基于加权共表达网络和机器学习筛选唾液腺腺样囊性癌疾病特征性基因

目的:确定唾液腺腺样囊性癌潜在的生物标志物,以进一步了解腺样囊性癌潜在的发病机制。方法:从NCBI GEO数据库下载2个微阵列数据集(GSE59701、GSE88804),用LIMMA软件包筛选SACC差异表达基因。WGCNA寻找与SACC最相关的重要模块基因,以LASSO、SVM-RFE 2种机器学习算法识别hub基因。随后生成用于预测SACC的ROC曲线,判断诊断效果。采用R4.2.1软件进行统计学分析。结果:鉴定出3个hub基因(GABBR1、EN1和LINC01296),并用其建立一个预测性能较高的ROC曲线(AUC,1.000~1.000)。结论:采用WGCNA、LASSO和SVM-RFE获得3个枢纽基因(GABBR1、EN1和LINC01296)作为SACC的潜在生物标志物,为未来对SACC潜在关键基因的研究提供基础,为SACC的早期诊断和治疗提供依据。

沉默Ras同源物家族成员C对唾液腺腺样囊性癌增殖、侵袭和迁移的影响

目的探讨沉默Ras同源物家族成员C(RhoC)对唾液腺腺样囊性癌(SACC)增殖、凋亡、侵袭、迁移和上皮-间充质转化(EMT)的影响及其分子机制。方法选择2019年1月1日—2024年3月1日于青岛市市立医院手术切除的SACC病灶和正常唾液腺组织各27例,通过蛋白免疫印迹(Western blot)和免疫组织化学法检测RhoC的表达水平。针对RhoC基因序列设计3条小干扰RNA(siRNA),转染至SACC-LM和SACC-83细胞系中并评估转染效率。通过Western blot比较RhoC、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶1(ROCK1)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、扭曲家族bHLH转录因子1(TWIST1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)的蛋白表达水平。CCK-8实验、流式细胞术、Transwell侵袭实验、伤口愈合实验分别检测各组细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移能力的差异。生物信息学方法预测RhoC可能的上游微小RNA(miRNA)及其在SACC中的表达情况,双荧光素酶报告基因实验验证二者的结合位点。结果RhoC在SACC中的表达显著上升(P<0.05)。沉默RhoC后,实验组ROCK1、p-p38MAPK、TWIST1、N-cadherin、Vimentin的表达显著下降,E-cadherin的表达显著上升(P<0.05);p38MAPK的表达无明显差异(P>0.05);细胞增殖、侵袭和迁移能力显著下降,凋亡率显著上升(P<0.05)。miR-138-5p在SACC中低表达,miR-138-5p micmic可以显著下调转染RhoC野生型质粒后293T细胞的荧光素酶活性(P<0.05)。结论RhoC在SACC中高表达,沉默RhoC可能靶向下游ROCK1/p38MAPK/TWIST1信号通路从而抑制SACC的增殖、侵袭、迁移和EMT,同时促进其凋亡。miR-138-5p在SACC中低表达,是RhoC潜在的上游基因,二者可能存在结合位点。

Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinⅤ/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析。结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P<0.01)。结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用。

CENPF调控PI3K/AKT信号通路影响唾液腺腺样囊性癌进展

目的:探讨着丝粒蛋白F(centromere protein F,CENPF)在腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)发生发展中的作用和分子机制。方法:通过小干扰RNA转染敲低ACC细胞中的CENPF。通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、划痕实验和Transwell测定评估敲低CENPF对ACC细胞增殖、迁移、侵袭的影响;通过蛋白免疫印迹实验分析改变CENPF表达后ACC细胞中磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(serine/threonine protein kinase,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路相关蛋白表达变化,通过CCK-8、划痕实验和Transwell测定评估敲低CENPF联合PI3K抑制剂BKM-120对ACC细胞增殖、迁移、侵袭的影响。结果:敲低ACC-M中CENPF表达后,CCK-8实验证明其增殖能力减弱;划痕实验表明其迁移能力减弱,Transwell实验表明其侵袭能力减弱,PI3K/AKT通路关键蛋白p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平下降。在下调CENPF的ACC-M中加入PI3K抑制剂,PI3K/AKT通路关键蛋白表达水平进一步下降。此外,加入PI3K抑制剂后,CENPF下调的ACC-M增殖、迁移、侵袭能力较单纯下调CENPF的ACC-M进一步减弱。结论:CENPF通过调控PI3K/AKT信号通路参与ACC进展。

唾液腺腺样囊性癌微环境中肿瘤相关巨噬细胞外泌体差异表达miRNAs的筛选及验证

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)微环境中肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)外泌体miRNAs表达特征,分析其在SACC进展中的作用。方法:将SACC细胞与巨噬细胞共培养,获得SACC相关TAMs。应用超速离心法分别提取以上细胞外泌体,采用透射电镜、Western免疫印迹、外泌体纳米微粒追踪检测进行验证。对TAMs外泌体与对照组巨噬细胞外泌体进行RNA-seq测序,分析差异表达的miRNAs。利用miRanda和RNAhybrid软件对差异miRNAs进行靶基因预测,再对差异miRNAs作用的靶基因的集合分别进行GO和KEGG富集分析。利用qRT-PCR、CCK-8、细胞划痕实验、Transwell实验验证TAMs外泌体miRNAs表达及功能。采用SPSS 22.0软件包对数据进行统计学分析。结果:筛选出1595个差异表达的miRNAs,其中15个miRNAs表达差异变化具有统计学意义(P<0.05)。差异miRNAs作用靶基因富集分析发现,TAMs外泌体miRNAs靶基因参与调控癌症相关信号通路。qRT-PCR结果显示,TAMs外泌体has-miR-21-5p表达上调最显著。CCK-8、细胞划痕实验和Transwell实验发现,TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞增殖、迁移与侵袭能力。结论:TAMs外泌体hsa-miR-21-5p促进SACC细胞恶性进展。TAMs外泌体miRNAs可能在SACC进展中发挥重要作用,有望为SACC的诊治提供新的策略。

siRNA干扰Mcl-1对唾液腺腺样囊性癌SACC-2细胞生物活性的影响

目的:探讨siRNA干扰髓样细胞白血病-1分子(Mcl-1)对唾液腺腺样囊性癌细胞生物活性的影响。方法:构建Mcl-1-siRNA,转染入SACC-2细胞。应用real-time PCR法检测Mcl-1 mRNA表达水平及Western blotting检测Mcl-1蛋白表达水平。分别采用MTT法、Transwell小室法、流式细胞法观察Mcl-1对SACC-2细胞增殖、迁移及凋亡能力的影响。结果:与空白对照组、脂质体组和NC-siRNA组相比,Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞的增殖速度明显减缓;转染48 h后,Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞迁移数为(39±9.0)个,明显低于对照组(69±6.0)个;Mcl-1-siRNA组SACC-2细胞凋亡细胞百分率为8.6%(对照组为1.9%)。结论:沉默Mcl-1显著抑制唾液腺腺样囊性癌SACC-2细胞增殖和迁移能力,促进其凋亡。

LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响

目的:研究LY294002对唾液腺腺样囊性癌SACC-83细胞周期和细胞凋亡的影响。方法:用LY294002处理体外培养的SACC-83细胞,采用透射电镜技术进行细胞形态观察,MTT法计算细胞存活率,流式细胞术测定各细胞周期细胞分布比例和细胞凋亡情况。实验数据采用SAS8.2软件包进行单因素方差分析和两因素方差分析。结果:SACC-83细胞经LY294002(50μmol/L)处理96h,细胞存活率显著降低(P<0.01);LY294002(50μmol/L)处理SACC-83细胞72h,G0/G1期细胞逐渐增加,而S期和G2/M期细胞逐渐减少,凋亡的细胞逐渐增加(P<0.01)。结论:LY294002能显著抑制体外培养的SACC-83细胞增殖,使SACC-83细胞周期阻滞于G0/G1期,并诱导SACC-83细胞凋亡。

微血管密度、血管内皮生长因子与唾液腺腺样囊性癌预后的关系

目的了解微血管密度(MVD)、血管内皮生长因子(VEGF)的表达与唾液腺腺样囊性癌(SACC)预后的关系。方法对31例手术治疗的原发SACC患者进行60～159个月随访,并用CD34和VEGF单抗对其石蜡切片进行SP免疫组化染色。然后分别测定各切片的MVD值和VEGF的平均光密度(OD),并进行统计学分析。结果单因素分析显示,病理类型、TNM分期、MVD值和OD值均与SACC生存率有相关性(P=0.047、0.000、0.001、0.024),其中MVD在Cox分析中更具显著性意义(P=0.000)。MVD值在术后死亡分组、转移分组、带瘤分组、病理类型和TNM分组间均有显著性差异(P=0.029、0.045、0.019、0.031、0.000)。OD值在术后死亡分组、TNM和病理类型分组间有显著性差异(P=0.037、0.013、0.014)。Fisher检验显示,MVD分组间的SACC远处转移率有显著差异(P=0.032)。逐步线性回归分析显示:MVD值和OD值间呈线性正相关(P=0.029)。结论本研究表明,MVD、OD值均与SACC的生存预后显著相关,且MVD更具预后价值;MVD与SACC远处转移有显著相关性;VEGF在SACC中的过量表达,可使MVD值显著增加。

Slug、EMMPRIN和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:研究Slug、EMMPRIN和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达情况与临床病理特征间的关系及三者表达的相关性。方法:免疫组织化学染色方法检测115例SACC组织中Slug、EMMPRIN和E-cadherin的表达情况,结合临床病理资料进行统计学分析。结果:115例SACC标本中Slug和EMMPRIN阳性表达率分别为76.5%和69.6%,E-cadherin阳性表达率为51.3%。Slug和EMMPRIN的表达与SACC肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、复发、远处转移呈显著相关(P<0.05),E-cadherin的表达与肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、远处转移呈显著负相关(P<0.05)。同时,Slug的表达与EMMPRIN的表达呈显著正相关(P<0.05);EMMPRIN、Slug的表达与E-cadherin的表达均呈显著的负相关(P<0.05)。结论:Slug、EMMPRIN和E-cadherin在SACC中的表达与SACC的临床病理特征密切相关。

唾液腺腺样囊性癌p53基因突变及其与临床病理的关系

目的:研究唾液腺腺样囊性癌(ACC)p53基因突变及其与临床病理因素的关系。方法:选择38例唾液腺ACC病理标本,采用聚合酶链式反应单链构象多态性分析(PCR-SSCP)进行p53基因突变(5-8外显子)的检测;应用SPSS10.0统计学分析软件,采用Kaplan-Meier法进行生存分析,并绘制生存曲线。p53基因突变与ACC各病理类型、局部复发率、远处转移率及临床分期的关系采用Fisher精确检验。结果:p53基因5-8外显子突变检出率为65.8%,p53基因突变与唾液腺ACC的肿瘤复发、远处转移及术后生存有关(P<0.05),与肿瘤病理类型、临床分期无关(P>0.05)。结论:p53基因突变在唾液腺ACC中有较高的检出率,并可能与患者的预后有关。

BDNF和TrkB在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:观察BDNF和TrkB在唾液腺腺样囊性癌组织和细胞系中的表达,揭示BDNF和TrkB与唾液腺腺样囊性癌高转移特性和神经侵袭特性的关系。方法:以30例SACC标本为研究对象,以5例正常腮腺及3例腺泡细胞癌作为对照,采用免疫组化法对BDNF和TrkB进行检测。以SACC高、低转移细胞系ACC-2和ACC-M为研究对象,利用免疫组化、RT-PCR、实时荧光定量PCR和Western印迹,检测BDNF和TrkB在其中的表达差异。采用χ2检验进行统计学分析。结果:组织标本免疫组化显示:TrkB表达水平在嗜神经现象组显著高于未见嗜神经现象组(Ρ<0.05),BDNF表达水平与嗜神经现象无关(Ρ>0.05)。实时荧光定量PCR和Western印迹均检测到BDNF和TrkB在ACC-M中的表达高于ACC-2(Ρ<0.01)。结论:TrkB的表达强度与SACC的神经侵袭特性相关,BDNF和TrkB的表达强度与SACC的高转移特性相关。

MicroRNA-320a调控唾液腺腺样囊性癌侵袭转移的实验研究

目的:探讨microRNA-320a(miR-320a)对唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移能力的调控作用。方法:以唾液腺腺样囊性癌高转移细胞株ACC-M为实验样品,通过脂质体介导,将miR-320a的拟似物(miR-320a mimics)转染至ACC-M细胞,升高miR-320a的表达水平。采用荧光实时定量RT-PCR检测转染前、后ACC-M中miR-320a的表达变化,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变,并通过细胞计数试剂盒-8检测转染后细胞增殖能力的变化,流式细胞仪检测miR-320a对细胞凋亡的影响,Western印迹检测miR-320a的靶基因整合素β3(integrinβ3,ITGB3)的表达变化。应用SPSS13.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果:转染miR-320amimics后的ACC-M中miR-320a的表达明显上调(P<0.001)。ACC-M细胞的侵袭迁移能力显著降低(P<0.001),而细胞的增殖和凋亡无显著变化。Western印迹检测结果显示,Integrinβ3在低转移细胞株ACC-2表达阴性,在ACC-M中高表达;升高miR-320a在ACC-M中的表达,Integrinβ3表达明显降低。结论:低表达miR-320a有助于维持ACC的侵袭转移特性,调高其表达水平能有效抑制ACC-M的侵袭迁移能力。miR-320a可能通过调控其靶基因Integrinβ3的表达而发挥作用。

苦参碱对唾液腺腺样囊性癌细胞黏附侵袭抑制的影响及机制探讨

目的:研究苦参碱对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞黏附侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养ACC-M细胞系,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用黏附试验和Matrigel侵袭实验,研究苦参碱注射液及其不同浓度对ACC-M细胞黏附及侵袭能力的影响,采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:苦参碱注射液浓度在0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL时,对ACC-M细胞均有一定增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系。不同浓度苦参碱注射液处理ACC-M细胞24h后,其体外黏附和侵袭能力呈剂量依赖性下降。经苦参碱(0.75 mg/mL)作用后,ACC-M细胞的E钙黏素(E-cad蛋白)表达明显增强,与对照组有显著差异。结论:一定浓度的苦参碱可以抑制唾液腺腺样囊性癌细胞生长,降低细胞黏附和侵袭能力,其机制可能与上调E-cad蛋白表达有关。

XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移中的作用

目的:探讨肿瘤睾丸抗原家族中XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌高转移细胞ACC-M中的高表达是否与其转移相关。方法:采用RNA干扰方法抑制腺样囊性癌低、高转移细胞ACC-2、ACC-M中XAGE-1b基因的表达,检测该基因表达改变对肿瘤细胞体外迁移能力以及裸鼠体内肿瘤细胞肺转移能力的影响。实验结果采用SPSS11.5软件包进行单因素方差分析。结果:XAGE-1b基因干扰质粒转染腺样囊性癌细胞后,RT-PCR验证干扰效率显示,XAGE-1b基因表达量显著下降;Boyden小室检测肿瘤细胞体外迁移能力明显下降;在裸鼠体内检测基因干扰后的肿瘤细胞肺转移能力与ACC-M相比也显著下降(P<0.01)。结论:RNA干扰作用抑制了XAGE-1b基因的表达,体外实验和体内检测中显著影响了肿瘤细胞的迁移黏附以及肺转移能力,初步证实了XAGE-1b基因在唾液腺腺样囊性癌转移方面有重要作用。

MAB225对人唾液腺腺样囊性癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究表皮生长因子受体单克隆抗体(MAB225)对人唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞放射敏感性的影响。方法:通过双荧光染色法、四氮唑还原法(MTT)、流式细胞仪观察经MAB225处理后的ACC-2细胞放射后凋亡的变化,以评价MAB225对ACC-2细胞放射敏感性的影响。采用SPSS11.0软件包的单因素方差分析对数据进行统计学处理。结果:经MTT检测、双荧光染色和流式细胞仪检测,经MAB225和放射联合处理后的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例较未处理组上升3倍;而单纯放射处理的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例只增加1倍。结论:MAB225可以提高放射线对ACC-2细胞的杀伤作用,降低ACC-2细胞的放射后生存率。

BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:研究BDNF、TrkB和E-cadherin在唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)中的表达及其与临床病理特点的关系。方法:采用免疫组织化学染色检测76例唾液腺腺样囊性癌和20例正常唾液腺组织中BDNF、TrkB和E-cadherin的表达情况,并分析其与临床病理特征之间的关系。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行χ2检验、Wilcoxon秩和检验、Spearman相关系数检验。结果:与正常唾液腺组织相比,BDNF、TrkB在SACC组织中呈现高表达,阳性表达率分别为89.5%、92.1%;E-cadherin呈现中低表达,阳性表达率为46.1%。BDNF的表达与肿瘤临床分期、肿瘤转移显著相关(P<0.05)。TrkB的表达与肿瘤临床分期、神经侵袭、肿瘤转移显著相关(P<0.05)。E-cadherin的表达与肿瘤病理分型、临床分期、神经侵袭、转移呈显著负相关(P<0.05)。在SACC中,BDNF表达与E-cadherin表达无显著相关性(P>0.05),而TrkB表达与E-cadherin表达呈显著负相关(P<0.05)。结论:BDNF、TrkB和E-cadherin的表达与SACC的临床病理特征密切相关,检测3者的表达对SACC的诊断和临床病理研究具有重要的参考价值。

miR-181a抑制唾液腺腺样囊性癌侵袭、转移机制的实验研究

目的 :探讨miR-181a在唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭、转移中的作用。方法 :利用QRT-PCR检测miR-181a在一对不同侵袭、迁移能力细胞株中的表达水平。过表达或沉默miR-181a在SACC-LM和SACC-83细胞中的表达。利用激光共聚焦显微镜观察转染后细胞骨架的改变。Western免疫印迹检测转染后侵袭、转移相关因子的表达。通过尾静脉注射miR-181a mimics和mimics NC细胞,建立裸鼠肺转移模型。采用SPSS17.0软件包对数据进行统计学处理。结果:QRT-PCR结果显示,miR-181a在低侵袭、迁移能力SACC-83细胞中的表达量显著高于高侵袭、迁移能力的SACC-LM细胞。SACC-LM细胞转染miR-181a mimics后,细胞呈梭形,Slug、p ERK1/2、ERK1/2表达水平下调;SACC-83细胞转染miR-181a LNA后,细胞变圆,体积变小,Slug、p ERK1/2、ERK1/2表达水平升高。裸鼠肺转移模型miR-181a mimics组,细胞形成肺转移灶面积显著小于mimics NC组(P<0.05)。结论 :miR-181a能抑制SACC的侵袭和转移。

EZH2和P130在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:研究EZH2和P130在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义。方法:应用SP免疫组化法检测EZH2、P130蛋白在唾液腺腺样囊性癌中的表达。结果:EZH2在腺样囊性癌中的阳性表达率为67.86%,在正常腮腺组织中均为阴性表达,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。P130在腺样囊性癌中的阳性表达率为25.00%,在正常腮腺组织中的阳性表达率为90.0%,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05)。EZH2、P130在腺样囊性癌中的表达呈负相关。结论:EZH2与P130的异常表达可能在唾液腺腺样囊性癌的发生与发展过程中起重要作用。

盘状结构域受体1与基质金属蛋白酶2在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的:检测唾液腺腺样囊性癌(salivary gland adenoid cystic carcinoma,SACC)组织中盘状结构域受体1(discoidin domain receptor 1,DDR1)与基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)的表达,探讨两者在SACC中的表达意义及相关性。方法:应用SP免疫组织化学方法检测54例SACC标本和30例正常唾液腺组织中DDR1与MMP2的表达情况。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:DDR1在SACC中的阳性表达率为87.0%,显著高于正常唾液腺组织(10%,P<0.01)。DDR1的高表达与SACC的神经侵袭、淋巴结转移相关(P<0.05)。MMP2在SACC中的阳性表达率为68.5%,显著高于正常唾液腺组织(13.3%,P<0.01)。经Spearman等级相关分析,DDR1与MMP2呈现显著正相关(r=0.332,P<0.05)。结论:在SACC中,DDR1与MMP2共同高表达,与SACC的发生与发展相关。

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法:甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化;RT-PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果:3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化;ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC-M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC-M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论:ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MyoD1基因失活的主要机制,CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关。