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用微束激光穿刺技术将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入马铃薯的研究 被引量:11
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作者 傅道林 王兰岚 +1 位作者 张海燕 陈正华 《光子学报》 EI CAS CSCD 2000年第11期970-974,共5页
以马铃薯 (Solanum tuberosum L.)品种“津引 8号”微薯切片作为外植体 ,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白 (PAP) c DNA的导入、整合与表达 .实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗 ,庆大霉素筛选浓度为 80 mg/ L ,共得到 65... 以马铃薯 (Solanum tuberosum L.)品种“津引 8号”微薯切片作为外植体 ,采用微束激光穿刺技术获得了商陆抗病毒蛋白 (PAP) c DNA的导入、整合与表达 .实验首次利用庆大霉素筛选马铃薯再生苗 ,庆大霉素筛选浓度为 80 mg/ L ,共得到 65株庆大霉素抗性苗 ,全部移栽成活 .PCR扩增和 PCR-Southern杂交分析表明 ,PAP c DNA已经稳定整合到马铃薯基因组 .攻毒实验发现 ,多数转基因植株生长健康 ,对供试病毒 PVX具有高度抗性 . 展开更多
关键词 马铃薯 微束激光穿刺技术 商陆抗病毒蛋白基因
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商陆抗病毒蛋白基因导入玉米幼胚愈伤组织研究初报 被引量:5
2
作者 孙晓丽 郑霞 +4 位作者 陈定虎 季良越 胡彦民 汤继华 周广和 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期6-9,共4页
以87 1自交系,87 1×综3,郑22×87 1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25~40mg·... 以87 1自交系,87 1×综3,郑22×87 1,郑22×HI(A×B)4个基因型的玉米幼胚愈伤组织为受体,利用基因枪介导法将商陆抗病毒蛋白(PAP)基因和抗卡那霉素筛选基因以共转化的方式导入玉米胚性愈伤组织,然后在含有25~40mg·L-1G418培养基上筛选愈伤组织并分化得到再生植株.PCR和Southern杂交结果表明,PAP基因已经转入由抗性愈伤组织再生出的玉米植株中. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 基因导入 玉米 幼胚 愈伤组织 基因枪法 pap基因 筛选基因
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商陆抗病毒蛋白体外抑制HBV的实验研究 被引量:5
3
作者 潘延凤 贺永文 +1 位作者 王萍 郭劲松 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2004年第2期80-82,共3页
探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、... 探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedativiralproteinPAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的作用。不同浓度的PAP-S(pokeweedantiviralproteinfromseeds)作用于HepG2 2 15 ,应用ELISA、荧光定量PCR ,分别检测药物作用后细胞上清液的HBsAg、HBeAg、HBVDNA水平的变化。PAP -S处理HepG2 2 15后 72h发现 ,PAP -S在 >1μg/ml时有明显的抗HBV效应 ,在所试验浓度范围 (1- 10 ) μg/ml内 ,倒置显微镜下未发现明显的细胞毒性 ,PAP -S为 5 0 μg/ml时 ,发现部分细胞脱壁。PAP -S对HBsAg、HBeAg、HBVDNA呈剂量时间依赖性。PAP 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 体外抑制 HBV 实验 乙型肝炎病毒 核糖体失活蛋白
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毕赤酵母Mut^+和Mut^s重组子表达美洲商陆抗病毒蛋白基因的比较 被引量:4
4
作者 周倩 王锡锋 +2 位作者 李莉 周广和 高必达 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期425-428,共4页
将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(M... 将N末端信号肽和C末端毒性区域缺失突变的美洲商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)基因表达载体pPIC9K P酶切线性化后 ,通过电击转化整合到巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)GS115菌株细胞中 ,PCR筛选出表型为利用甲醇快速型(Mut+ )的重组子。在相同培养条件下比较Mut+ 重组子和利用甲醇缓慢型 (Muts)重组子在表达缺失突变型PAP方面的异同。结果表明 ,诱导培养 4 8h后 ,Mut+ 重组子表达产物在SDS PAGE胶上可见清晰目的带 ,而Muts 重组子培养 72h才能见到微弱的目的带。抗病毒活性实验表明Mut+ 重组子和Muts 重组子的表达产物均对TMV病毒侵染有明显的抑制作用 。 展开更多
关键词 毕赤酵母 Mut^+重组子 Mut^s重组子 表达 甲醇 PCR 筛选 美洲商陆抗病毒蛋白 pap 基因 TMV病毒
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商陆抗病毒蛋白体外对HepG2.2.15细胞HBV复制的影响 被引量:4
5
作者 贺永文 潘延凤 +1 位作者 王萍 郭劲松 《实用肝脏病杂志》 CAS 2004年第2期80-82,共3页
目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的活性。方法 以不同浓度的PAP S作用于培养的HepG2 .2 .15细胞 ,采用ELISA、荧光定量PCR法分别检测细胞上清液中的HBsAg、HBeAg及HBVDNA水平的变... 目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (pokeweedantiviralprotein ,PAP)体外抗乙型肝炎病毒 (HBV)的活性。方法 以不同浓度的PAP S作用于培养的HepG2 .2 .15细胞 ,采用ELISA、荧光定量PCR法分别检测细胞上清液中的HBsAg、HBeAg及HBVDNA水平的变化 ,并用MTT比色法检测细胞成活率。结果 随着PAP S浓度的增加 ,对HBsAg、HBVDNA的抑制作用亦逐渐增强 ,不同药物剂量组之间差异十分显著 (P <0 .0 1)。PAP S处理后 96h ,PAP S对HBsAg和HBeAg的半数抑制浓度 (ID50 )分别为 6.9μg/ml和 3 .2 μg/ml ,半数中毒浓度 (CD50 )为 2 9.3 μg/ml,治疗指数 (TI) =ID50 /CD50 分别为 4.3和9.3。MTT试验结果显示 ,药物的细胞毒性也呈剂量依赖型 ,倒置显微镜下观察在 5 0 μg/ml~ 10 0 μg/ml剂量组出现部分细胞脱壁和死亡现象。结论 PAP S在体外有直接的抗HBV作用。。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 核糖体失活蛋白 乙型肝炎病毒 HEPG2.2.15细胞
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美洲商陆抗病毒蛋白及其在艾滋病治疗中的应用 被引量:11
6
作者 林爱玉 王秋颖 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期U003-U006,共4页
美洲商陆抗病毒蛋白是一种天然的广谱抗病毒试剂 ,其抗 HIV活性 ,已引起国内外学者的广泛兴趣和重视。旨在综述美洲商陆抗病毒蛋白的结构、核糖体失活活性、抗病毒活性及其在艾滋病治疗中的应用 。
关键词 美洲商陆抗病毒蛋白(pap) 核糖体失活蛋白(RIP) 病毒活性 艾滋病
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商陆抗病毒蛋白基因的克隆、序列分析及在原核中的表达 被引量:3
7
作者 陈定虎 王锡锋 +1 位作者 李莉 周广和 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期390-393,共4页
从美洲商陆 (Phytolaccaamericana)叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了完整的总RNA ,经RT PCR扩增出缺失突变型PAP基因 ,将该基因与克隆载体pGEM(r) T相连接 ,从SP6和T7两端同时对其进行序列测定 ,共测得 711个碱基 ,与国外报道的PAP基因... 从美洲商陆 (Phytolaccaamericana)叶片中通过异硫氰酸胍法提取出了完整的总RNA ,经RT PCR扩增出缺失突变型PAP基因 ,将该基因与克隆载体pGEM(r) T相连接 ,从SP6和T7两端同时对其进行序列测定 ,共测得 711个碱基 ,与国外报道的PAP基因序列相比较 ,其同源性达 99.6 %。同时将该基因克隆至原核表达载体pET 5a上 ,转化大肠杆菌菌株BL2 1(DE3) plysS ,在 0 .4mmol/LIPTG的诱导下表达 ,经SDS PAGE分析表明 ,该基因在大肠杆菌中得到了特异性表达 ,表达蛋白大小为 2 6ku ,与预期值相符。Westernblotting分析发现该表达蛋白与法国PAP抗血清有特异反应。琼脂双扩散免疫沉淀法鉴定发现表达蛋白与其自己的抗血清及法国的PAP抗血清均能形成免疫沉淀线 ,且这两条沉淀线在相交处呈融合状态 ,说明原核表达的该蛋白与法国从商陆叶片中提取出的PAP具有高度的同源性 。 展开更多
关键词 病毒蛋白基因 克隆 美洲商陆 pap基因 序列分析 原核表达
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商陆抗病毒蛋白对感染细胞模型中HCV复制的影响 被引量:2
8
作者 陈瑞烈 林少锐 +5 位作者 李忆璇 郑晓丹 贺永文 高勇 杨小铭 罗端德 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2006年第4期226-228,共3页
目的:探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV复制的影响。方法:用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型(HCV-HepG2),以荧光定量PCR法检测培养上清液中及细胞内HCV RNA,以不同浓度的α-2b干扰素(IFNα-2b)处理同样的... 目的:探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV复制的影响。方法:用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型(HCV-HepG2),以荧光定量PCR法检测培养上清液中及细胞内HCV RNA,以不同浓度的α-2b干扰素(IFNα-2b)处理同样的细胞模型作为对照。结果:经PAP处理后各模型组细胞内HCVRNA含量于48小时、96小时和144小时进行比较,差异有非常显著性意义(P<0·01);培养上清液中HCV RNA含量在48小时时,各组间比较,差异无显著性意义(P>0·05),但在96小时和144小时时,各组间比较差异有非常显著性意义(P<0·01)。PAP对HCV的抑制作用随PAP浓度的增加而增强,以100μg/ml浓度的抑制作用最强。用IFN-α2b处理HCV-HepG2模型亦得出类似的结果。两者均以第48小时的抑制率最高。但在96小时、144小时时PAP对细胞内HCV的抑制作用明显强于IFN(P<0·05,P<0·01)。结论:PAP对HCV感染细胞模型中的HCV复制有明显地抑制作用,且作用强于IFN-α2b。PAP对细胞无明显毒性。 展开更多
关键词 丙型肝炎病毒 商陆抗病毒蛋白 干扰素
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商陆抗病毒蛋白在植物抗病上的应用 被引量:1
9
作者 陈国菊 雷建军 曹必好 《长江蔬菜》 2009年第10X期5-8,共4页
商陆抗病毒蛋白是指商陆属植物中的核糖体失活蛋白。阐述了商陆抗病毒蛋白的研究历史、意义、种类和理化性质,对病原菌的抗性、抗病机理及其在植物抗病上的应用情况等,并对它的应用前景作了展望。
关键词 商陆抗病毒蛋白 抗病 基因分离 转基因
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商陆抗病毒蛋白对感染细胞模型中 HCV 复制的影响
10
作者 陈瑞烈 贺永文 +3 位作者 高勇 李淑莉 杨小铭 罗端德 《传染病信息》 2003年第3期134-134,共1页
目的 探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV的抑制作用。方法 用HCV阳性血清感染人肝癌细胞株HepG2细胞。制成HCV感染细胞模型,用不同浓度的PAP干预该模型;利用荧光定量PCR法分别于药物干预后48h、96h、144h... 目的 探讨商陆抗病毒蛋白(PAP)对丙型肝炎病毒(HCV)感染细胞模型中HCV的抑制作用。方法 用HCV阳性血清感染人肝癌细胞株HepG2细胞。制成HCV感染细胞模型,用不同浓度的PAP干预该模型;利用荧光定量PCR法分别于药物干预后48h、96h、144h检测培养细胞及上清液中HCVRNA含量,同时以不同浓度干扰素(IFN)处理该模型作为对照。结果 PAP处理HepG2感染HCV细胞模型后。细胞内HCVRNA含量在48h、96h、144h各组问与对照组相比有显著差异(P<0.01)。在第48h,HCVRNA含量100μm/ml组和10μm/ml组<lμm/ml组<0.1μm/mll<0.01μm/ml组及对照组;在第96h,HCVRNA含量100μm/ml组和10μm/ml组<lμm/ml组<0.1μm/ml组和0.01μm/ml组<对照组;在第144h,HCVRNA含量100μm/ml组及10μm/ml组<1μm/ml组<0.1μm/ml组、0.01μm/ml组及对照组。培养上清液中HCVRNA含量各组问在48h时与对照组相比差异无显著性(P>0.05),第96h,培养上清液中HCVRNA含量各组间差异显著(P<0.05),100μm/ml组及10μm/ml组<1μm/ml组<0.1μm/ml组、0.01μm/ml组及对照组;第144h时。培养上清液中HCVRNA含量各组问差异显著(P<0.01),100μm/ml组、10μm/ml组及1μm/ml组<0.1μm/ml组、0.01μm/ml组及对照组。PAP对HCV的抑制作用随PAP浓度的增加丽增强,以100μm/ml组对HCV的抑饲作用最强。IFN干预该模型亦得出相似结果,以3.0×10^4IU/ml组对HCV抑制作用最强。PAP与IFN均以第48h的抑饲效果最好,在48h、96h及144h时。PAP对HCV的抑饲作用显著高于IFN(P<0.01)。实验浓度的PAP未引起细胞死亡或脱壁,对细胞的形态、生长也无明显影响。结论 PAP对HCV复制有明显的抑制作用,且作用强于IFN。实验浓度的PAP对细胞形态及生长无明显影响。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 HCV 病毒复制 丙型肝炎病毒感染 细胞模型 干扰素
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商陆抗病毒蛋白重组子筛选及发酵条件初探
11
作者 周倩 高必达 王锡锋 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期62-64,共3页
目的:筛选体外高表达商陆抗病毒蛋白的毕赤酵母重组菌株,并摸索其适合的发酵条件。方法:通过电击转化将含有商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins,PAP)基因的分泌型表达载体PIC9K-P导入到毕赤酵母(Pachia pastoris)GS115菌株中... 目的:筛选体外高表达商陆抗病毒蛋白的毕赤酵母重组菌株,并摸索其适合的发酵条件。方法:通过电击转化将含有商陆抗病毒蛋白(pokeweed antiviral proteins,PAP)基因的分泌型表达载体PIC9K-P导入到毕赤酵母(Pachia pastoris)GS115菌株中。利用免疫印迹法筛选表达量较高的转化子。在摇瓶发酵水平对重组菌株产PAP条件进行初步研究。结果:高表达PAP的重组菌株在发酵时间为96h,10g/L的甲醇浓度,培养基pH值为6.0~6.4时PAP的表达量较高。结论:免疫印迹法适合用于毕赤酵母高表达重组菌株的筛选,重组毕赤酵母的PAP表达量可高达30mg/L。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 毕赤酵母 高表达重组菌株 发酵条件
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商陆抗病毒蛋白cDNA的植物表达载体构建及转化烟草的研究
12
作者 李洪艳 李建国 李艳 《辽宁师范大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2005年第3期333-335,共3页
以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA.将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与... 以商陆抗病毒蛋白的cDNA序列为依据,设计特异性引物,应用PCR技术扩增出5′端含有BamHI,3′端含有KpnI限制性内切酶酶切位点的目的片段,且在序列的开始和结尾分别加入起始密码子ATG和终止密码子TAA.将该目的片段定向克隆于载体pROKII中与CaMV35S启动子和Nos末端构成植物表达载体pRPAP,通过菌落直接PCR法和酶切分析鉴定出阳性重组子,用直接导入法将其导入农杆菌EHA105,以此作为工程菌进行烟草转化.对筛选到的阳性植株随机取样进行Southern印迹分析.结果表明,PAP基因已经整合到烟草基因组中,证明载体构建成功. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 植物表达戢体 转化烟草
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商陆抗病毒蛋白抗HCV作用的初步研究
13
作者 贺永文 陈瑞烈 +1 位作者 高勇 郭劲松 《肝脏》 2002年第4期233-236,共4页
目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (PAP)对HCV的抑制作用。方法 用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型 ,用荧光定量PCR检测HCVRNA。结果 HepG2 细胞内HCV持续表达达 3 0d以上。PAP处理HCV HepG2 细胞后 ,各组细胞内HCVRNA含量在 48h、96h和 14 4... 目的 探讨商陆抗病毒蛋白 (PAP)对HCV的抑制作用。方法 用不同浓度PAP处理HCV感染细胞模型 ,用荧光定量PCR检测HCVRNA。结果 HepG2 细胞内HCV持续表达达 3 0d以上。PAP处理HCV HepG2 细胞后 ,各组细胞内HCVRNA含量在 48h、96h和 14 4h差异非常显著 (P <0 .0 1)。培养上清液HCVRNA含量在 48h时 ,各组间无明显差异 (P >0 .0 5 ) ,但在 96h和 14 4h时 ,各组间差异非常显著 (P <0 .0 1)。此种抑制作用随PAP浓度的增加而增强。结论 PAP具有抑制HCV复制和表达的作用。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 抗HCV作用 HCV感染细胞模型 丙型肝炎 商陆属植物
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PAP—a/CD81—LEL融合蛋白表达载体的构建
14
作者 潘延凤 贺永文 +2 位作者 刘薇 郭劲松 王华 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第19期2909-2911,共3页
目的探讨将商陆抗病毒蛋白-a(PAP-a)与CD81的胞外大环(CD81-LEL)融合,并在大肠杆菌内表达。方法采用重叠延伸PCR方法,将PAP-a和CD81-LEL的基因拼接成PAP-a/CD81-LEL融合基因,并在两基因的连接处引入柔性肽段linker(GSGGSG)的核苷酸片断... 目的探讨将商陆抗病毒蛋白-a(PAP-a)与CD81的胞外大环(CD81-LEL)融合,并在大肠杆菌内表达。方法采用重叠延伸PCR方法,将PAP-a和CD81-LEL的基因拼接成PAP-a/CD81-LEL融合基因,并在两基因的连接处引入柔性肽段linker(GSGGSG)的核苷酸片断,然后将此融合基因克隆到原核表达载体PET-28a上,并在大肠杆菌BL21中进行表达。结果所获得的PAP-a/CD81-LEL融合基因经测序正确,并可以在大肠杆菌BL21中表达,经SDS-PAGE分析,重组蛋白的相对分子量为50KD。结论PAP-a/CD81-LEL融合基因表达载体的成功构建与表达为进一步研究生物活性打下基础。 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 CD81 融合蛋白
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核糖体失活蛋白及其抗病毒转基因研究
15
作者 徐翠莲 胡文明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2007年第35期11416-11417,11419,共3页
综述了几种常见核糖体失活蛋白在植物抗病毒基因工程中的研究,并对核糖体失活蛋白的发展前景进行了展望。
关键词 核糖体失活蛋白 商陆抗病毒蛋白 天花粉蛋白 玉米核糖体失活蛋白 病毒研究
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转基因烟草的pap基因表达及其抗病毒生理的初步研究 被引量:1
16
作者 万多荣 殷娴 +3 位作者 江一希 陈晓博 张海燕 肖尊安 《北京师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期411-416,共6页
农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性... 农杆菌介导将美洲商陆抗病毒蛋白基因(pap)导入烟草云烟87品种的叶肉细胞,经过抗性筛选和鉴定,获得转基因植株.利用RT-半定量法分析了Y1、Y2和Y3转基因株系的pap表达,以及攻毒前后叶片多酚氧化酶(PPO)、超氧物歧化酶(SOD)活性和可溶性蛋白质含量.结果表明:pap在Y1和Y2植株中表达,Y3植株中未检测到pap表达;攻毒后,Y1和Y2叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性较高,而Y3叶片中可溶性蛋白质含量、PPO和SOD活性在三者中最低,与对照相似.讨论了转基因植株中pap表达与其生理变化和病毒抗性的关系. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 烟草 多酚氧化酶 超氧物歧化酶 可溶性蛋白
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PAP基因cDNA克隆及烟草转基因研究 被引量:6
17
作者 王燕萍 曹俊剑 +1 位作者 刘海礁 崔红 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期130-132,141,共4页
以美洲商陆(Phytolacca americanaL.)为材料,利用RT-PCR方法克隆商陆抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,并构建双元植物表达载体pBinARpap.用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg.L-1Kan的MS+0.1 mg.L-1IAA+1.5... 以美洲商陆(Phytolacca americanaL.)为材料,利用RT-PCR方法克隆商陆抗病毒蛋白(PAP)的cDNA,并构建双元植物表达载体pBinARpap.用捕获该质粒的根癌农杆菌菌株LBA4404与烟草叶片外植体共培养,并在附加30 mg.L-1Kan的MS+0.1 mg.L-1IAA+1.5 mg.L-1BA的培养基上诱导植株分化,再生芽在附加30 mg.L-1Kan的MS培养基上生根,实现再生植株.Kan阳性植株经PCR-Sourthern检测筛选,得到PCR阳性植株,证明异源PAP基因在烟草基因组中的整合;经过RT-PCR检测,证明PAP基因在RNA转录水平上有表达;攻毒试验表明,转基因烟草植株对供试病毒TMV具有明显抗性. 展开更多
关键词 烟草 商陆抗病毒蛋白(pap) CDNA克隆 基因转导 烟草花叶病
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将商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入油菜获得抗病毒转基因植株 被引量:30
18
作者 张海燕 周奕华 +7 位作者 党本元 蓝海燕 宋桂英 王兰岚 刘桂珍 张丽华 陈正华 田颖川 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1998年第23期2534-2537,共4页
以子叶柄为材料,分别采用农杆菌介导法与激光微束穿刺法,将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入甘蓝型油菜(Brassica napus L.)“双低”品种H165,经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株.PCR扩增检测及Southern杂交分析... 以子叶柄为材料,分别采用农杆菌介导法与激光微束穿刺法,将损伤诱导型启动子控制之下的商陆抗病毒蛋白(PAP)cDNA导入甘蓝型油菜(Brassica napus L.)“双低”品种H165,经庆大霉素筛选,获得了抗性再生植株.PCR扩增检测及Southern杂交分析表明,PAPcDNA连同损伤诱导型启动子已稳定整合至油菜基因组.攻毒实验表明,PAP的表达受损伤诱导型启动子的控制,转基因油菜植株对供试病毒TuMV具有不同程度的抗性. 展开更多
关键词 商陆抗病毒蛋白 油菜子 转基因油菜 病毒植株
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GNA和α-PAP双抗表达载体的构建及对烟草的遗传转化 被引量:10
19
作者 柴红梅 张绍松 +2 位作者 万萌 赵永昌 黄兴奇 《西南农业学报》 CSCD 2002年第4期35-37,共3页
将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR... 将带有启动子GaMV35S、终止子Nos ter的雪花莲凝集素基因GNA插入到已构建好的植物表达载体pBI121/α PAP上,构建成双抗表达载体pBI121/GNA+α PAP,并采用农杆菌介导法将其转化进入烟草红花大金元,获得了卡那霉素筛选的抗性植株,通过PCR扩增验证,烟草基因组中含有这两个抗性基因。 展开更多
关键词 GNA α-pap 双抗表达载体 烟草 遗传转化 雪花莲凝集素 商陆抗病毒蛋白 表达载体构建
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从中国商陆分离的PacPAP基因转化番茄对TMV的抗性研究 被引量:3
20
作者 陈国菊 赵爽 +2 位作者 雷建军 曹必好 曾国平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期422-425,共4页
以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因。采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50 d后统计发病情况。结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714 bp,与美洲... 以中国商陆(Phytolacca acinosa)叶片为材料,经PCR从基因组扩增克隆缺失无毒型抗病毒蛋白基因。采用叶盘法转化番茄,对转基因植株T1代摩擦接种TMV,50 d后统计发病情况。结果表明:克隆得到缺失无毒型PAP基因PacPAP,大小为714 bp,与美洲商陆抗病毒蛋白基因的同源性为99.7%,GenBank登陆号为AY603353;得到PacPAP整合入番茄基因组中的阳性植株11株,检测的4个转基因番茄株系均达到抗病级别,对照为感病。 展开更多
关键词 中国商陆 商陆抗病毒蛋白基因 遗传转化 番茄
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