Genistein对唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用

目的:研究酪氨酸蛋白激酶抑制剂Genistein(4',5,7-三羟基异黄酮)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的体外抗增殖作用及其对细胞增殖周期的影响。方法:用Genistein处理体外培养的SACC-83细胞,采用MTT检测法计算细胞存活率,显微照相记录细胞生长状态及形态学的改变,流式细胞仪测定细胞周期,AnnexinⅤ/PI法定量检测细胞凋亡,采用SPSS11.5统计软件对结果进行统计方差分析。结果:Genistein对SACC-83细胞有一定的抗增殖作用,且当其作用到一定时间、达到一定的浓度后,该作用与浓度及时间呈依赖关系;细胞形态发生改变,体积缩小,悬浮细胞逐渐增多;SACC-83细胞经220μmol/LGenistein作用3d,其生长受到明显抑制,阻断细胞生长于G2/M期,并明显诱导细胞凋亡(P<0.01)。结论:Genistein可以显著抑制人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83的生长,阻断细胞周期于G2/M期,并诱导细胞凋亡;提示酪氨酸蛋白激酶在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展中起着重要作用。

苦参碱对唾液腺腺样囊性癌细胞黏附侵袭抑制的影响及机制探讨

目的:研究苦参碱对唾液腺腺样囊性癌ACC-M细胞黏附侵袭能力的影响并初步探讨其机制。方法:体外培养ACC-M细胞系,MTT法测定药物对细胞增殖的抑制作用,应用黏附试验和Matrigel侵袭实验,研究苦参碱注射液及其不同浓度对ACC-M细胞黏附及侵袭能力的影响,采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:苦参碱注射液浓度在0.25、0.50、0.75、1.00 mg/mL时,对ACC-M细胞均有一定增殖抑制作用,且呈明显的量效和时效关系。不同浓度苦参碱注射液处理ACC-M细胞24h后,其体外黏附和侵袭能力呈剂量依赖性下降。经苦参碱(0.75 mg/mL)作用后,ACC-M细胞的E钙黏素(E-cad蛋白)表达明显增强,与对照组有显著差异。结论:一定浓度的苦参碱可以抑制唾液腺腺样囊性癌细胞生长,降低细胞黏附和侵袭能力,其机制可能与上调E-cad蛋白表达有关。

MAB225对人唾液腺腺样囊性癌细胞放射敏感性的影响

目的:研究表皮生长因子受体单克隆抗体(MAB225)对人唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞放射敏感性的影响。方法:通过双荧光染色法、四氮唑还原法(MTT)、流式细胞仪观察经MAB225处理后的ACC-2细胞放射后凋亡的变化,以评价MAB225对ACC-2细胞放射敏感性的影响。采用SPSS11.0软件包的单因素方差分析对数据进行统计学处理。结果:经MTT检测、双荧光染色和流式细胞仪检测,经MAB225和放射联合处理后的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例较未处理组上升3倍;而单纯放射处理的ACC-2细胞,其细胞凋亡比例只增加1倍。结论:MAB225可以提高放射线对ACC-2细胞的杀伤作用,降低ACC-2细胞的放射后生存率。

唾液腺腺样囊性癌细胞系中5个抑癌基因甲基化及其表达

目的:探讨唾液腺腺样囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)细胞系中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化及其与mRNA表达之间的关系。方法:甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)法检测ACC细胞系ACC-2、ACC-3、ACC-M中CDH13、RASSF2A、TFPI-2、hMLH-1、MyoD1基因的甲基化;RT-PCR及荧光实时定量PCR对存在甲基化的基因进行mRNA水平的检测。结果:3个细胞系中均存在CDH13、RASSF2A、TFPI-2基因的甲基化和未甲基化,只存在MyoD1基因的甲基化和hMLH-1基因的未甲基化;ACC-2中CDH13基因mRNA水平的表达显著高于ACC-M,ACC-3中RASSF2A的表达显著高于ACC-2、ACC-M,3个细胞系中均未检测到MyoD1基因的表达。结论:ACC细胞系中,CDH13、RASSF2A、TFPI-2、MyoD1基因的甲基化为常见事件,甲基化可能为MyoD1基因失活的主要机制,CDH13基因的表达可能与ACC的转移相关。

辛伐他汀对唾液腺腺样囊性癌细胞生长及survivin表达的影响

目的 :探讨辛伐他汀(simvastatin)对人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83细胞增殖、凋亡及survivin蛋白表达的影响。方法:体外培养SACC-83细胞,用不同浓度的辛伐他汀(0、10、20、30、40、50μmol/L)对体外培养的SACC-83细胞进行不同时间的干预,CCK-8法检测药物对细胞增殖能力的影响;结晶紫染色观察辛伐他汀对细胞集落形成的影响;Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测不同浓度辛伐他汀作用于SACC-83细胞48 h后凋亡细胞的百分率;Western蛋白印迹检测survivin蛋白表达的变化。采用SPSS13.0软件包对数据进行单因素方差分析和q检验。结果 :用不同浓度的辛伐他汀处理细胞不同时间后,SACC-83的生长受到明显抑制,并具有时间、浓度梯度依赖性;结晶紫染色观察到细胞集落形成也受到抑制(P<0.05);药物处理48 h后,细胞凋亡率随药物浓度增加而升高(从8.60%到67.97%);同时,SACC-83细胞survivin蛋白的表达量显著降低(P<0.05)。结论 :辛伐他汀能抑制SACC-83细胞的增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与survivin蛋白的表达下调有关。

BDNF对唾液腺腺样囊性癌细胞株抗失巢凋亡能力和转移的影响

目的:观察脑源性神经营养因子(BDNF)对唾液腺腺样囊性癌细胞系抗失巢凋亡能力和转移的影响,揭示BDNF与唾液腺腺样囊性癌高转移特性的关系。方法:以唾液腺腺样囊性癌(SACC)高、低转移细胞系ACC-2和ACC-M为研究对象,利用MTT、悬浮培养、流式细胞仪、软琼脂克隆形成实验观察BDNF对SACC细胞系体外培养过程中增殖和抗失巢凋亡的影响。以SPSS10.0软件对实验结果进行配对t检验。结果:ACC-2和ACC-M在体外培养过程中均具有一定的抗失巢凋亡能力,且ACC-M高于ACC-2(P<0.01)。25、50、100ng/mlBDNF对ACC-2和ACC-M增值均无显著影响(P>0.05)。50ng/mlBDNF可以显著提高ACC-2的抗失巢凋亡能力(P<0.01)和克隆形成(P<0.01)。结论:SACC的转移特性与抗失巢凋亡能力相关,适合浓度的BDNF可以提高SACC的抗失巢凋亡能力。

DNMT1干扰对唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M E-cadherin表达的影响

目的:建立DNA甲基转移酶1(DNMT1)表达稳定抑制的唾液腺腺样囊性癌细胞系ACC-M,探讨DNMT1表达抑制对ACC-M细胞E-cadherin表达的影响。方法:设计靶向干扰DNMT1的shRNA序列,构建携带该序列的慢病毒载体并转导ACC-M细胞,对筛选出的抗性克隆采用RT-PCR、荧光定量PCR、免疫印迹方法分别检测DNMT1mRNA、蛋白质水平,筛选获得DNMT1表达稳定抑制的ACC-M细胞,并通过甲基化特异性PCR检测E-cadherin基因启动子的甲基化状态,荧光定量PCR检测E-cadherin的表达情况。采用SPSS11.0软件包对数据进行t检验。结果:筛选获得DNMT1稳定表达抑制的ACC-M细胞,其mRNA、蛋白相对表达水平(0.156±0.008,0.163±0.013)显著低于空白对照组和空载对照组。进一步检测发现,E-cadherin基因启动子甲基化水平明显降低,E-cadherinmRNA表达水平显著增高,P<0.05。结论:shRNA慢病毒载体介导的RNA干扰能够有效、稳定地抑制ACC-M细胞DNMT1的表达,并降低ACC-M细胞E-cadherin基因启动子的甲基化水平,从而使E-cadherin基因表达增强。

PRRX1对唾液腺腺样囊性癌细胞自噬的影响

目的:探讨配对相关同源框1(paired related homeobox1,PRRX1)对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞自噬的影响。方法:用PRRX1过表达慢病毒载体及PRRX1慢病毒空载体转染SACC细胞后,应用Western蛋白免疫印迹法检测转染效果。利用透射电子显微镜观察自噬小体,通过细胞免疫荧光和蛋白免疫印迹法检测自噬标志物(LC3-Ⅱ/Beclin1)水平。采用SPSS 17.0软件包对数据进行统计学分析。结果:与未转染的空白对照组和阴性空病毒载体转染组相比,PRRX1过表达组的PRRX1表达量升高,自噬小体减少,自噬标志物水平降低(P<0.05)。结论:PRRX1对SACC细胞的自噬有抑制作用。

蛋白激酶D抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移能力的影响

目的观察蛋白激酶D(PKD)的抑制剂CRT0066101对唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞迁移能力的影响,并探讨其相关机制,为SACC治疗提供新策略。方法将不同浓度的CRT0066101作用于SACC-LM细胞,通过蛋白质印迹(Western blot)和细胞免疫荧光染色检测CRT0066101对细胞PKD磷酸化活化的作用;Transwell实验检测CRT0066101对细胞迁移能力的影响;利用Western blot、细胞免疫荧光染色和实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测药物对上皮间充质转化(EMT)相关指标蛋白的影响;用蛋白酶体抑制剂处理CRT0066101作用后的细胞和对照细胞,Western blot检测锌指转录因子(Snail)蛋白的表达。结果CRT0066101能抑制PMA诱导的SACC-LM细胞PKD磷酸化;降低细胞迁移数。CRT0066101能降低N-钙黏着蛋白和Snail蛋白表达量,增加E-钙黏着蛋白和CDH1基因的表达。CRT0066101能调控蛋白酶体介导的Snail蛋白降解。结论CRT0066101抑制SACC-LM细胞迁移能力,调节EMT相关蛋白和基因表达,机制可能与蛋白酶体介导的Snail蛋白降解有关。

沉默PGGT1B对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨GGTase-I在唾液腺腺样囊性癌SACC-LM和SACC-83细胞增殖和凋亡方面的作用及其相关机制。方法:根据编码GGTase-I的PGGT1B基因序列,应用慢病毒介导的基因沉默技术,稳定敲低SACC-LM和SACC-83细胞中PGGT1B基因的表达。将细胞分为实验组(沉默目的 基因PGGT1B的细胞)、阴性对照组(未沉默目的基因PGGT1B的细胞)和空白对照组(只包含空载体的细胞)。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组细胞PGGT1B和RhoA的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测GGTase-I、RhoA、RhoA膜蛋白、CyclinD1及p21的蛋白表达;采用CCK-8实验分析细胞的增殖行为;流式细胞仪检测细胞周期和凋亡能力变化;通过裸鼠皮下成瘤实验观察PGGT1B编码的GGTase-I蛋白对SACC细胞成瘤能力的影响。采用SPSS 25.0软件包对数据进行统计学分析。结果:qRT-PCR检测结果显示,慢病毒感染SACC-LM和SACC-83细胞后,PGGT1B和RhoA的相对表达量降低(P<0.05);Western免疫印迹检测结果显示,RhoA相对表达量无显著改变(P>0.05),GGTase-I、RhoA膜蛋白的相对表达量下降(P<0.05),CyclinD1的相对表达量降低,p21的相对表达量增高(P<0.05);SACC-LM和SACC-83细胞增殖活性下降、凋亡能力增加(P<0.05);裸鼠皮下肿瘤体积、质量下降,生长速度减慢。结论:通过沉默编码GGTase-I蛋白的PGGT1B基因,可降低RhoA蛋白活性,促进细胞凋亡、抑制细胞增殖,表明GGTase-I蛋白可对SACC-LM和SACC-83细胞的增殖行为和凋亡能力产生影响,有望成为SACC基因治疗的新靶点。

人唾液腺腺样囊性癌细胞合成Ⅰ、Ⅱ型胶原蛋白的研究

目的细胞外基质成分与腺样囊性癌(Adenoidcysticcarcinoma,ACC)特殊病理学结构的形成和侵袭等生物学表型关系密切。本研究观察来源于人腺样囊性癌的细胞株ACC2合成细胞外基质成分I、II型胶原蛋白的过程,并探讨其与ACC囊腔形成的关系。方法应用间接免疫荧光组织化学方法观察蛋白质的动态合成过程,并以RT-PCR法检测相应mRNA的表达。结果ACC2有I型胶原mRNA表达,免疫荧光观察到I型胶原合成和分泌的动态过程。同时在基因和蛋白水平ACC2都无II型胶原的合成。结论I型胶原是ACC基质的重要成分,与其囊腔形成关系密切。II型胶原不参与囊腔的形成。

辛伐他汀对唾液腺腺样囊性癌细胞生长及survivin表达的影响

目的 探讨唾液腺腺样囊性癌细胞的生长增殖与其survivin蛋白表达受辛伐他汀作用而产生的影响变化.方法 选用的细胞株为人唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC－８３,采用CCK－８法检测细胞增殖活性;细胞集落形成率采用集落形成法检测;细胞凋亡率采用Annexin－V－FITC/PI双染色流式细胞仪检测;采用Western蛋白印迹法进行检测survivin蛋白表达.结果 随着辛伐他汀浓度增加,唾液腺腺样囊性癌细胞增殖率越低,并且４８h后比２４后更加明显,集落形成抑制率越高.而随着辛伐他汀浓度的增加唾液腺腺样囊性癌细胞survivin蛋白表达的相对灰度值明显下降,并且呈浓度依赖性.结论 辛伐他汀对于唾液腺腺样囊性癌细胞的生长增殖与其survivin蛋白表达具有较好的抑制作用,值得进一步研究.

MUC1通过调控EGFR/ERK信号通路促进唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和侵袭的研究

目的:研究黏蛋白1(MUC1)对唾液腺腺样囊性癌(ACC)细胞生物学功能的影响及其分子机制。方法:首先通过慢病毒(shMUC1)转染对ACC细胞系中MUC1基因进行敲减,通过Real-time PCR和Western blot检测敲减效果;CCK-8实验检测细胞的增殖能力;平板克隆形成实验评价细胞的克隆形成能力;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力;采用转录组测序筛选MUC1调控的相关信号通路,并通过Wesern blot验证分析。结果:转染MUC1慢病毒后,ACC细胞中MUC1 mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05);MUC1敲减后ACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著下降(P<0.05);转录组测序分析和Western blot结果表明MUC1主要通过调控EGFR/ERK磷酸化水平影响ACC细胞的生物学功能。结论:MUC1可通过调控EGFR/ERK磷酸化水平促进ACC细胞的增殖、平板克隆、迁移和侵袭,提示MUC1在ACC进展中可能发挥重要作用。

不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌细胞生物学行为的影响

目的 :探讨不同放疗剂量对人唾液腺腺样囊性癌(SACC-83、SACC-LM)细胞生物学行为的影响。方法 :采用不同放疗剂量(0、2、4、6、8、10 Gy)作用SACC-83、SACC-LM细胞并继续培养48 h,CCK-8检测细胞存活,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,细胞划痕实验观察细胞迁移能力变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果:放疗对SACC-LM细胞的细胞存活率、细胞凋亡率、异倍体、细胞迁移力的影响较SACC-83显著(P<0.05);与其他放疗剂量相比,SACC-83细胞在6 Gy剂量照射下细胞存活率最低,细胞凋亡比例及异倍体比例最高,细胞迁移能力最弱。结论:SACC-LM细胞放疗敏感性较SACC-83更高,SACC-83细胞对6 Gy剂量放疗最为敏感。

p120连环蛋白对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响

目的 探讨p120ctn-shRNA对人唾液腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响,以及p120ctn-shRNA对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。方法 选取人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83细胞系进行培养,p120ctn-shRNA慢病毒表达载体转染SACC-83,同时转染空载体NC shRNA作为对照组,嘌呤霉素筛选稳定表达p120ctn-shRNA的细胞系。通过RT-PCR和Western Blot检测敲低效果。分别通过CCK8、划痕实验、迁移实验和侵袭实验观察p120连环蛋白基因敲低对人唾液腺腺样囊性癌细胞SACC-83增殖、迁移及侵袭等恶性生物学行为的影响。通过RT-PCR和Western Blot检测p120连环蛋白基因敲低对E-钙粘蛋白和N-钙粘蛋白表达的影响。结果 与对照组相比,实验组p120连环蛋白的基因表达量和蛋白表达量都大幅度降低。与对照组相比,实验组的增殖能力明显降低(P<0.05),与对照组相比,实验组的迁移能力明显降低。与对照组相比,实验组的侵袭能力明显降低(P<0.01)。E-钙粘蛋白表达略微下降,N-钙粘蛋白表达显著下降。结论 抑制p120连环蛋白的表达可以抑制人唾液腺腺样囊性癌SACC-83的增殖、迁移及侵袭的能力,同时可以较大程度下调N-cad的表达,较小程度下调E-cad的表达。

miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 :探讨miR-21对人唾液腺腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)增殖、凋亡的影响及其相关作用机制。方法 :将SACC-LM细胞分为3组,采用Lipofectamine ^(TM)2000做瞬时转染。干扰组转染miR-21 inhibitor,阴性对照组转染无关核苷酸序列,空白对照组不转染。采用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-21和PDCD4、Bcl-2 mRNA的表达水平。以CCK8法检测转染24、48、72、96 h后细胞的增殖活性,Annexin-V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡率,Western免疫印迹检测转染后靶蛋白PDCD4、Bcl-2的表达量。采用SPSS 16.0软件包对所得数据进行统计学分析。结果:转染miR-21 inhibitor的细胞中miR-21、Bcl-2表达下调(P<0.01),而PDCD4基因表达上调(P<0.05)。CCK8检测结果表明,miR-21表达下调可以明显抑制SACC-LM细胞的增殖活性,并呈时间依赖性(P<0.05)。流式细胞术检测结果表明,干扰组细胞凋亡率显著高于阴性对照组和空白组(P<0.05);Western免疫印迹结果显示,PDCD4蛋白的表达较对照组显著升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:下调miR-21的表达可抑制SACC-LM细胞的增殖活性,诱导细胞凋亡,其机制可能与细胞内PDCD4表达上调,Bcl-2表达下调有关。

地西他滨上调唾液腺腺样囊性癌细胞系细胞hMLH1的表达

目的:通过检测地西他滨(decitabine)对体外培养人唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞系细胞hMLH1的影响,探讨DNA甲基化转移酶抑制剂应用于SACC治疗的可行性及可能机制。方法:采用不同浓度的decitabine处理SACC细胞系SACC-83和SACC-LM细胞,观察细胞形态变化。选取5μmol/L的decitabine处理细胞后,分别使用甲基化特异性PCR、蛋白免疫印迹法、流式细胞技术检测用药前、后hMLH1基因启动子甲基化状况、hMLH1蛋白表达和细胞周期、凋亡的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行独立样本t检验。结果:经decitabine处理后,SACC-83和SACC-LM细胞中hMLH1基因启动子甲基化水平降低,hMLH1蛋白表达水平分别升高1.582倍和1.977倍(P<0.05)。用药后G0/G1期细胞比例显著减少,S期细胞比例显著增加(P<0.05),2种细胞系细胞晚期凋亡比例显著增加,差别有统计学意义(P<0.05)。结论:Decitabine可通过改变hMLH1基因启动子甲基化水平,上调蛋白表达;使SACC细胞阻滞于S期,Decitabine有可能作为SACC化疗药物或与顺铂联合使用,增强顺铂的效果。

SOX2基因对唾液腺腺样囊性癌细胞生物学特性的影响

目的探索转染SOX2-shRNA载体慢病毒对唾液腺腺样囊性癌(SACC)细胞系SACC-LM和SACC-83生物学行为的影响。方法构建3种SOX2-shRNA慢病毒载体(817、818、819)并将其转染到SACC细胞中,通过实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)筛选出抑制效果最好的shRNA。将抑制效果最好的慢病毒载体转染到SACC-LM、SACC-83细胞后,Western blot检测SOX2、Survivin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达变化,CCK-8和流式细胞术检测细胞增殖和凋亡情况,细胞划痕实验及Transwell法检测细胞的迁移和侵袭能力。结果3种慢病毒中SOX2-shRNA-819干扰效果最好。SACCLM、SACC-83细胞转染SOX2-shRNA-819慢病毒后,SOX2、Survivin、N-cadherin的表达下调,E-cadherin的表达上调(P<0.05);细胞增殖能力降低,凋亡能力增强(P<0.05);细胞迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。结论shRNA干扰技术降低SOX2表达的同时下调了SACC-LM中Survivin的表达,二者的表达可能具有相关性;SOX2的低表达抑制了SACC细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进了凋亡能力。SOX2可能参与了SACC上皮间充质转化过程,为靶向SOX2基因治疗SACC提供了相关的理论依据。

辛伐他汀联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞迁移和侵袭的影响

目的 :探讨辛伐他汀(simvastatin,SIM)联合干扰miR-21对唾液腺腺样囊性癌细胞株(SACC-LM)迁移、侵袭的影响。方法:体外培养SACC-LM细胞,随机分为阴性对照组(negative control,NC)、IC50辛伐他汀组(SIM)、miR-21抑制剂转染组(simiR-21)和联合处理组(simiR-21+SIM)。利用q RT-PCR检测4组细胞中miR-21的表达水平,CCK8法检测不同浓度辛伐他汀(0、10、20、30、40、50、60μmol/L)作用48 h后的细胞活性,得出48 h的IC50;观察干扰miR-21后SACC-LM对辛伐他汀的耐药性变化。Transwell法观察细胞迁移(不加基质胶)、侵袭能力(加入基质胶)的变化。Western免疫印迹检测EMT途径相关蛋白E-Cadherin、Snail1的表达。应用SPSS 22.0软件包对所得数据进行t检验或单因素方差分析。结果 :与阴性对照组相比,转染组及联合作用组中miR-21表达显著下调(P<0.01),单独药物组中miR-21表达无显著变化(P>0.05)。辛伐他汀使SACC-LM细胞的生长受到明显抑制,与药物浓度呈正相关关系。干扰mi R-21后,SACC-LM对辛伐他汀的耐药性显著降低(P<0.05)。联合作用组中细胞的迁移、侵袭活性较其他处理组相比均受到显著抑制(P<0.01),Western免疫印迹结果显示,联合作用组中E-Cadherin蛋白的表达较其他对照组显著升高(P<0.01),Snail1蛋白表达显著降低(P<0.001)。结论:干扰mi R-21能有效降低SACC-LM对辛伐他汀的耐药性,通过与辛伐他汀的联合作用,SACC-LM细胞的迁移、侵袭能力受到明显抑制,其机制可能与Snail1表达下调、E-Cadherin表达上调有关。

体外沉默ICMT基因对人唾液腺腺样囊性癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨异戊二烯基半胱氨酸羧基甲基转移酶(isoprene cysteine carboxymethyl transferase,ICMT)基因对唾液腺腺样囊性癌(salivary adenoid cystic carcinoma,SACC)细胞迁移和侵袭的影响及相关机制,为SACC的分子靶向治疗提供实验依据。方法 体外培养腺样囊性癌细胞SACC-LM和SACC-83,采用脂质体载体瞬时转染的方法,将ICMT siRNA转染至人SACC-LM和SACC-83细胞中(实验组),并分别设置空白对照组和阴性对照组(转染NC-siRNA)。通过qRT-PCR检测转染后各组细胞中ICMT和RhoA的m RNA表达并明确沉默效率;Western blot检测各组的ICMT、膜RhoA、总RhoA、Rho关联含卷曲螺旋结合蛋白激酶1(Rho associations contain curly helical binding protein kinase 1,ROCK1)、基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)蛋白表达;通过CCK-8实验检测SACC细胞的增殖能力;通过比较细胞划痕实验的相对愈合面积和Transwell实验细胞穿膜数目,分别检测SACC细胞的迁移和侵袭能力。结果 SACC-LM和SACC-83细胞转染ICMT-siRNA后,实验组相较于空白对照组和阴性对照组,ICMT mRNA和蛋白表达显著下降(P<0.05),但RhoA mRNA和RhoA总蛋白表达均无显著性差异(P>0.05);膜RhoA、ROCK1、MMP-2、MMP-9的蛋白表达显著下降(P<0.05),细胞增殖能力明显下降(P<0.05),迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05)。结论 体外沉默ICMT基因可有效抑制人SACC-LM和SACC-83细胞迁移及侵袭能力,其机制可能与RhoA-ROCK信号通路有关。