果 96例唯支持细胞综合征患者完全无生精细胞,11例患者有生精细胞或精子,完全无生精细胞患者与有生精细胞患者睾丸容积及性激素水平无差异(P>0.05)。结论 唯支持细胞综合征不育患者少数有精子或生精细胞发生,但缺乏明确的性激素指标反映曲细精管是否有精子或生精细胞存在。

147例唯支持细胞综合征患者的睾丸病理分型和性激素分析

目的分析唯支持细胞综合征(SCOS)患者的病理变化分型及其性激素水平,探讨不同对症治疗的可行性。方法选取147例(病例组)SCOS睾丸活检标本,其中Ⅰ型74例和Ⅱ型73例,通过光镜、电镜观察其形态学改变,并同时测定病例组及正常组(100例)睾丸体积大小及性激素血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、睾酮(T)水平。结果病例组标本光镜下主要表现为曲细精管内生精细胞完全缺如,生精上皮仅由支持细胞组成,支持细胞显著增生,排列紊乱,其中有61例为曲细精管广泛纤维化、透明变性,管腔变小甚至闭锁,间质细胞相对增生。电镜下主要表现为界膜胶原纤维组织增生,支持细胞胞浆内质网丰富,线粒体嵴消失并发生空泡变,支持细胞胞浆内出现较多自噬溶酶体。FSH、LH较正常组水平升高(P<0.05),而T在两组间的差异无统计学意义(P>0.05)。结论通过睾丸活检,按照曲细精管界膜状态的病理变化对SCOS进行分型,SCOS不同病理分型的血清FSH水平均升高,界膜状态及性激素水平变化可为不同病因SCOS的对症治疗提供依据。

性轴激素LH、FSH、T水平测定对Klinefelter’s综合征的诊断意义

目的 测定 117例Klinefelter综合征 (Klinefelter’ssyndrome ,KS) ,37例特发性低促性腺激素性腺机能减退症(idiopathichypogonadotrapichypogonadism ,IHH) ,10 7例唯支持细胞综合征 (sertoli-cell-onlysyndrome ,SCOS) ,30例特发性无精子症 (idiopathicazoospermia ,IA) ,4 0例特发性少精子症 (idiopathicoligospermia ,IO)患者的性轴激素值 ,分析各疾病的LH、FSH、T值的差别 ,探索通过性轴激素测定诊断KS综合征的方法。方法 应用放免分析法测定血清性轴激素水平 ;外周血淋巴细胞用 16 4 0培养基常规培养 ,制片 ,作染色体核型分析。结果 通过测定血清LH、FSH、T值诊断KS ,敏感性为94 .87% ,特异性为 95 .79%。

无精子症及隐匿精子症患者睾丸体积与睾丸活检组织生精细胞的关系

目的:研究无精子症及隐匿精子症患者睾丸活检组织生精细胞类型及睾丸体积之间的关系。方法:收集来我院就诊的无精子症及隐匿精子症患者的完整睾丸活检病理报告,参照WHO《男性不育标准化诊疗手册》睾丸组织学分类方法进行分类,分析精液检查结果、睾丸组织学类型及睾丸体积之间的关系。结果:在492例患者中,无精子症占90.5%(445/492),隐匿精子症占9.5%(47/492)。生精小管内见成熟精子占17.9%(88/492)、生精小管内见生精细胞未见成熟精子占42.9%(211/492)、唯支持细胞综合征39.2%(193/492)。睾丸体积10ml及以下占38.6%(190/492),其中5ml及以下占7.9%(39/492)。生精小管内见成熟精子患者隐匿精子症检出率14.8%(13/88),生精小管内见生精细胞未见成熟精子患者隐匿精子症检出率11.4%(24/211),唯支持细胞综合征患者隐匿精子症检出率5.2%(10/193),唯支持细胞综合征患者隐匿精子症检出率显著下降(P<0.05)。结论:睾丸生精功能可能为局灶性,单次睾丸活检难以全面、完整反映睾丸生精功能状态。睾丸体积显著低于正常参考值仍会存在生精功能。睾丸活检适应证的掌握过于宽松。采用WHO的睾丸组织学分类方法,能更方便、更有效指导临床进一步检查及治疗方案。

NDRG2与转录因子NF-κB在不育症患者及动物睾丸间质细胞凋亡模型中的作用

睾丸间质细胞凋亡是一些临床不育症，例如，唯支持细胞综合征以及生精功能低下的患者睾丸活检标本中常见的病理改变。前期研究证实，许多促凋亡因子，例如，NF—κB（nuclear factor—kappaB）和Fas，在这一过程中发挥着重要作用。然而，睾丸间质细胞凋亡的具体信号通路仍不清楚。

血清卵泡刺激素与抑制素B联合检测评估无精子症睾丸生精功能

目的联合检测育龄男性无精子患者血清卵泡刺激素(FSH)和抑制素B(INHB)水平评估睾丸生精功能的临床诊断价值。方法 95例无精子症患者均行血清FSH、INHB检测,根据睾丸活检病理组织学分类,唯支持细胞综合征20例、生精低下25例、成熟阻滞18例和生精功能正常32例。统计分析FSH和INHB的血清水平与病理分类的相关性。结果血清FSH、INHB和INHB/FSH在唯支持细胞综合征组与其他组比较具有显著性差异(P<0.05),生精功能低下组、成熟阻滞组和生精功能正常组比较没有显著性差异(P>0.05);FSH、INHB和INHB/FSH与精细胞成熟阻滞无显著相关性(P>0.05),而在其他组别中均具有显著负相关性(P>0.05);INHB和INHB/FSH在所有研究组别中均具有显著性正相关(P<0.05);血清INHB小于28.55 pg/ml诊断唯支持细胞综合征的敏感度为97%,特异性为85%。结论血清FSH和INHB水平不能有效区分睾丸生精功能状态,但能有效确定唯支持细胞综合征,其他类型的生精功能异常仍需依赖活检病理组织学检查。

无精子症及严重少精子症患者Y染色体微缺失类型与睾丸活检成熟精子检出率的相关性

目的探讨无精子症及严重少精子症患者Y染色体微缺失的缺失类型与睾丸活检成熟精子检出率的关系。方法收集病因诊断为Y染色体微缺失的无精子症及严重少精子症患者的完整睾丸活检病理报告。根据Y染色体微缺失区域类型,将患者分为AZFa或AZFb缺失组和无AZFa或AZFb缺失组。分析Y染色体微缺失的缺失类型与精液分析结果、睾丸组织学类型、睾丸体积、卵泡刺激素、黄体生成素之间的关系。结果在254例Y染色体微缺失患者中,睾丸活检成熟精子检出率9.4%。AZFa或AZFb缺失组精液分析精子检出率显著降低(P<0.01),睾丸活检成熟精子检出率显著降低(P<0.01),两组患者在睾丸体积、卵泡刺激素、黄体生成素水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 Y染色体微缺失患者睾丸活检成熟精子检出率低。缺失类型与睾丸活检成熟精子检出率相关,缺失类型能有效预测睾丸活检成熟精子检出率。

紧密连接蛋白11在非梗阻性无精子症患者睾丸组织中的表达

目的:分析紧密连接蛋白11(CLAUDIN-11)在非梗阻性无精子症(NOA)患者不同生精障碍类型的睾丸组织中的表达情况,探讨其临床意义。方法:62例NOA患者按不同病理类型分为精子发生能力低下(HS)组和唯支持细胞综合征(SCO)组,其中HS组30例,SCO组32例。免疫组化法检测CLAUDIN-11在睾丸组织中的表达,实时荧光定量PCR检测CLAUDIN-11 mRNA的表达变化,化学发光法检测生殖激素在两组间的差异。结果:免疫组化结果显示,CLAUDIN-11在HS组的表达主要分布于靠近生精小管管壁的支持细胞胞质,在SCO组的表达定位混乱。实时荧光定量PCR结果显示,CLAUDIN-11 mRNA在SCO组表达高于HS组,分别为0.013±0.002、0.008±0.001(t=10.616,P<0.01)。血清LH和FSH在HS组和SCO组患者中差异显著[(3.62±1.34)IU/L vs(4.96±3.10)IU/L,(5.36±2.80)IU/L vs(10.65±9.18)IU/L,P均<0.05]。结论:CLAUDIN-11在睾丸支持细胞上的表达上调,可能在NOA患者睾丸生精功能障碍的发生和发展中起重要作用。

无精子症患者睾丸活检结果分析

无精子症可以分为梗阻性与非梗阻性两大类型。梗阻性无精子症由于输精管道缺如（如输精管、精囊缺如）或输精管道阻塞（如输精管结扎、射精管梗阻或附睾炎症形成硬结等）所致。一般情况下睾丸或附睾内精子数量较多，成熟度也较高。采用睾丸或附睾中的精子进行卵子胞质内单精子显微注射辅助生育，妊娠成功率与常规体外受精相似。非梗阻性无精子症由于生精细胞分化或精子细胞变形的不同阶段发生阻滞所致，又可以分为多种类型。有的为唯支持细胞综合征，由于生精小管内无生精细胞。睾丸内无精子发生。目前无有效治疗手段：有的由于生精细胞分化障碍，睾丸内可能有不同阶段的生精细胞，甚至精子细胞或精子。对有精子细胞或精子的患者，有可能通过卵子胞质内单精子显微注射技术实现生育。因此，明确无精子症的病理类型具有重要的临床意义，而判断无精子症病理类型的有效方法是睾丸活检。

Bcl-2、Bax及CLAUDIN-11在生精功能障碍睾丸组织中的表达及其意义

目的:研究B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、 Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞紧密连接蛋白(CLAUDIN)-11在不同严重程度生精功能障碍患者睾丸组织中的表达,探讨其临床意义。方法:收集80例睾丸组织标本,分为生精功能正常组、轻度生精功能障碍组、重度生精功能障碍组及唯支持细胞综合征组各20例,采用免疫组化法、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测睾丸组织中Bcl-2、Bax及CLAUDIN-11的表达情况;采用电化学发光免疫分析法检测患者血清中卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)、黄体生成素(LH)、睾丸酮(T)水平。结果:免疫组化结果表明,Bcl-2及Bax主要表达于生精细胞的细胞质中,CLAUDIN-11在生精小管中有较高的阳性表达;qRT-PCR结果表明,与生精功能正常组相比,唯支持细胞综合征组患者的睾丸组织中Bax及CLAUDIN-11 mRNA表达水平显著增加(P﹤0.05),而Bcl-2 mRNA表达水平显著降低(P﹤0.05);与生精功能正常组患者相比,重度生精功能障碍组和唯支持细胞综合征组患者血清中FSH、PRL、 LH水平增高,T水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);流式细胞分析表明,在轻度生精功能障碍组、重度生精功能障碍组患者中细胞凋亡率显著高于生精功能正常组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:睾丸组织中Bax蛋白异常上调,Bcl-2蛋白表达下调,加速了生精细胞的凋亡;同时CLAUDIN-11在睾丸组织中的异常上调,致使生精上皮空间构象发生异常,在患者生精功能障碍的发生发展中发挥着重要作用。

人类精子发生中的遗传异常

精子发生是一个复杂的过程，受到染色体上众多基因的调控。染色体及其携带的基因缺失或异常可以不同程度地影响到精子的发生，并影响男性的生育能力［1］。几乎90%的男性不育患者具有不同程度的精子发生障碍，尽管其病因还不完全清楚，但遗传异常是主要的原因之一［2］。一些研究发现，男性不育患者的外周血淋巴细胞染色体检查异常，并与严重的少精子或无精子相关。但是，男性不育不仅与体细胞染色体异常有关，还可由于生殖细胞的染色体异常所致。据报道4%的男性不育与性染色体异常有关，1%与常染色体异常有关。由于检测方法和病例选择的差异，染色体异常的发生率波动于2.2%～10.3%。生精障碍中基因异常约占30%，多数伴有特发性少精子及无精子症。在男性不育（尤其是无精子症）患者中，多数病因不清楚，染色体异常或 Y 染色体微缺失发生接近20%（2.2%～19.6%）。