重组人唾液淀粉酶A的制备及活性鉴定

目的利用基因工程制备重组人唾液淀粉酶A(rSAA),用其替代唾液中的SAA水解淀粉。方法设计一对带酶切位点的引物,PCR扩增SAA cDNA全长,将pET-28a质粒和PCR产物双酶切、连接。连接产物热激法转化大肠杆菌DH5α,于含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落,培养抗性菌落,抽提质粒,进行酶切和测序鉴定。将重组质粒(记为pS1)转化大肠杆菌BL21(DE3),用含卡那霉素的LB平板筛选抗性菌落(记为BL-pS1),培养BL-pS1,ITPG诱导rSAA表达。收集菌体,重悬于pH6.8的磷酸缓冲液,超声裂解,离心取上清,测试其水解淀粉的活性。结果构建了SAA cDNA的原核表达载体pS1,rSAA在宿主菌BL21(DE3)中获得可溶性表达,rSAA能高效水解淀粉。结论用rSAA取代唾液中SAA水解淀粉操作安全、取用方便、利于环保。

白术内酯Ⅰ及白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响

目的通过研究白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对唾液淀粉酶活性的影响来探讨白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ是否是白术健脾的有效成分。方法采用红色染色淀粉法测定白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对酶活性的影响。结果白术内酯Ⅰ具有增强淀粉酶活性的作用。结论白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的有效成分之一。

四君子汤对利血平致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌的影响

目的观察脾虚证大鼠唾液淀粉酶分泌情况及四君子汤治疗作用。方法雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,模型组,大鼠皮下注射利血平,空白组大鼠注射等量生理盐水,共8d;造模结束后将模型组分为中药组和模型组,中药组给予灌服四君子汤,模型组和正常组给予灌服等量的双蒸水,灌服4周后进行取材。麻醉动物,取下左侧腮腺,缝合伤口,等大鼠稍清醒时用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30min;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺淀粉酶活性、电镜下观察腮腺内酶原颗粒数量、腮腺组织病理。结果模型组大鼠酸刺激后腮腺内残余的淀粉酶活性和酶原颗粒高于正常组大鼠,经四君子汤治疗后脾虚大鼠的唾液淀粉酶的分泌基本恢复正常,各组腮腺组织没有明显病理改变。结论四君子汤对利血平所致脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有明显治疗作用,机制与腮腺组织病理学无关。

柠檬酸滤纸面积及浓度对刺激健康人唾液分泌和唾液淀粉酶活性改变的影响

【目的】比较不同面积和浓度柠檬酸滤纸刺激对健康人唾液流率(mL/min)和唾液淀粉酶(salivary alpha-amylase,sAA)活性比值的影响。【方法】募集9例健康志愿者,分别给予0.2 mol/L 0.5 cm×0.5cm、0.2 mol/L 1 cm×1 cm、0.2mol/L 2 cm×2 cm、0.1 mol/L 1 cm×1 cm和0.4 mol/L 1 cm×1 cm 5种不同规格的柠檬酸浸泡滤纸刺激1 min,坐位采集刺激前2 min、刺激时1 min和刺激后2 min全唾液标本,并记录唾液量(mL),以碘—分光光度法测定sAA活性(单位),分别计算刺激时和刺激后的sAA活性比值以及刺激前、刺激时和刺激后唾液流率。【结果】对于不同面积0.2 mol/L柠檬酸滤纸,以2 cm×2 cm刺激下唾液流率(刺激时:1.583 3±0.813 9 mL/min;刺激后:0.675 0±0.258 0 mL/min)和sAA活性比值(刺激时:1.296 7±0.318 4;刺激后:1.463 7±0.109 3)增加最为显著(P<0.05);对于不同浓度1 cm×1 cm柠檬酸滤纸,以0.4 mol/L浓度刺激下唾液流率(刺激时:1.494 4±0.569 2 mL/min;刺激后:0.852 8±0.404 7 mL/min)和sAA活性比值(刺激时:1.557 1±0.458 5;刺激后:1.724 6±0.452 7)增加最为显著(P<0.05);对于刺激开始后不同采集时间段,除0.1 mol/L 1 cm×1 cm和0.2 mol/L 0.5 cm×0.5 cm柠檬酸滤纸刺激时1 min的sAA活性比值比刺激后2 min高之外,其他都表现为刺激后2 min的sAA活性比值比刺激时1 min显著增加(P<0.05);对于流率与sAA活性的关系,虽然刺激时1 min的唾液流率均高于刺激前2 min和刺激后2 min,但刺激后2 min的唾液流率与sAA活性正相关性(R2=0.858 8),跟刺激前2 min(R2=0.815 1)相近(P>0.05),且显著高于刺激时1min(R2=0.462 5,P<0.05)。【结论】健康人唾液流率和sAA活性与柠檬酸滤纸的面积和浓度密切相关;sAA活性比值实验唾液的采集,可以选择0.2 mol/L 2 cm×2 cm柠檬酸滤纸刺激舌尖1 min,以采集刺激后2 min的全唾液为宜。

四君子汤对脾虚大鼠腮腺唾液淀粉酶分泌障碍及VIP-cAMP信号通路的影响

目的:观察四君子汤对脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍治疗效果,并揭示其作用机制。方法:大鼠皮下注射利血平0.5 mg/kg,正常对照组大鼠注射等量生理盐水,共8 d;造模结束后模型动物分为模型组和四君子汤组,四君子汤组灌胃给予四君子汤,模型组和正常对照组灌胃给予等量双蒸水,给药4 w后进行取材。麻醉动物,取左侧腮腺,缝合伤口,大鼠稍清醒时,用10%冰乙酸溶液20μL刺激大鼠舌尖,1次/min,共刺激30次;处死,取下右侧腮腺。检测腮腺组织唾液淀粉酶活性(sAA)c、AMP及VIP含量、PKA活性和VAMP8、SNAP-23蛋白表达。结果:四君子汤组大鼠腮腺内sAA与正常对照组大鼠无显著差异,模型组大鼠酸刺激后sAA活性显著高于正常对照组大鼠,酸刺激前VIP含量、PKA活性各组大鼠无显著差异;酸刺激后,正常对照组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性显著升高,模型组大鼠VIP轻微升高,cAMP含量、PKA活性显著低于正常对照组,四君子汤组大鼠VIP及cAMP含量、PKA活性有一定程度恢复。模型组VAMP-8蛋白表达与正常对照组比较无显著差异,SNAP-23蛋白表达有所下降;与模型组比较,四君子汤组大鼠SNAP-23、VAMP-8蛋白表达增强。结论:四君子汤对利血平脾虚大鼠唾液淀粉酶分泌障碍有一定疗效,可能通过恢复脾虚大鼠腮腺细胞VIP-cAMP信号通路改变起到治疗作用,包括提高VIP含量和提高SNAP-23和VAMP-8蛋白表达。

白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响

目的研究白术提取液及成分对唾液淀粉酶活性的影响。方法采用淀粉酶比色测量法,进行了白术的水煎液、醇提液、白术挥发油及白术内酯Ⅰ、白术内酯Ⅲ对酶活性影响的实验。结果白术水煎液能明显增加酶的活性,白术醇提液及白术内酯Ⅰ对酶活性也有增强作用,而白术挥发油及白术内酯Ⅲ却抑制酶的活性。结论白术内酯Ⅰ可以作为白术健脾运脾的效应成分之一。

唾液和唾液淀粉酶临床研究进展

唾液淀粉酶是唾液蛋白重要组成成分,其活性是交感神经最为敏感的指标,并与很多疾病的诊断和疗效密切相关,因此它具有很好的临床应用价值。综述唾液淀粉酶的研究意义、影响唾液淀粉酶活性因素和相关研究方法以及唾液样品的采集处理等,为临床应用和研究提供参考。

正常人α-唾液淀粉酶活性昼夜变动及择时电针的效应

目的:研究正常人α-唾液淀粉酶活性的昼夜节律,观察不同时辰施针对其活性的影响。方法:以中医时间医学理论为指导,并运用现代时间生物学与时间医学方法,将30名健康大学生随机分为对照组和子、卯、午、酉4个时辰针刺组,4个时辰针刺组分别于0000、0600、1200、1800电针双侧"足三里"穴,观察正常人α-唾液淀粉酶活性的昼夜节律变化以及不同时辰针刺的作用。结果:正常人α-唾液淀粉酶活性存在明显的昼夜波动,其峰相位在-299.92度,即在约20:00α-唾液淀粉酶活性最高;子、卯、酉时施刺均使其昼夜波动加大,且以卯时最为显著,并出现典型的昼夜节律,午时施刺后波动变小。结论:正常人α-唾液淀粉酶活性有明显昼夜变化,且峰相位在晚上(约20:00);不同时辰施针对α-唾液淀粉酶活性昼夜波动有不同的影响。

3种方法对酸刺激前后唾液淀粉酶活性及其活性比值检测的影响

目的比较碘-淀粉法、Bernfeld法和EPS-G7速率法3种方法检测酸刺激前后唾液淀粉酶(sAA)活性及其活性比值的差异,探讨3种方法检测sAA活性之间的相关性。方法采集5例健康志愿者柠檬酸刺激前后的唾液标本各5份,分别用3种方法3次重复检测每份唾液标本的sAA活性,计算sAA活性及其活性比值的变异系数,并对3种方法检测的sAA活性的相关性进行分析。结果 3种方法检测的sAA活性及其总变异系数差异有统计学意义(P<0.05),其中以EPS-G7速率法检测sAA活性和总变异系数最小;3种方法检测的sAA活性比值及其比值的变异系数差异无统计学意义(P>0.05);3种方法中的任意2种方法检测的sAA活性都有显著相关(P<0.05),相关系数都在0.96以上。结论 3种方法检测的sAA活性可以通过回归方程进行相互转换,检测精度以EPS-G7速率法的最高,而且sAA活性比值的数据处理方式可以减少3种方法之间变异系数的差异。

麦粒灸对脾虚泄泻证患者唾液淀粉酶活性及血清SIgA的影响

目的 :观察麦粒灸对脾虚泄泻患者唾液淀粉酶活性及粪便SIgA的影响。方法 :将患者随机分为治疗组和对照组 ,治疗组采用麦粒灸灸患者脾俞、胃俞、足三里 ,每穴 3壮 ,隔日 1次 ,连续3天 ;对照组用中药治疗。结果 :麦粒灸能显著改善患者脾虚泄泻症状 ,并显著提高唾液淀粉酶活性及降低血清SIgA ,其作用优于对照组。结论 :麦粒灸治疗脾虚泄泻的疗效是肯定的。

采用唾液淀粉酶和D-木糖排泄率对利血平脾虚证模型的评价研究

中医动物模型是开展中医证候及中药新药实验研究的重要方法之一,已成为中医科研方法体系的一个重要组成部分,但是如何对所建立的动物模型进行评价,是中医证候模型研究的难点。

脾虚证患者唾液淀粉酶活性变化与一氧化氮相关性的初步探讨

目的 :分析脾虚患者基础状态下 (酸刺激前 )及酸刺激后唾液一氧化氮代谢产物浓度的变化 ,探讨脾虚证酸刺激前后唾液淀粉酶活性变化与一氧化氮的关系。方法 :选择脾虚证患者 ,并以胃阴虚证患者为对照组 ,病例均为Ⅱ型糖尿病合并胃轻瘫 ;检测基础状态下及酸刺激后唾液一氧化氮代谢产物浓度 ,并与脾虚证的重要指标酸刺激前后唾液淀粉酶活性相关分析。结果 :1)发现脾虚证患者基础状态下唾液一氧化氮代谢产物浓度显著高于对照组 ,酸刺激后唾液一氧化氮代谢产物浓度显著降低 ;基础状态下唾液淀粉酶活性略高于对照组 (P >0 .0 5 ) ,显著高于以前研究的病证 ,酸刺激后唾液淀粉酶活性显著下降 ;唾液淀粉酶活性的变化与唾液一氧化氮代谢产物浓度的变化显著相关 (r =0 .6,P <0 .0 5 ) ;而胃阴虚证对照组患者酸刺激前后唾液淀粉酶活性及一氧化氮代谢产物浓度均无显著变化。 2 )本实验酸刺激前后唾液淀粉酶活性均显著高于以前研究的病证。结论 :1)脾虚证的重要指标酸刺激前后唾液淀粉酶活性变化与唾液一氧化氮相关 ,脾虚证可能存在交感神经系统—一氧化氮通路功能障碍 ,致酸刺激后唾液淀粉酶活性降低 ,可能存在副交感神经系统—一氧化氮通路功能代偿增强 ,致基础状态下唾液淀粉酶活性升高。 2 )唾液淀粉酶活性可能受?

绿茶多酚防龋涂膜对唾液淀粉酶的影响

作者通过对绿茶多酚防龋涂膜抑制人唾液淀粉酶活性的观察，发现绿茶多酚防龋涂膜对人唾液淀粉酶活性的抑制率在绿茶多酚０．７８和１．５６ｇ／Ｌ浓度处有两个高峰。对涂膜中绿茶多酚释放量的观察发现，绿茶多酚的释放量涂膜液态时高于成膜后，成膜后绿茶多酚的释放有限，提示绿茶多酚防龋涂膜对人唾液淀粉酶活性影响甚微。

中药生津剂在头颈部放疗中对唾液淀粉酶含量的影响

目的探讨自制中药生津剂在头颈部放疗中对唾液淀粉酶含量的影响。方法将33位因头颈部肿瘤而放疗的患者(均为首程放疗)随机分为两组:试验组(n=16)治疗采用中药生津剂加放疗;对照组(n=17)单纯放疗。检测其放疗前及放疗不同剂量(20、40、60 Gy)时的唾液淀粉酶含量。本生津剂方剂组成为:饮剂:党参,玄参,丹参,天冬,麦冬,甘草;漱剂:银花,菊花,山楂。结果随着放疗剂量的增加,两组患者唾液淀粉酶含量均降低,在放疗剂量至204、0 Gy时,两组有显著性差异(P<0.05)。当放疗剂量至60 Gy时,则无显著性差异(P>0.05)。结论本中药生津剂可在一定程度上减少涎腺的损害,从而保护涎腺,但不能降低放疗对涎腺的损害。

采用唾液淀粉酶活性指标对脾虚模型大鼠唾液采集方法的评价研究

目的：评价脾虚模型大鼠唾液采集方法的可行性。方法：采集利血平所致脾虚组大鼠和正常组大鼠各24例酸刺激前后的唾液,其中刺激后的唾液以0.4 mol/l 0.50 cm×0.50 cm柠檬酸滤纸,每隔2.5 min刺激大鼠舌尖30 s,获得刺激后0~5 min、6~10 min和11~15 min的唾液。Bernfeld法测定唾液淀粉酶（s AA）活性,计算s AA活性比值。结果：脾虚组衰竭明显,体质量比正常组显著降低;正常组与分组前所有大鼠刺激前和刺激后s AA活性及其活性比值比较差异无统计学意义;脾虚组酸刺激前的s AA活性与正常组比较差异无统计学意义,酸刺激后3个时间段的s AA活性和活性比值均比正常组显著降低。结论：建立唾液采集方法经s AA活性分析,表现出与人较为一致的趋势,可以用于脾虚大鼠s AA相关研究。

巴拉圭茶多酚的提取纯化及其对唾液淀粉酶活性的影响

以多酚质量分数为评判指标,对巴拉圭茶多酚的乙醇回流提取工艺、粗多酚的纯化工艺进行了研究,并采用碘-淀粉比色法比较不同质量浓度多酚对唾液淀粉酶活性的影响.结果显示,乙醇的体积分数为70%,回流时间60min,回流温度80℃,料液比1∶30为巴拉圭茶多酚的最佳提取工艺条件;乙酸乙酯是多酚最好的纯化试剂,纯化后多酚的质量分数为80.04%;纯化后的多酚对唾液淀粉酶的活性有抑制作用.

葛根异黄酮对唾液淀粉酶及阴沟肠杆菌的抑制作用初探

目的：揭示葛根异黄酮降血糖与减肥作用的机理。方法：以乙醇回流提取法分离提取不同地域的野葛和粉葛葛根异黄酮类;AOAC法和高效液相色谱法分析营养成分;以唾液淀粉酶和阴沟肠杆菌构建试验评价体系,用比色法测定葛根提取物（PREE）添加的抑制活性。结果：野葛与粉葛的基本营养没有显著的差异,但异黄酮成分的含量和组成差异显著;PREE对唾液淀粉酶的半抑制浓度（IC（50））是0.31-1.14mg/m L、对阴沟肠杆菌的IC（50）为0.49-0.56mg/m L。随着PREE浓度的增加,唾液淀粉酶活性减弱,阴沟肠杆菌的增殖速率降低。结论：葛根异黄酮对唾液淀粉酶活性和阴沟肠杆菌的增殖均具有抑制效果,直接影响糖代谢的初始阶段而发挥降血糖、减肥作用。

流率及唾液淀粉酶活性用于评价大鼠酸刺激前后唾液样本采集方法的探讨

目的了解柠檬酸刺激对大鼠唾液淀粉酶（s AA）活性和唾液流率的影响,探讨味觉刺激下的唾液标本采集方法。方法随机选取正常雌性SD大鼠30只,先用微量取样器抽取刺激前的全唾液,然后用0.4 mol/L 0.50 cm×0.50 cm的柠檬酸滤纸每隔2.5 min刺激大鼠舌尖30 s,5 min采集的唾液混合为一管,连续采集15 min,共3管唾液样本,记录每管唾液采集量,用Bernfeld法测定s AA活性,计算唾液流率、酸刺激前后流率和s AA活性比值,检测流率和s AA活性的相关性。结果大鼠酸刺激后0~5 min、6~10 min、11~15 min 3个时间段的s AA活性和唾液流率以及其比值都显著增加（P〈0.05）,但这些指标在刺激后的3个时间段之间差异无统计学意义（P〉0.05）。刺激前唾液流率与s AA呈显著正相关（P〈0.05）,刺激后呈显著负相关（P〈0.05）。结论柠檬酸刺激能显著增加大鼠唾液流率和s AA活性。以0.4 mol/L 0.50 cm×0.50 cm柠檬酸滤纸,每隔2.5 min刺激大鼠舌尖30 s,采集酸刺激后全唾液的方法,简便易行,适用于大鼠酸刺激后唾液标本的采集。

脾虚证唾液淀粉酶活性改变及其机制的研究进展

历代医家认为脾与唾液有着密切关系,唾液淀粉酶(sAA)已被国内外学者作为反映脾虚证唾液蛋白分泌改变的主要指标进行脾虚证的本质研究;研究发现脾虚证患者在酸刺激前后唾液淀粉酶活性比值下降,并对其发生机制进行探讨,认为主要与副交感神经功能偏亢、交感神经系统——NO通路功能障碍、总唾液糖蛋白及唾液淀粉酶N-糖基化均不完全等有关。今后可结合现代医学理论,从神经、内分泌调节、唾液蛋白的翻译后修饰环节改变、信号转导、蛋白质组学和基因组学方向进一步深入研究揭示脾虚证唾液淀粉酶活性改变具体的发生机制。

不同倒班模式护士唾液淀粉酶的测定

目的:唾液淀粉酶可以作为心理应激的生理指标,本研究测评不同倒班、不同时间交接班护士的唾液淀粉酶水平,初步探讨护士不同倒班后的心理应激情况。方法:对济南市某三甲医院280名护士唾液淀粉酶浓度进行测评,比较不同倒班(两班、三班、白班)、不同时间交接班(两班17∶00、20∶00、三班23∶00、24∶00、01∶00)护士的唾液淀粉酶水平。结果:两班护士唾液淀粉酶浓度高于三班护士(158 vs.107,P<0.01)、高于白班护士(158 vs.92,P<0.01)。两班20∶00点交接班护士唾液淀粉酶浓度高于17∶00交接班护士(208 vs.136,P<0.01),三班01∶00交接班护士唾液淀粉酶浓度高于23∶00交接班护士(138vs.87,P<0.01)。结论:本研究提示,护士承担倒班工作模式时夜间交接班时间较晚承受的应激强度可能更大。