唯BH3域蛋白在肿瘤治疗中的研究进展

唯BH3域蛋白作为Bcl-2蛋白家族的一大亚类,通过抑制Bcl-2抗凋亡蛋白和(或)激活Bcl-2促凋亡蛋白,在调节细胞凋亡的过程中起着极其重要的作用。许多癌症中编码唯BH3域蛋白的基因发生严重突变,而且在小鼠中敲除这些基因后可诱导肿瘤的发生,这提示唯BH3域蛋白可作为肿瘤抑制剂。唯BH3域模拟物正发展为新型小分子靶向抗癌药物,这可能有助于为肿瘤设计更好的治疗策略。

衣原体分泌性蛋白研究进展

衣原体分泌性蛋白是由衣原体基因编码并分泌到宿主细胞胞浆中的具有酶活性蛋白,研究最多的是蛋白酶体样活性因子即CPAF。CPAF能抑制IFN-γ诱导的MHC分子的表达、裂解角蛋白-8并通过裂解宿主细胞唯BH3域蛋白参与抗凋亡作用。2005年又发现两种肺炎嗜衣原体的分泌性蛋白CPn0796和CPn0797,但对其研究不多。

唯BH3域蛋白与细胞凋亡

唯BH3域蛋白是Bcl-2蛋白家族中的一类仅含有BH3同源区域的促凋亡分子。不同的凋亡刺激可以通过不同的途径活化不同的唯BH3域蛋白,且表现细胞类型特异性。唯BH3域蛋白通过与同一家族的其它抗凋亡或促凋亡蛋白相互作用,在启动线粒体通路中起重要作用。有些唯BH3域蛋白在内质网通路和死亡受体通路中也起到一定作用。对该类蛋白的研究将有助于深化对凋亡的认识,并为疾病治疗提供新的方法和思路。

中耳胆脂瘤中DAPI核染色、FOXO3和Bim的表达和意义

目的检测中耳胆脂瘤中人类叉头框O3(forkhead box O3,FOXO3)、唯BH3域蛋白(Bcl-2 interacting mediator of cell death,Bim)的表达和相关性,以及Bim和4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole,DAPI)染色的相关性,探讨FOXO3和Bim在中耳胆脂瘤中的作用。方法应用免疫组化染色(immunohistochemistry)检测30例中耳胆脂瘤标本及15例正常皮肤中FOXO3、Bim的表达和定位;通过免疫荧光技术(immunofluorescence,IF)检测这些标本中Bim和DAPI的染色情况;应用Western blot检测以上标本FOXO3、Bim及内参的表达情况;分析Bim和DAPI核染色的相关性、Bim和FOXO3表达的相关性。结果①免疫组化染色显示,FOXO3在胆脂瘤和正常皮肤的细胞核及胞质均有着色,在胆脂瘤细胞核中FOXO3的阳性样本率(36.7%,11/30)明显低于正常皮肤(86.7%,13/15)(χ^(2)=10.04,P<0.05);胆脂瘤细胞胞质中FOXO3的阳性率(30.0%,10/30)也显明低于正常皮肤(80.0%,12/15)(χ^(2)=8.72,P<0.05)。Bim主要定位于胆脂瘤和正常皮肤的细胞质,其在胆脂瘤中的阳性率(53.3%,16/30)明显低于正常皮肤组织(93.3%,14/15)(χ^(2)=7.20,P<0.05)。②免疫荧光染色显示DAPI和Bim在胆脂瘤的荧光值(分别为25.37±3.67和35.16±4.21)均弱于正常皮肤(分别为91.45±10.14和82.51±7.34),差异有统计学意义(t=1.93,P<0.05;t=1.71,P<0.05)。③Western blot检测显示胆脂瘤中FOXO3和Bim的表达均明显低于正常皮肤,差异具有统计学意义(t=2.01,P<0.05;t=1.99,P<0.05)。④在中耳胆脂瘤标本中,FOXO3和Bim呈正相关(r=0.362,P<0.05);Bim和DAPI呈显著正相关(r=0.501,P<0.01)。结论FOXO3/Bim信号通路在中耳胆脂瘤的形成过程中发挥了作用,且该作用与抗凋亡有关。

唯BH3域蛋白与神经细胞凋亡

细胞凋亡在神经细胞的生理性和病理性死亡中起着重要作用。唯BH3域蛋白是Bcl-2家族中的一类仅含有BH3同源结构域的促凋亡分子,它们通过抑制Bcl-2抗凋亡成员的活性或激活Bax/Bak样促凋亡成员的活性来调节细胞凋亡。最近研究表明,唯BH3域蛋白在凋亡的启动及凋亡通路的沟通中发挥着极其重要的作用。

甲泼尼龙预处理对大鼠机械通气相关性肺损伤的影响及机制

目的观察甲泼尼龙预处理对大鼠机械通气相关性肺损伤的影响,并探讨其机制。方法实验大鼠分为C组、V组、Mp1组、Mp2组、Mp3组,各20只。C组不行机械通气,自主呼吸空气4 h;V组、Mp1组、Mp2组、Mp3组机械通气4 h,机械通气前20 min后三组分别静脉输注甲泼尼龙2、10、30 mg/kg,V组静脉输注等容量生理盐水。比较各组插管即刻(T_1)及机械通气1、2、4 h(T_(2~4))时股动脉血氧合指数(OI)。光镜下观察各组肺组织病理学变化情况。比较各组T_4时肺通透指数(LPI)、肺湿/干重(W/D)、肺泡损伤率(IAR)、肺组织细胞凋亡指数(AI)。采用RT-PCR法检测肺组织c-Jun氨基末端激酶(JNK)mRNA表达。采用Western blotting法检测JNK、磷酸化JNK(pJNK)、唯BH3结构域蛋白(BID、BIM、PUMA)、Caspase-3蛋白表达。结果与C组相比,V组和Mp1组T_3、T_4时OI低,W/D、LPI、IAR、AI高,p-JNK蛋白、JNK mRNA、BID、BIM、PUMA、Caspase-3表达高(P均<0.05)。与V组相比,Mp2、3组T_(3、4)时OI高,W/D、LPI、IAR、AI低,p-JNK蛋白、JNK mRNA、BID、BIM、PUMA、Caspase-3表达低(P均<0.05),且肺组织病理损伤轻。结论甲泼尼龙预处理可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,这可能与其抑制肺组织JNK磷酸化,下调唯BH3结构域蛋白表达,抑制Caspase-3表达,减少肺组织细胞凋亡有关。

黄芩苷对沙眼衣原体宿主细胞抗凋亡活性的抑制作用

目的:探讨黄芩苷对沙眼衣原体感染诱导宿主细胞抗凋亡效应的影响,并分析其可能的作用机制。方法:沙眼衣原体D型菌株感染HeLa229细胞并予以黄芩苷干预后,Hoechst33258染色和AnnexinV/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,流式细胞术检测活化Caspase3表达水平,Western blot检测CPAFc及唯BH3域前凋亡蛋白(Bim、Bik、Puma)的表达水平。结果:黄芩苷干预能显著提高沙眼衣原体感染宿主细胞凋亡百分比及感染细胞内活化Caspase-3水平,抑制CPAF表达并阻碍Bim、Bik、puma的降解。结论:黄芩苷明显抑制沙眼衣原体宿主细胞的抗凋亡活性,而阻碍CPAF对唯BH3域前凋亡蛋白的降解可能是其重要机制。

全反式维甲酸与阿糖胞苷或柔红霉素不同联用方式对体外HL-60氧张力及凋亡相关通路的影响

目的研究全反式维甲酸(ATRA)以不同方式联用阿糖胞苷(Ara-C)或柔红霉素(DNR),作用于白血病细胞株HL-60致细胞内氧化还原物质及凋亡相关通路蛋白的变化。方法体外培养HL-60细胞株,细胞悬液以密度5×10~5·mL^(-1)接种于24孔板中。将细胞分为7组,A组为正常对照组;B组将ATRA与Ara-C同时联合作用24 h;C组预先用ATRA作用24 h,然后改用Ara-C继续作用24h;D组预先用Ara-C作用24h,然后改用ATRA继续作用24h;E组将ATRA与DNR同时联合作用24h;F组预先用ATRA作用24h,然后改用DINR继续作用24h;G组预先用DNR作用24h,然后改用ATRA继续作用24h。MTT法测定细胞活力,根据试剂盒说明书测定细胞内总SOD酶活力和GSH水平,Westem印迹检测唯BH3域蛋白Bim表达量及MAPK信号通路磷酸化水平。结果细胞抑制率为序贯给药组(C、D、G、F组)高于同时给药组(B、E组),在序贯给药组中为先化疗药后ATRA组(D、G组)高于先ATRA后化疗药(C、F组)。与A组相比,各组SOD酶活力均明显降低,其中C、F组降低最多。D、G组细胞内GSH水平明显降低,而B、C、E、F组GSH水平明显升高。唯BH3域蛋白Bim相对表达水平随细胞抑制率升高而增多。B、C、E、F组JNK磷酸化水平降低,D、G组升高;B、C、E组p38磷酸化增多;各给药组ERK磷酸化情况无显著变化。结论不同的药物联用方式能通过细胞内GSH水平、凋亡相关蛋白以及MAPK信号通路来影响HL-60的凋亡水平。