消化系疾病不同舌苔唾液蛋白质组学的初步研究

目的:用蛋白质组学质谱技术筛选胃癌、慢性胃炎及消化性溃疡患者不同舌苔的唾液蛋白质差异表达谱,寻找不同舌苔的唾液蛋白质组物质基础与生物标志物。方法:将病理舌苔分为病理薄苔、厚苔、剥苔3大类,并设正常薄白苔组为对照,采用MALDI-TOF-MS技术,并运用弱阳离子磁珠(WCX)检测受试者唾液,得到相应的肽质量指纹图谱,建立分类预测模型。结果:正常组与消化系疾病薄苔、厚苔、剥苔3大类病理舌苔组共得到差异蛋白质峰187个,其中4个蛋白质峰统计差异显著(P<0.05);通过分析差异蛋白峰表达谱,并建立了分类预测模型,识别率为85.31%,预测能力39.91%。临床回代检验结果,模型的准确率为85.33%(64/75)。结论:初步得到了消化系疾病患者不同舌苔的唾液蛋白指纹质谱,并建立了以6447.39Da、2938.47Da、1472.3Da、1451.77Da4个蛋白质峰为模型区分正常舌苔与消化系疾病不同病理舌苔的唾液蛋白表达质谱诊断模型。

骨唾液蛋白纳米压电免疫传感器阵列的研制

目的以AT切型、10Hz双面镀金的石英晶体为换能器,结合纳米金颗粒独特的物理化学特性,制作一种用于临床血清骨唾液蛋白(bone sialoprotein,BSP)检测的纳米压电免疫传感器阵列。方法将纳米金颗粒通过1,6-己二硫醇固定在金电极表面,采用巯基化试剂Sulfo-LC-SPDP将鼠抗人BSP单克隆抗体巯基化,并将其固定于修饰有纳米金颗粒的石英晶体金电极表面,通过免疫反应检测正常人和骨质疏松患者血清中BSP的表达。结果 (1)对稀释度分别为1∶9,1∶8,1∶7,1∶6,1∶5,1∶4,1∶3,1∶2的参考标准血清进行检测,结果显示,在血清稀释度在1∶9～1∶2的范围内,构建的BSP纳米传感器阵列对血清检测的响应呈较好的线性关系,线性方程为y=872.66x-58.258,相关系数为0.974。(2)初步证明,骨质疏松症患者血清中BSP含量高于正常人血清,差异有统计学意义(t=20.162,P=0.000)。结论实验研制的BSP纳米压电免疫传感器阵列具有结构简单、操作容易、稳定性好、灵敏度高、特异性好等优点,可用于BSP的快速定量检测。

骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对乳腺癌骨转移的促进作用

目的了解乳腺癌细胞中骨唾液蛋白(BSP)高稳定表达对其骨转移的影响,为乳腺癌骨转移的预防和治疗寻找新的药物靶点。方法通过鸡胚尿囊绒膜实验和骨条黏附实验确定BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞血管侵袭能力及骨条黏附能力的影响。将乳腺癌细胞种植于鸡胚尿囊膜的上部空腔,经过孵育收集下囊腔血管组织,PCR检测人特异的Alu基因,以了解乳腺癌细胞的血管侵袭能力;将乳腺癌细胞与经胶原酶和胰蛋白酶消化的骨条共同孵育,胰酶消化收集乳腺癌细胞,通过染色测定OD_(488)值来确定乳腺癌细胞对骨条的黏附。结果空白对照组和未经转染的乳腺癌细胞组各5个鸡胚中均没有扩增出人的Alu基因,BSP高稳定表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(piE))各5个鸡胚中分别有4个和3个扩增出人Alu基因;乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的骨条黏附实验测得的488nm处的吸光度值分别为0.580±0.046和0.490±0.039,明显高于未经转染的乳腺癌细胞组(0.260±0.021,P<0.05)和空白对照组(0.034±0.003,P<0.01)。结论BSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞的血管侵袭能力,提高了乳腺癌细胞的骨条黏附能力,可能对乳腺癌的骨转移有一定促进作用。

胃癌患者唾液蛋白质指纹图谱诊断模型的初步研究

目的:用蛋白质组学质谱技术筛选胃癌患者唾液蛋白质表达谱,寻找胃癌早期诊断方法。方法:采用蛋白质组学基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质指纹图谱技术,并运用弱阳离子磁珠(WCX)检测胃癌患者和健康者唾液,建立诊断模型。结果:1472.78Da、2936.49Da、6556.81Da和7081.17Da4个蛋白质荷比峰(M/Z)在胃癌和健康组比较中具有显著性差异。结论:初步建立了胃癌的唾液蛋白指纹质谱,为以后的胃癌蛋白质组学研究奠定了一定的基础。并建立了以1472.78Da、2936.49Da、6556.81Da和7081.17Da4个蛋白质峰为模型区分胃癌与非胃癌的唾液蛋白表达质谱诊断模型,为胃癌的早期临床诊断另辟蹊径,在筛选特异性生物标记物等方面也具有一定价值。

人骨唾液蛋白非融合荧光蛋白载体的构建及在乳腺癌细胞中的表达(英文)

背景:人骨唾液蛋白基因在矿化组织以外的易发生骨转移的人乳腺癌中表达。临床观察显示骨转移处的乳腺癌细胞骨唾液蛋白的表达量要高于原发部位的乳腺癌细胞,因此骨唾液蛋白有可能与肿瘤特异性骨转移的关系密切。研究乳腺癌骨转移可为将来临床的预防和治疗提供新的药物靶点。目的:建立骨唾液蛋白的稳定表达乳腺癌细胞系,观察骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移的整个过程中的作用。设计:对照实验。单位:华南理工大学生物科学与工程学院,解放军广州军区广州总医院医学实验中心。材料:实验于2003-11/2004-03在解放军广州军区广州总医院医学实验室完成。质粒、菌种和细胞:pIRES2-EGFP载体质粒,E.Coli.Top10、含有人骨唾液蛋白基因全长的克隆载体pB-hBSP和发生特异性骨转移以及脑转移的人乳腺癌细胞株MDA-MB-231BO和MDA-MB-231BR。方法:将人骨唾液蛋白基因通过聚合酶链式反应的方法从构建好的pB-hBSP载体中亚克隆出来,在其5’和3’端分别引入BglⅡ和PstⅠ限制性酶切位点,定向克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP,构建重组载体pIRES2-hBSP-EGFP。利用脂质体转染的方法将构建好的重组质粒转入特异性脑转移和骨转移的乳腺癌细胞株MDA-MB-231BR和MDA-MB-231BO中。主要观察指标:pIRES2-hBSP-EGFP重组表达载体的构建。重组表达载体pIRES2-hBSP-EGFP转染乳腺癌细胞。结果:①成功构建人骨唾液蛋白和绿色荧光蛋白非融合表达的真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP。②成功转染特异骨转移和脑转移的乳腺癌细胞株,可在荧光显微镜下观察到荧光蛋白标记,人骨唾液蛋白得到相应表达。结论:真核表达载体pIRES2-hBSP-EGFP的构建及转染可为骨唾液蛋白在乳腺癌骨转移中的作用的体内、外研究奠定一定的基础。

消化性溃疡患者唾液蛋白质组诊断模型的初步研究

目的:用蛋白质组学质谱技术筛选消化性溃疡患者唾液蛋白质表达谱,寻找可用于诊断消化性溃疡的特异性生物标志物。方法:采用蛋白质组学基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,并运用弱阳离子磁珠(WCX)检测消化性溃疡患者和健康者唾液,得到相应的肽质量指纹图谱,建立诊断模型。结果:正常对照组与消化性溃疡组两个组共得到蛋白质峰66个,其中5个蛋白峰有统计差异(P<0.05),选择质荷比(m/z)2934.36Da、5502.38Da和3472.94Dap这3个相关峰建立分类预测模型,识别率为88.40%,预测能力80.35%。临床回代检验结果,该模型的准确率为88.57%(31/35),灵敏度为82.35%(14/17),特异度为94.44%(17/18)。结论:初步得到了消化性溃疡患者的唾液蛋白指纹质谱,并建立了2934.36Da、5502.38Da和3472.94Da3个蛋白质为模型区分消化性溃疡与非消化性溃疡的唾液蛋白表达质谱诊断模型。

N-乙酰半胱氨酸影响脂多糖调节骨唾液酸蛋白基因转录

目的:研究N-乙酰半胱氨酸(NAC)对牙龈卟啉单胞菌脂多糖(LPS)调节成骨细胞(ROS17/2.8)骨唾液酸蛋白(BSP)基因表达和转录的影响。方法:将ROS17/2.8细胞随机分为4组:空白对照组、LPS(0.01mg/LP.g.LPS)组、NAC(20mmol/L)组、NAC+LPS组(NAC提前30min预刺激后,NAC与P.g.LPS共同作用),持续作用细胞12h后,用实时荧光定量PCR检测BSPmRNA的表达,用瞬时转染法分析BSP启动子的转录活性。结果:各组细胞BSPmRNA表达量均与空白对照组的表达量取比值,0.01mg/LP.g.LPS使比值升高(F=9.998,P<0.05),NAC使其降低(F=6.821,P<0.05),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=6.744,P<0.05);各组细胞BSP基因启动子(pLUC3)转录活性值与空白载体(pLUCB)活性值取比值,0.01mg/LP.g.LPS使比值升高(F=5.546,P<0.05),NAC使其降低(F=11.544,P<0.01),NAC使LPS对比值的升高变化降低(F=5.624,P<0.05)。结论:NAC抑制0.01mg/LP.g.LPS对ROS17/2.8细胞BSP基因表达和转录的增强调节。

FK506对糖尿病大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的探讨FK506对糖尿病大鼠肾小管-间质保护作用及可能的机制。方法应用链脲佐菌素腹腔一次性注射诱导大鼠糖尿病模型,随机分为对照组、模型组、FK506(0.5、1.0mg/kg)组。4周后观察大鼠肾重/体重与尿白蛋白排泄率(AER)的变化,并行肾小管-间质病理形态学分析。应用免疫组化和Western印迹方法检测骨桥蛋白(Os-teopontin,OPN)及NF-κBp65的表达。结果FK5061.0mg/kg给药组大鼠相对肾重明显低于模型组(P<0.05),FK5060.5与1.0mg/kg给药组大鼠AER水平明显低于模型组(P<0.05,0.01)。FK5061.0mg/kg给药组肾小管-间质损伤指数明显低于模型组(P<0.01)。免疫组化显示模型组肾小管-间质OPN表达阳性面积明显高于对照组(P<0.01),FK5060.5mg/kg与1.0mg/kg给药组肾小管OPN表达阳性面积明显低于模型组(P<0.01)。Western印迹显示模型组肾组织NF-κB蛋白表达较对照组增加6.19倍,FK5060.5与1.0mg/kg给药4周分别使肾组织OPN蛋白表达下降25.4%与47.4%。结论FK506对糖尿病肾小管-间质损伤有明显保护作用,其机制可能部分与抑制肾小管-间质的OPN有关。

骨桥蛋白:一种新的肿瘤标志物

骨桥蛋白(OPN)是一富含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)序列的磷酸化糖蛋白,参与细胞信号转导,促进细胞粘附和迁移,并与肿瘤细胞的生长、侵袭、转移密切相关,近年被认为是一新的肿瘤标志物。现就OPN的生物学特点及在肿瘤转移中所起作用进展作一综述。

氯沙坦对原发性高血压患者血浆骨桥蛋白水平的影响

血管重构既是高血压病发生的病理基础,也是高血压病维持发展的结构基础,且高血压病患者血管结构改变与血管细胞的增殖、迁移有关;而骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是细胞外基质中的一种重要的多功能糖蛋白,由多种组织细胞合成和分泌,参与介导细胞黏附、增殖和迁移.近年来发现,OPN在动脉粥样硬化、经皮冠状动脉腔内成形术后再狭窄、高血压等疾病引起的血管重构过程中发挥重要调节作用.国外临床证实,高血压患者血浆OPN升高[1];有动物实验研究表明AngⅡ可诱导血管内膜OPN表达[2].

联合检测术前、术后血浆骨桥蛋白表达预测肝细胞癌切除术预后

目的:分析肝细胞癌(HCC)患者肿瘤切除术前、术后血浆骨桥蛋白(OPN)表达水平和术后转移复发及其与生存预后之间的关系,评价联合检测术前、术后血浆OPN表达在预测肝癌术后复发及预后中的作用。方法:测定56例HCC患者术前、术后血浆OPN表达水平,并收集其临床病理资料及随访资料,统计分析血浆OPN表达水平和患者术后肿瘤复发及生存预后的关系,并根据术前、术后OPN表达水平进行分组,分析其与HCC患者术后转移、复发及生存的关系。结果:术前OPN高、低表达组患者术后1年复发率分别为52.6%和24.3%(P<0.05);累积无瘤生存率为43.9%和70.5%(P<0.05);术后OPN高、低表达组患者术后1年复发率为58.3%和15.6%(P<0.01);累积无瘤生存率为36.7%和81.7%(P<0.01)。联合术前、术后OPN表达对患者进行分组,高、中、低表达组患者术后1年复发率分别为70.0%、41.7%和9.1%(P<0.01);累积无瘤生存率为26.7%、54.7%和85.9%(P<0.01)。术前、术后OPN单独预测1年复发的特异度分别为75.7%、72.9%,联合两指标筛选高复发风险患者的特异度为91.9%,高于相应的单个指标(P<0.05)。结论:术前、术后血浆OPN表达水平与HCC患者预后相关,联合分析术前、术后OPN表达,可以筛选出更高复发风险患者。

骨桥蛋白与肿瘤研究进展

近年研究表明骨桥蛋白(OPN)与肿瘤关系密切,参与肿瘤发展的多个环节。现简要综述骨桥蛋白与Ras癌基因的关系及其在促肿瘤恶化、抑制凋亡、逃避肿瘤免疫、促肿瘤浸润转移及血管生成等方面的作用。

血清骨涎蛋白和鳞状细胞癌抗原检测对宫颈癌的诊断价值

【目的】探讨联合检测血清骨涎蛋白（BSP）和血清鳞状细胞癌抗原（SCCAg）在宫颈癌中的诊断价值。【方法】采用ELISA方法和化学发光法分别检测80例正常对照者、150例宫颈癌患者的血清BSP和SC-CAg水平。【结果】联合检测血清BSP和SCCAg水平，正常对照者（32．5％）的阳性率显著低于宫颈癌患者（89．3％）；BSP、SCCAg单独检测的灵敏性显著低于联合检测，BSP或BSP和SCCAg联合检测的特异性显著低于SCCAg。【结论】BSP是一种较为理想的宫颈癌诊断的标志物，血清SCCAg抗原为具有较高特异性的宫颈癌诊断的标志物，联合检测血清BSP、血清SCCAg在宫颈癌中有较高的诊断价值。

骨唾液蛋白和基质金属蛋白酶-9在风湿性心脏病钙化瓣膜中的表达及意义

目的观察骨唾液蛋白（BSP）和基质金属蛋白酶．9（MMP-9）在风湿性心脏病（风心病）钙化瓣膜中的表达情况。方法将手术切除的二尖瓣瓣膜（共150枚）按病史分为风心病组（120枚）和非风心病组（30枚），采用sP法进行免疫组织化学染色，观察并比较两组BSP和MMP-9的：羡达情况。结果风心病组BSP和MMP-9阳性表达率分别为91．7％（11-120）和90．8％（109／120），显著高于非风心病组的23．3％（7／30）和20．0％（6／30），差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论风心病瓣膜BSP和MMP-9高表达，风心病瓣膜的钙化与MMP-9所引起的细胞外基质降解和重塑以及BSP所诱导的成骨样骨形成密切相关。

有龋和无龋儿童四种唾液蛋白成分的比较

目的比较3～4岁有龋儿童和无龋儿童非刺激性和刺激性唾液中 IgA、乳酸脱氢酶、溶菌酶和碱性磷酸酶含量的差异。方法分别采集98例有龋儿童和94名无龋儿童非刺激性和刺激性唾液,测定上述各成分含量。结果非刺激性和刺激性唾液中 IgA、乳酸脱氢酶和溶菌酶含量有龋组均显著高于无龋组(P<0.01),非刺激性唾液中碱性磷酸酶含量有龋组显著高于无龋组(P<0.05);但刺激性唾液中碱性磷酸酶含量两组问差异无统计学意义(P>0.05)。结论非刺激性和刺激性唾液中 IgA、乳酸脱氢酶和溶菌酶升高可能与婴幼儿龋的发生、发展有关。

BSP的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究骨唾液蛋白(BSP)的高稳定表达对乳腺癌细胞生物学行为的影响,揭示BSP在乳腺癌骨转移中的作用。方法通过细胞生长曲线实验、肿瘤细胞克隆形成率实验以及细胞黏附性实验,研究高稳定表达hBSP对乳腺癌细胞生物学行为的影响。结果hBSP的高稳定表达增加了乳腺癌细胞MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)的生长速率,提高了其活性和致瘤性。乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的克隆形成率为8.90%±0.53%,明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为15.6%±0.94%和12.8%±0.77%),同时乳腺癌细胞MDA-MB-231BO的细胞贴壁率OD620的值(0.29±0.017)也明显低于MDA-MB-231BO(pI)和MDA-MB-231BO(pID)(分别为0.52±0.03和0.43±0.03)。结论hBSP具有一定的自分泌作用,增加BSP的表达促进乳腺癌细胞骨转移的发生。

唾液及菌斑液中蛋白成分与龋易感性的关系

目的 探讨纯腮腺液、全唾液及菌斑液中蛋白成分与龋易感性的关系。方法 选 39名无龋者 (cariesfree ,CF)和 2 7例高龋者 (cariessusceptible ,CS) ,用Folin酚法测定纯腮腺液、全唾液及菌斑液的总蛋白含量 ,SDS PAGE和图像分析系统定量分析各蛋白成分。结果 总蛋白含量菌斑液高于唾液近 10倍 ,其中仅CF组全唾液与菌斑液有较大相关性 (r =0 80 4)。 3种液体共有的蛋白为140 0 0、6 6 0 0 0及 76 0 0 0蛋白 ,菌斑液中 140 0 0、15 0 0 0及 380 0 0蛋白和全唾液中 140 0 0蛋白的含量CS组显著低于CF组。结论 无龋组菌斑液蛋白受全唾液影响较大。 3种液体中总蛋白含量均与患龋无关 ,但菌斑液和全唾液中某些蛋白可能有重要的抗龋作用。

OPN和uPA mRNA在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨骨桥蛋白(OPN)mRNA及尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)mRNA在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及与临床病理特征的关系。方法:应用RT-PCR方法检测60例HCC癌组织、20例正常对照肝组织中OPN和uPA mRNA的相对表达量。结果:HCC癌组织中OPN和uPA mRNA的阳性表达率均分别高于对照正常肝组织(P均<0.05);癌组织中OPN mRNA的表达量在有门静脉癌栓形成组及在有早期复发转移组均高于无门静脉癌栓形成组和无早期复发转移组(分别P<0.05和P<0.01),uPA mRNA的表达水平在有包膜浸润和有门静脉癌栓形成组中均高于无包膜浸润和无门静脉癌栓形成组(分别P<0.05和P<0.01);OPN mRNA的高表达和uPA mRNA的高表达呈正相关(P<0.05)。结论:HCC癌组织中OPN的表达水平可以作为判断肝癌细胞转移能力和预示肝癌早期复发的重要指标。阻断OPN的表达可能可以降低uPA的分泌,从而减少肿瘤的浸润和转移。

子宫腺瘤样瘤67例临床病理分析

目的探讨子宫腺瘤样瘤(Adenomatoid Tumors,ATs)临床病理特征、免疫表型、鉴别诊断、治疗及预后。方法回顾性分析安徽医科大学附属妇幼保健院病理科2012年1月至2018年1月67例子宫ATs的临床特点、病理形态学及免疫表型特征,并复习相关文献。结果病人均为女性,年龄范围24~64岁,中位年龄39岁。肿瘤位于子宫浆膜下或肌壁间,其中66例呈结节状(直径1.0~8.0 cm),平均直径2.7 cm,1例呈巨大囊实性(直径12.0 cm)。肿块切面灰白,质韧,类似平滑肌瘤,与周围组织界限不清。肿瘤由大小不等的管腔或乳头状结构构成,被覆扁平或立方上皮细胞,呈单个或巢状分布于平滑肌组织之间。所有病例肿瘤细胞均无明显异型性,核分裂象罕见。免疫组织化学结果显示肿瘤细胞角蛋白广谱抗体(CKAE1/AE3)、钙网膜蛋白(Calretinin)、跨膜唾液酸糖蛋白(D2-40)、细胞角蛋白(CK5/6)的阳性率分别为100.0%(67/67)、100.0%(67/67)、100.0%(67/67)、19.4%(13/67),肿瘤增殖抗原(Ki-67)增殖指数低,约1%~5%之间,高度糖基化的i型跨膜糖蛋白(CD34)不表达。结论子宫ATs是一种少见的间叶来源的良性肿瘤,但组织学特征多样,尤其出现腺腔样结构难与腺癌相鉴别,结合镜下形态特点及免疫组化有助于提高诊断准确率,治疗以手术切除为主。

纯化天然骨唾液蛋白的体内成骨活性

目的评价骨唾液蛋白 (bonesialoprotein,BSP)在大鼠体内的成骨活性。方法应用从牛骨中提取纯化的BSP与经盐酸胍处理的无骨诱导活性的不溶性骨基质 (insolublebonematrix,IBM )或提纯的Ⅰ型胶原形成共价交联的复合物 ,将BSP -IBM复合物和BSP -Ⅰ型胶原复合物分别植入直径8mm的大鼠颅骨骨缺损和胸部皮下组织内。不含BSP的IBM或Ⅰ型胶原也分别植入上述部位作为对照。术后21d取植入物,行X线、组织学和组织化学观察及生物化学分析。结果BSP -IBM复合物和BSP -Ⅰ型胶原复合物在大鼠颅骨骨缺损内形成大量的新骨 ,绝大部分岛状新骨位于缺损中部 ,与宿主骨不相连接 ;单纯植入IBM或Ⅰ型胶原的颅骨缺损中部无新骨形成。BSP -IBM复合物和BSP -Ⅰ型胶原复合物在胸部皮下组织内未能诱导异位成骨。结论BSP在大鼠体内的成骨活性具有组织依赖性 ,提示局部微环境和反应细胞的特性可能对BSP的成骨活性有调节作用。