唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6的生物信息学分析及多克隆抗体制备

目的表达并制备唾液酸结合性免疫球蛋白凝集素6(Siglec-6)的多克隆抗体,并对其特异性进行鉴定。为下一步探讨Siglec-6在介导细胞信号转导和调节造血细胞及免疫细胞的功能,研究其在免疫调节和炎症反应中的作用奠定基础。方法通过生物信息学分析方法预测Siglec-6蛋白的跨膜结构、理化特性、疏水性等因素,设计出两个多肽,两个多肽各自与血蓝蛋白(KLH)交联后对新西兰兔进行免疫,结果发现这两个多肽均可作为抗原免疫生物试剂,并成功获得高效价的抗Siglec-6多克隆抗体。通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其效价,经过亲和层析纯化,用Western blotting测定抗体的特异度。结果通过ELISA检测其效价分别为1∶51200和1∶12800,Western blot结果表明该方法所制备的抗体具有特异度。结论该研究通过生物信息学方法成功预测了抗原表位,并据此预测成功制备了高效价、高特异度的抗Siglec-6多克隆抗体。

血清及胎盘中Siglec-6、Glycodelin-A水平与子痫前期发病和妊娠结局的相关性

目的 探讨血清及胎盘中唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素6(Siglec-6)、子宫糖基化蛋白(Glycodelin-A)水平与子痫前期发病和妊娠结局的相关性。方法 选取2018年1月到2020年6月本院产科收治的子痫前期患者55例作为子痫前期组,年龄(30.1±3.3)岁,孕周(36.6±3.6)周,依据《妊娠期高血压疾病诊治指南(2020)》分为早发型子痫前期组21例,晚发型子痫前期34例;轻度子痫前期31例,重度子痫前期24例。同期分娩的正常孕妇55例作为对照组,年龄(29.6±2.8)岁,孕周(37.1±4.1)周。均为单胎初产妇,检测各组血清及胎盘中Siglec-6、Glycodelin-A水平。结果 血清及胎盘中Siglec-6水平,子痫前期组明显高于对照组(P<0.01),且重度子痫前期组显著高于轻度子痫前期组(P<0.05),早发型子痫前期组明显高于晚发型子痫前期组(P<0.05)。血清中及胎盘中Glycodelin-A水平,子痫前期组明显低于对照组(P<0.05),且重度子痫前期组显著低于轻度子痫前期组(P<0.05),早发型子痫前期组明显低于晚发型子痫前期组(P<0.05)。子痫前期组血清及胎盘中Siglec-6与Glycodelin-A水平均呈负相关(P均<0.05),子痫前期组血清中Siglec-6水平与不良妊娠结局呈正相关(P<0.05),而Glycodelin-A水平与不良妊娠结局呈负相关(P<0.05)。结论 血清及胎盘中Siglec-6、Glycodelin-A水平的变化在子痫前期发病及病情发展中起着重要作用,且和不良妊娠结局密切相关。

间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征膀胱黏膜组织中肥大细胞活化和相关免疫因子的表达及意义

目的探讨间质性膀胱炎/膀胱疼痛综合征(IC/BPS)患者膀胱黏膜组织中肥大细胞活化,以及白介素(IL)-6、IL-10和唾液酸结合免疫球蛋白样凝集素-8(Siglec-8)的表达及意义。方法收集2016年3月至2017年10月我院收治的21例IC/BPS患者的膀胱黏膜活检组织为IC/BPS组,9例行输尿管镜检查患者的正常膀胱黏膜活检组织为对照组。IC/BPS组男3例,女18例;年龄(56.2±3.4)岁;患者盆腔疼痛及尿频评分(PUF)为(24.6±3.6)分。对照组男4,女5例;年龄(63.0±5.1)岁。采用透射电镜观察IC/BPS组和对照组膀胱黏膜肥大细胞、浆细胞浸润情况。采用免疫组化染色法检测两组IL-6、IL-10、Siglec-8的表达;分析上述免疫指标表达程度与IC/BPS患者PUF评分的关系。结果IC/BPS组21例中18例在超微电镜下可观察到肥大细胞及浆细胞,对照组均未见肥大细胞或浆细胞。IC/BPS组IL-6表达(-)1例,(+)11例,(++)9例;对照组9例IL-6表达均(-),两组差异有统计学意义(P=0.001)。IC/BPS组IL-10表达(-)3例,(+)7例,(++)11例;对照组IL-10表达(-)7例,(+)2例,两组差异有统计学意义(P=0.001)。IC/BPS组Siglec-8表达(-)12例,(+)5例,(++)4例;对照组Siglec-8表达(-)7例,(+)2例,两组差异无统计学意义(P=0.214)。IL-6表达(-)者PUF评分21分,IL-6表达(+)者PUF评分低于(++)者[(23.2±3.2)分与(26.7.4-3.1)分,P=0.025)。IL-10表达(-)者PUF评分低于(++)者[(19.7±2.1)分与(27.1.4-2.5)分,P<0.001],而与(+)者差异无统计学意义[(22.7±1.8)分,P=0.062];IL-10(+)者PUF评分低于(++)者(P=0.001)。9例IL-6、IL-10表达均为(++)者PUF评分为(26.6±2.4)分,高于7例IL-6和IL-10均为(+)者的PUF评分[(21.6±2.2)分,P<0.01]。Siglec-8表达(++)和(+)者共9例,其PUF评分为(21.3±2.0)分,低于(-)者[(27.0±2.3)分,P<0.01]。结论 IC/BPS膀胱黏膜组织中可见肥大细胞活化、浆细胞浸润。IL-6和IL-10表达强弱程度与症状程度呈正相关,Siglee-8表达强弱程度与症状程度呈负相关。