唾液酸糖苷化的研究进展

唾液酸(S A)是一种天然存在的碳水化合物,通常以低聚糖,糖脂或者糖蛋白的形式存在。与普通的糖苷化反应相比,唾液酸进行糖甘化反应所需的条件更为严格,并且其立体构型极难控制,近年来,对唾液酸糖苷化反应的研究取得了重要的进步,本次研究针对唾液酸糖苷化方法的进展进行总结,以更好地指导开展我们项目的合成工作。

唾液酸糖基转移酶ST3GAL5抑制白血病NB4细胞株的化疗多药耐药性

目的:通过研究ST3β-半乳糖苷α-2,3唾液酸转移酶5(ST3β-galactosideα-2,3-sialyltransferase 5,ST3GAL5)在人急性粒细胞白血病(acute myeloid leukemia,AML)NB4及其耐药细胞株NB4/ADR的差异表达,明确ST3GAL5对白血病细胞体内及体外药敏性的影响。方法:采用Real-time PCR和Western blotting技术检测人AML细胞株ST3GAL5的表达情况。特异性调控ST3GAL5,MTT及小鼠移植瘤模型实验检测干扰前后NB4和NB4/ADR细胞在体内、外对化疗药物敏感性的变化、PI3K/Akt信号通路的激活情况。结果:ST3GAL5在亲本细胞株NB4中高表达,在耐药细胞株NB4/ADR中低表达;特异性上调NB4/ADR细胞中ST3GAL5的表达,该细胞的药物敏感性增强(P<0.05),PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达降低(P<0.05);特异性下调NB4细胞中ST3GAL5的表达,该细胞的药物敏感性减弱,PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达升高。结论:ST3GAL5在人AML细胞及其耐药细胞株中表达均有显著差异,这些特征性改变与人AML多药耐药有关;AML多药耐药性可能是通过ST3GAL5介导PI3K/Akt信号通路分子和P-gp表达的改变实现。

ST6Gal1与结直肠癌患者临床病理特征及预后的相关性

目的研究β半乳糖苷α-2,6-唾液酸转移酶1(ST6Gal1)与结直肠癌(CRC)患者临床病理特征及预后的关系。方法选取2018年12月至2023年6月陕西省核工业二一五医院病理科保存的102例CRC患者术后切除组织及癌旁组织切片。比较不同临床病理特征CRC患者癌组织ST6Gal1阳性率;随访并统计患者预后,将生存患者设为生存组,病死患者设为死亡组;生存组男37例,女25例;年龄≥60岁48例,<60岁25例。死亡组男15例,女16例;年龄≥60岁25例,<60岁6例。采用COX回归模型分析CRC患者预后影响因素;绘制Kaplan-Meier曲线,比较ST6Gal1阳性、阴性表达患者预后,行Log-rank检验。结果CRC组织ST6Gal1阳性率高于癌旁组织[67.62%(79/102)比13.33%(12/102);χ^(2)=58.417,P<0.001]。与CRC TNM分期Ⅰ~Ⅱ期[50.00%(17/34)]、腺癌[71.79%(56/78)]、高分化[69.84%(44/63)]、无浆膜浸润[60.00%(21/35)]、无淋巴结转移[62.50%(30/48)]患者比较,CRC TNM分期Ⅲ~Ⅳ期[91.18%(62/68)]、黏液腺癌/印戒细胞癌[95.83%(23/24)]、浆膜浸润[86.57%(58/67)]、中/低分化[89.74%(35/39)]、有淋巴结转移[90.74%(49/54)]患者ST6Gal1阳性率较高(χ^(2)=22.006、6.072、5.463、9.291、11.605,P<0.001、=0.014、=0.019、=0.002、=0.001)。COX回归模型显示,TNMⅢ~Ⅳ期、浆膜浸润、肿瘤长径≥5 cm、中/低分化、淋巴结转移及ST6Gal1阳性是CRC患者预后不良的危险因素(均P<0.05)。Log-rank检验显示,ST6Gal1阳性、阴性表达患者Kaplan-Meier曲线差异有统计学意义(χ^(2)=8.578,P=0.003)。结论CRC组织中ST6Gal1异常高表达,与多种临床病理特征相关,且是CRC患者预后不良的危险因素之一。

真核表达质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的初步表达

构建β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I(ST3GALI)基因的真核表达载体p IRES-ST3GALI,并诱导使其在大肠杆菌中高效表达。以p GEM-ST3GALI质粒为模板,采用PCR技术特异性扩增ST3GAL I基因,通过酶切和连接,构建真核表达载体p IRESST3GALI。经PCR、双酶切和测序鉴定正确后,转化筛选阳性重组大肠杆菌(DH5α),用不同浓度的异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达目的蛋白,并用12%SDS-PAGE鉴定。结果表明,重组质粒p IRES-ST3GAL I中的ST3GAL I序列与原鸡的ST3GAL I氨基酸序列同源性98.8%,与猪的同源性达53.5%,与人的同源性达52.6%。β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I在大肠杆菌中实现了良好的表达。本试验已成功构建了含有β半乳糖苷α-2,3-唾液酸转移酶I(ST3GAL I)的真核表达载体p IRES-ST3GAL I,为其转染传代细胞建立重组传代细胞系奠定了基础。