PCR结合酶切-序列比对法鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株

目的用PCR结合酶切-序列比对法对B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行鉴定。方法用玻片凝集法对不同来源的15株B群脑膜炎奈瑟菌菌株进行初步检定,再用PCR结合酶切-序列比对法对上述15株菌株进行进一步鉴定,即用PCR结合酶切法扩增菌株的唾液酸转移酶sia D基因并对PCR产物进行酶切后,用BLAST软件将PCR产物测序结果与Gene Bank中原始sia D序列比对。结果 15株菌株玻片凝集结果均为阳性;15株菌株的PCR产物片段大小均为460 bp;TaqⅠ酶切后,13株菌株的酶切产物片段大小仍为460 bp,其PCR产物测序比对结果与B群脑膜炎奈瑟菌原始sia D序列同源性均达到99%;其余2株酶切产物片段大小约200 bp,与C群脑膜炎奈瑟菌sia D原始基因序列同源性分别为98%和99%。结论 15株菌株经PCR结合酶切-序列比对法鉴定,13株为B群脑膜炎奈瑟菌菌株,2株为C群脑膜炎奈瑟菌菌株;该方法可准确鉴定B群脑膜炎奈瑟菌菌株。

禽源空肠弯曲杆菌LOS基因簇多态性及其cstⅡ基因功能

对277株禽源空肠弯曲杆菌进行LOS生物合成位点的基因簇进行分类,并以野生菌株CJ018(LOS classB)和CJ050(LOS classA)为模板构建cstⅡ基因突变株,进而用野生菌株及其突变株CJ018△cstⅡ和CJ050△cstⅡ对犬肾上皮细胞(MDCK)、非洲绿猴肾细胞(Vero)和人子宫颈癌细胞(Hela)进行黏附入侵试验。结果显示:89.17%试验菌株的LOS基因簇属于常见的6大类,其中Class A占2.17%、Class B占50.90%、Class C占6.14%、Class D占1.44%、Class E占14.44%、Class F占14.08%。成功运用电击法分别构建cstⅡ基因突变株,而且野生株和突变株CJ对细胞的黏附能力差异不显著(P≥0.062 0),而入侵能力差异显著(P=0.0000)。结果表明:含唾液酸化LOS的C.jejuni入侵细胞的能力显著强于含非唾液酸化LOS的C.jejuni。