商陆皂苷甲对大鼠Heymann肾炎的治疗作用及对细胞因子的影响

目的：商陆皂苷甲（ＥｓＡ）对大鼠Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎（ｐａｓｉｖｅＨｅｙｍａｎｎｎｅｐｈｒｉｔｉｓ，ＰＨＮ）的治疗作用及机理。方法：大鼠ｓｃＦｘ１Ａ抗原的抗体制成自身免疫性肾小球肾炎，ＥｓＡ５，１０和２０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１ｉｐ，连续１４ｄ。结果：ＥｓＡ可以显著减少肾炎大鼠尿蛋白的产生，电镜和免疫荧光检查发现ＥｓＡ治疗后肾炎大鼠病理情况明显好转。ＥｓＡ治疗对血清中炎性细胞因子肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）、白细胞介素１（ＩＬ１）和白细胞介素６（ＩＬ６）的产生具有显著的抑制作用。结论：ＥｓＡ对大鼠Ｈｅｙｍａｎｎ肾炎具有显著治疗作用。

商陆皂苷甲对兔滑膜细胞产生IL-1和TNF的影响

目的 :研究商陆皂苷甲 (Es A)对脂多糖 (L PS)刺激兔滑膜细胞产生白介素 1(IL - 1)和肿瘤坏死因子 (TNF)的影响。方法 :用胸腺细胞增殖法和用 L92 9细胞作靶细胞的生物测定法 ,分别检测与 Es A共育的受 L PS刺激的兔滑膜细胞培养上清中 IL- 1和 TNF的含量。结果 :Es A在 5～ 40 μg/ m l范围内能明显抑制 L PS诱导兔滑膜细胞产生 IL- 1和 TNF。结论 :Es A可抑制滑膜细胞产生 IL - 1和 TNF的作用提示其可能有助于消除类风湿性关节炎的关节炎症。

商陆皂苷甲对自身免疫综合征模型小鼠的疗效

目的:研究商陆皂苷甲(EsA)对自身免疫综合征模型小鼠的疗效。方法:采用ELISA、3H-TdR掺入和病理学检测3种方法,分别观察EsA对模型小鼠抗ds-DNA抗体水平、淋巴细胞转化水平及内脏炎症的影响。结果:EsA在5～20 mg/kg剂量范围内能降低模型小鼠升高的抗ds-DNA抗体和淋巴细胞转化水平,且能显著地改善模型小鼠内脏组织的炎症。结论:EsA对自身免疫综合征模型小鼠有显著的治疗作用,EsA有希望成为治疗自身免疫疾病的有效药物。

商陆皂苷甲对细胞间粘附的影响

目的 研究商陆皂苷甲 (EsA)对细胞间粘附的影响 ,并观察粘附分子ICAM 1和CD1 8mRNA的表达水平。方法 用血细胞计数仪计数的方法考察在脂多糖 (LPS)诱导下 ,EsA对中性粒细胞与内皮细胞间粘附的影响。用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)的方法测定内皮细胞ICAM 1mRNA和中性粒细胞CD1 8mRNA的表达水平。结果 EsA在 3～ 1 2× 1 0 -6μmol·L-1 能降低LPS作用下中性粒细胞与内皮细胞间高水平的粘附率 ,且能降低LPS诱导下内皮细胞ICAM 1mRNA和中性粒细胞CD1 8mRNA的表达。结论 EsA能抑制LPS作用下中性粒细胞与内皮细胞间的粘附可能是其抗炎机制之一 。

不同炮制方法对商陆中商陆皂苷甲含量的影响

目的建立商陆中商陆皂苷甲的含量测定方法,并考察不同炮制方法对商陆中商陆皂苷甲含量影响的差异。方法分别用醋炙法、醋蒸法、清蒸法、绿豆蒸法、高压蒸法炮制商陆,HPLC法测定不同炮制品中商陆皂苷甲含量,以Sino-Chrom ODS BP柱为分析柱,以1‰甲酸乙腈溶液和1‰甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,检测波长210 nm,柱温30℃,流速1.0 mL/min。结果商陆醋炙或清蒸1 h后,商陆皂苷甲含量升高,醋蒸,清蒸10 h,绿豆蒸,高压蒸后,商陆皂苷甲含量下降,尤以醋蒸品下降明显。结论所建立的商陆皂苷甲含量测定方法操作简便快速,结果准确可靠,但以商陆皂苷甲为指标来控制商陆饮片的质量较为单一,有必要进一步研究。

商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏AQP2及AQP4表达的影响

目的:观察商陆皂苷甲对水负荷大鼠肾脏水通道蛋白2(AQP2)及水通道蛋白4(AQP4)表达的调节作用,研究商陆皂苷甲利尿作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、氢氯噻嗪组及商陆皂苷甲高、中、低剂量组,腹腔注射给药,氢氯噻嗪组给予氢氯噻嗪0.4 mg/kg,商陆皂苷甲高、中、低剂量组分别给5.2、2.6、1.3 mg/kg商陆皂苷甲,收集并测量给药后6 h内的尿量;水负荷实验结束后将大鼠麻醉处死,运用免疫组化及Real Time-PCR技术检测大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达的变化。结果:与空白对照组比较,商陆皂苷甲高剂量组大鼠尿量显著增多,肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA的表达显著下调(P<0.05);商陆皂苷甲中、低剂量组尿量及肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达差异无统计学意义。结论:商陆皂苷甲通过下调大鼠肾脏AQP2、AQP4蛋白及mRNA表达,使水分重吸收降低,可能是其利尿作用的机制之一。

商陆皂苷甲致肝毒性的研究

目的通过体外、体内实验相结合的方法考察商陆皂苷甲所致的肝毒性。方法 MTT法测肝细胞(L-02细胞)活力;以不同质量浓度的商陆皂苷甲与肝细胞共培养后,测细胞培养上清中的AST(谷草转氨酶)、ALP(碱性磷酸酶)和LDH(乳酸脱氢酶)水平,并在光镜下对细胞形态进行观察;Hoechst-PI双标染色观察细胞的凋亡和坏死情况;取KM种小鼠分为正常组和给药组,给药组的小鼠每天尾静脉注射10 mg/kg商陆皂苷甲,连续给药7 d,考察小鼠血清肝功能指标和肝组织的病理学变化。结果 MTT的结果显示,商陆皂苷甲能显著抑制肝细胞活力,其IC50为360.18μg/mL;400μg/mL的商陆皂苷甲能升高细胞培养上清中的AST、ALP和LDH(P<0.01)并使肝细胞出现变圆、减少和死亡的现象;300和350μg/mL的商陆皂苷甲能使肝细胞发生凋亡和坏死;体内实验表明,小鼠血清中的AST和ALT(谷丙转氨酶)水平均明显升高(P<0.01),小鼠肝脏多出现肝细胞多发灶性坏死及肝细胞再生现象。结论大剂量的商陆皂苷甲对肝脏具有一定的毒性作用。

商陆皂苷甲急性毒性与利尿作用研究

目的了解商陆皂苷甲对小鼠急性毒性特点,观察其对大鼠的利尿作用。方法向小鼠腹腔注射不同浓度的商陆皂苷甲,观察给药后小鼠毒性反应,测定急性毒性的相关参数。向水负荷状态大鼠腹腔注射不同剂量商陆皂苷甲,测定给药后连续6 h总尿量。结果 Bliss法计算商陆皂苷甲LD50为26.19 mg·kg-1,95%可信区间为23.11-29.85 mg·kg-1。随着商陆皂苷甲浓度的增加,小鼠的毒性反应表现越明显,且小鼠的死亡数随之增加,空白对照组小鼠无异常反应。高剂量组大鼠尿量与阴性对照组差异有统计学意义,而中、低剂量组差异无统计学意义。结论商陆皂苷甲单次腹腔注射对小鼠有一定的毒性且商陆皂苷甲高剂量对大鼠有利尿作用。

商陆皂苷甲致肾细胞毒性的研究

目的:考察商陆皂苷甲Esculentoside A(EsA)对人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的毒性。方法:1)MTT法测细胞活力;2)检测细胞上清液LDH、细胞内SOD及MDA;3)采用倒置显微镜及电镜观察细胞形态学;4)采用Hoechst-PI染色及流式细胞仪观察细胞凋亡的情况。结果:1)EsA对肾细胞的活力有显著的抑制作用,其IC50为149.11μg·mL-1,且存在一定的时效和量效关系;2)EsA能升高肾细胞培养上清中的LDH,使肾细胞内SOD/MDA比值有所下降;3)EsA能使肾细胞及其超微结构发生变化,出现凋亡或坏死,有一定的量效关系。结论:大于100μg·mL-1浓度的商陆皂苷甲对HK-2细胞有一定的毒性,其毒性机制与细胞氧化应激、凋亡等相关。

商陆皂苷甲对BXSB狼疮性肾炎小鼠的治疗作用

目的观察商陆皂苷甲(EsA)在BXSB狼疮性肾炎(LN)模型小鼠体内的作用,探讨其对LN的治疗价值。方法 12周龄雄性BXSB小鼠24只,随机分成对照组、EsA低剂量治疗组和EsA高剂量治疗组。分别给予RPMI 1640培养液、5 mg/(kg.d)的EsA、20 mg/(kg.d)的EsA 0.2 mL腹腔注射4周,1次/d至治疗终点。留取标本,行尿蛋白、血清肌酐、白蛋白测定及肾脏病理检查。结果 (1)模型小鼠尿蛋白升高,治疗组经治疗后较对照组下降,高剂量治疗组进一步下降。(2)经药物治疗后,BXSB小鼠肾组织病理损伤明显减轻。(3)各组血清肌酐及白蛋白均不高,差异无统计学意义。结论 (1)EsA具有降低BXSB狼疮性肾炎小鼠尿蛋白的作用;(2)EsA可以改善BXSB狼疮性肾炎小鼠的肾脏病理。

商陆皂苷甲对银屑病患者外周血单个核细胞产生α肿瘤坏死因子和可溶性白介素2受体的影响

目的:研究在体外商陆皂苷甲(EsA)对银屑病患者外周血单个核细胞(PBMC)分泌肿瘤坏死因子(TNF-α)和可溶性白介素2受体(sIL-2R)水平的影响,探讨其治疗银屑病的可能机制。方法:标本取自30例寻常性银屑病患者和20名健康献血员,利用EsA分别与脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)或植物血凝素(phytohemagglutinin,PHA)协同刺激PBMC,用双抗体夹心ABC-ELISA检测PBMC培养上清液中TNF-α和sIL-2R水平。结果:EsA浓度为1.0～10.0μg/mL时,呈剂量依赖性地明显抑制银屑病患者PBMC释放TNF-α(P<0.05)。EsA浓度在0.5～10.0μg/mL时,PBMC分泌sIL-2R呈轻微的下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),EsA对PHA诱导的sIL-2R释放无显著的抑制作用。结论:抑制TNF-α等炎症递质的释放可能是中国商陆治疗银屑病的机制之一。

商陆皂苷甲泻下作用研究

目的通过复方地芬诺酯致便秘小鼠排便实验及小肠推进实验,研究商陆皂苷甲(Es A)的泻下作用。方法向复方地芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度Es A并灌服墨汁,每2 h收集一次粪便,连续收集10 h,记录每只小鼠首粒黑便出现时间,粪便阴干后称量每一时段内的排便量并计算总排便量;向复方地芬诺酯致便秘小鼠腹腔注射不同浓度Es A并灌服墨汁,给药25 min后脱椎处死,测量并计算小肠推进率。结果与模型对照组比较,Es A高、中剂量组小鼠首粒黑便出现时间缩短,总排便量增加,差异有统计学意义(P<0.05)。小肠推进实验中,Es A高、中、低剂量组小鼠小肠推进率与模型对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论排便实验结果表明:高、中剂量的Es A对复方地芬诺酯致便秘小鼠有一定的泻下作用;小肠推进实验结果表明:Es A对复方地芬诺酯致便秘小鼠没有促进小肠推进的作用。

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞ERK通路活化的影响

目的 观察商陆皂苷甲（Es A）含药血清对大鼠肾小球系膜细胞（r GMC）增殖及其对IL-1β诱导r GMC的ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达的影响,探讨Es A治疗肾小球系膜细胞增殖性疾病的可能机制。方法将SD大鼠随机分成对照组（0.5%羧甲基纤维素钠灌胃）,Es A（5 mg/kg）组,Es A（10 mg/kg）组,Es A（20 mg/kg）组,Es A（40 mg/kg）组,药物灌胃后,获取含药血清;取6代r GMC随机分成对照血清组,Es A（5 mg/kg）血清组,Es A（10 mg/kg）血清组,Es A（20 mg/kg）血清组,Es A（40 mg/kg）血清组,MTT法检测各组对r GMC增殖的影响;将r GMC分为对照组,IL-1β组,IL-1β＋Es A组,IL-1β＋U016组,IL-1β＋U0126＋Es A组,同步化后培养48 h,RT-PCR法检测各组ERK1/2 mRNA的相对表达量,Western blot法检测p-ERK1/2的表达并成像分析。结果Es A（5-10 mg/kg灌胃）含药血清抑制了细胞增殖（P〈0.05,P〈0.01）;IL-1β组促进了r GMC的ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达（P〈0.05）,IL-1β＋Es A组、IL-1β＋U0126组,IL-1β＋U0126＋Es A组作用r GMC后,其ERK1/2 mRNA、p-ERK1/2表达均降低（P〈0.05）。结论 Es A含药血清（5-10 mg/kg灌胃）可显著抑制r GMC的増殖,Es A（10 mg/kg）血清组作用48 h效果最佳;Es A通过下调p-ERK1/2表达,抑制了IL-1β诱导的r GMC增殖,ERK1/2通路是Es A抑制r GMC增殖通路之一。

商陆皂苷甲治疗炎症性疾病机制的研究进展

商陆皂苷甲(EsA)是从中药商陆块根中提取的主要活性成分,具有抗炎、利尿、调节免疫等广泛的药理作用。研究表明,Es A在炎症性疾病方面表现出较好的疗效。Es A可通过发挥抗炎、促凋亡机制,对多种肾炎发挥抑制作用;通过抑制多种炎性细胞因子及多种信号通路相关蛋白的表达,发挥抗炎作用,表现出多种呼吸系统炎症的抑制作用;通过降低模型小鼠海马区中ERK、JNK、p38的磷酸化水平,表现出对神经系统的保护作用;通过发挥抗炎、抗氧化机制,表现出对肝脏的保护作用。

商陆皂苷甲对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎的治疗作用

目的:探讨商陆皂苷甲(EsA)对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎的治疗作用。方法:制备大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎模型,随机分为EsA治疗组、地塞米松治疗组、未治疗组(模型组)。另设正常对照组。隔日测定24h尿蛋白定量。所有大鼠第8天处死,取肾脏组织,显微镜观察肾组织系膜增生程度,利用图像分析系统对系膜区占据肾小球面积进行分析。结果:EsA治疗组及地塞米松治疗组3、5、7天24h尿蛋白与模型组相应时间点比较均明显下降(P<0.01～0.001);EsA治疗组及地塞米松治疗组肾小球系膜细胞及基质增生程度较模型组明显减轻(P<0.05)。结论:EsA对大鼠抗Thy1系膜增生性肾炎具有降低尿蛋白、抑制肾小球系膜细胞及系膜基质的增生的作用。

HPLC-ELSD法测定商陆不同部位中商陆皂苷甲的含量

目的:建立 HPLC-ELSD 法测定商陆中商陆皂苷甲的含量。方法:采用 Diamonsil C_(18)(5 μm,250 mm×4.6 mm)色谱柱,甲醇-水(75:25)为流动相,流速1.0 mL·min^(-1);蒸发光散射检测,ELSD 漂移管温度:74 ℃,载气流速:2.0 L·min^(-1)。结果:商陆皂苷甲进样浓度在26.6～532.5分g·mL^(-1)范围内有良好的线性关系(r=0.9995);平均回收率(n=5)为98.5%,RSD 为1.5%。结论:本方法简便,结果可靠、准确,可用于商陆的质量控制。

HPLC-ELSD法测定商陆药材、饮片和醋商陆中商陆皂苷甲的含量

目的:比较各个产地的商陆药材、饮片及其炮制品醋商陆中的商陆皂苷甲的含量,为商陆及相关制品的质量控制提供含量测定方法,并做好2010版药典的修订工作。方法:运用高效液相色谱法,采用蒸发光散射检测器(ELSD)检测,对所收集的12个产地36个商陆及相关制品进行商陆皂苷甲的含量测定。结果:醋商陆中商陆皂苷甲含量显著高于商陆药材及饮片,商陆药材和饮片含量差异不大。结论:通过HPLC-ELSD对样品中商陆皂苷甲的含量测定可以有效地控制商陆的质量。

商陆皂苷甲对IL-1β诱导的肾小球系膜细胞增殖及CDK2、P27的影响

目的观察商陆皂苷甲(EsA)对白细胞介素(IL)-1β诱导的大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖和细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK2)及其抑制蛋白(P27)表达的影响。方法噻唑蓝(MTT)法检测EsA对rGMC增殖与毒性的影响;碘化丙啶(PI)染色法,流式细胞仪检测细胞周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测CDK2、P27的表达。结果观察剂量中EsA对rG-MC没有细胞毒作用,EsA(2.5～5.0mg/L)作用rGMC 48h后明显抑制其增殖;IL-1β减少了rGMC的G1期细胞数并增加了S期的细胞数,促进了rGMC的CDK2的表达,抑制了P27的表达;EsA增加了IL-1β诱导的rGMC的G1期的细胞数并减少了S期的细胞数,抑制了IL-1β诱导的rGMC的CDK2的表达,并促进了P27的表达。结论 rGMC可能是EsA的作用靶细胞,EsA通过抑制CDK2及激活P27的表达抑制了IL-1β诱导的rGMC的增殖,阻滞了细胞周期的进程。

商陆皂苷甲对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的:观察商陆皂苷甲(EsA)对大鼠肾小球系膜细胞(rGMC)增殖影响,并探讨其作用机制。方法:用不同浓度的EsA(0.625mg/L,1.25mg/L,2.5mg/L,5.0mg/L,10mg/L,20mg/L)刺激rGMC,并设对照组(不加药物干预),4-甲基偶氮四唑蓝(multiply-table tournament,MTT)法检测其对rGMC增殖与毒性的影响。结果:与正常对照组比较,EsA(2.5～5mg/L)作用48,72h能够显著抑制血清诱导的rGMC的增殖(P<0.05或P<0.01),在本实验浓度(0.625～20mg/L)内EsA对rGMC无明显细胞毒性作用(P>0.05)。结论:在体外EsA(2.5～5mg/L)可显著抑制rGMC的増殖;肾小球系膜细胞可能是EsA的作用靶细胞。

商陆皂苷甲对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过观察商陆皂苷甲(esculentoside A,EsA)对BXSB小鼠肾脏细胞凋亡及Bax和Bcl-2表达的影响,探讨EsA治疗狼疮肾炎的可能机制。方法将24只18周龄雄性BXSB小鼠随机分为模型对照组、地塞米松治疗组和EsA治疗组,分别腹腔注射治疗4周后留取各组动物肾组织标本,进行TUNEL法检测肾脏细胞凋亡;免疫组织化学法检测肾组织Bax和Bcl-2表达。结果 3组间肾小球和肾小管细胞凋亡指数的差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组凋亡指数最高,其次是地塞米松治疗组;与模型对照组比较,EsA治疗组和地塞米松治疗组BXSB小鼠的肾组织Bcl-2光密度值明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),EsA治疗组和地塞米松治疗组差异无统计学意义(P>0.05);Bax的表达3组间差异无统计学意义(P>0.05);而3组间肾组织Bcl-2/Bax的比值差异有统计学意义(P<0.05)。结论 EsA具有诱导BXSB小鼠肾小球和肾小管细胞凋亡作用,EsA可以下调BXSB小鼠肾组织中的凋亡调节蛋白Bcl-2表达及Bcl-2/Bax比值而加速细胞凋亡的发生。