人喉上皮细胞的原代培养

目的探讨人喉上皮细胞的原代培养条件及其增殖、分化特点。方法采用低血清（２％）并添加促生长因子的培养基，对中晚期引产胎儿的喉粘膜进行组织块原代培养，并通过倒置显微镜、透射电镜、细胞角蛋白免疫组化染色观察原代培养细胞的特性。结果组织块接种成活率为（４７ ± １１）％，３ｄ后即可见生长晕， １０～ １４ｄ时汇合成片，细胞呈扁平、多角形，胞浆含张力原纤维，细胞间可见丰富的桥粒连结，细胞角蛋白表达阳性。结论本实验采用的培养条件适宜人喉上皮细胞的生长，所获细胞纯度高，培养过程简便；从生物学行为来看，体外培养的人喉上皮细胞同样具有增殖能力和分化潜能，是进行癌变研究的良好对象。

P53蛋白在喉上皮癌前病变及癌组织中的表达及其意义

为探讨喉上皮癌变过程中 Ｐ５３ 蛋白表达水平，采用免疫组化技术检测了１１ 例喉上皮单纯性增生（ Ｓ Ｈ Ｅ）、３２ 例非典型性增生（ Ａ Ｈ Ｅ）及 ４２ 例喉鳞状细胞癌（ Ｌ Ｓ Ｃ Ｃ） Ｐ５３ 蛋白的表达。结果： Ｐ５３ 蛋白阳性表达率在 Ｓ Ｈ Ｅ、 Ａ Ｈ Ｅ 及 Ｌ Ｓ Ｃ Ｃ 中分别为 ０００％ 、３１．２５％ 及 ５２．３８％ ；轻、中、重度 Ａ Ｈ Ｅ 阳性率分别为 ０００％ 、３３．３３％ 及７５％ ；高、中、低分化 Ｌ Ｓ Ｃ Ｃ阳性率分别为６２．５０％ 、７６．９２％ 、１５．３９％ ，其差异有高度显著性（ Ｐ＜ ０．０１）。 Ｐ５３ 蛋白表达与喉癌临床分期、分型、颈淋巴转移、局部复发及预后无相关性。结果提示：喉上皮由正常状态向恶性转化的过程中，存在抑癌基因突变产物 Ｐ５３ 蛋白过度表达，可能与喉癌的发生发展有一定关系。

人乳头状瘤病毒E6和E7蛋白过表达慢病毒载体构建及稳定转染喉上皮细胞系的建立

目的分别构建过表达人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)6型和11型的E6、E7癌基因的慢病毒载体,建立HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的SNU-1076喉上皮细胞系模型。方法分别合成表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的片段,构建重组慢病毒载体pHBLV-CMV-h-HPV6-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro和pHBLV-CMV-h-HPV11-E6-E7-3FLAG-ZsGreen-Puro。包装慢病毒后转染进入人喉上皮细胞系SNU-1076,经嘌呤霉素抗性筛选得到阳性克隆。采用实时定量PCR法分别检测HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因过表达的水平。结果通过测序验证质粒构建的成功。实时荧光定量PCR的结果显示,转染HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7基因的SNU-1076细胞系相较于转染对照空载体的细胞系出现了明显的扩增曲线。其中HPV6-E6-E7的过表达效果为41692倍,HPV11-E6-E7的过表达效果为124957倍。结论利用慢病毒法成功分别建立了过表达HPV6-E6-E7和HPV11-E6-E7的喉上皮SNU-1076细胞系。

喉癌及胚胎喉上皮细胞超微结构初步观察

采用扫描和透射电镜对3例喉癌、3例胎喉上皮及2例成人声带上皮细胞的超微结构对照观察.发现喉癌细胞与早期胚胎喉非纤毛上皮细胞超微结构有许多相似性,故作者认为喉癌细胞可能是一种返祖细胞.

中药蒸汽雾化吸入法治疗喉上皮增生性病变的疗效观察

目的探讨非瘤型喉上皮增生性病变的有效的保守治疗方法。方法符合条件的病例55人,均采用中药雾化器加入自制中药进行中药蒸汽雾化吸入治疗,每次25到30分钟,每天2次,雾化吸入后汤药内服,30天一个疗程,治好为止。结果全部55例病人中,治愈者31例,治愈率56.4%,好转者22例,好转率40%,无效者2例,总有效率96.4%。结论中药蒸汽雾化吸入疗法治疗喉上皮增生性病变,具有治疗方便、疗效确切、治愈率高、无明显毒副作用的特点。

人喉上皮细胞的体外培养及生物学特性

目的建立一种有效的培养体系并提供一个研究人喉上皮细胞的体外模型。方法采用胎牛血清(2%)并添加促生长因子的培养基,对中晚期引产胎儿的喉黏膜进行组织块原代、传代培养,并通过倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、细胞角蛋白免疫组化染色观察培养细胞的特性。结果组织块接种后3d即可见生长晕,10～14d时汇合成片,传代后24h即见细胞贴壁并开始增殖,约12d左右连接成片,可传代2～4代;组织块表层、深层细胞呈现不同的表现;培养细胞呈扁平、多角形,胞浆含张力原纤维,细胞间可见丰富的桥粒连接,细胞角蛋白表达阳性。结论本实验采用的培养方法和条件适宜人喉上皮细胞的生长;从生物学行为来看,体外培养的人喉上皮细胞来自于组织块的基底细胞和中间细胞,并与其来源细胞一样具有增殖能力和分化潜能,具有广阔的应用前景。

人乳头状瘤病毒16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系的建立(英文)

目的建立人乳头状瘤病毒(HPV)16型DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系,确证HPV与喉癌的发生有无关系。方法采用脂质体介导法,将pSV HPV16 DNA导入原代培养的人喉上皮细胞,继续培养、传代,取20代细胞,用PCR检测细胞是否含有病毒的特异片段,用免疫组化染色检测E6、E7 蛋白的表达,用倒置显微镜、生长曲线、流式细胞仪、细胞角蛋白免疫组化染色、透射电镜及软琼脂克隆形成试验检测细胞的生物学特性。结果有3株细胞已连续培养传代超过20代,细胞含有HPV16 DNA的特异片段并有E6、E7蛋白的表达,细胞呈锚着依赖性、接触抑制性单层平铺生长,生长曲线呈典型的"S"型,细胞增殖指数为48%,所有细胞均表达角蛋白,胞浆含张力原纤维,软琼脂培养克隆形成试验阴性。结论成功建立了HPV16 DNA诱导的永生化人喉上皮细胞系,为喉癌研究提供了新的理想模型,HPV16对人喉上皮有致癌作用,在喉癌组织标本中检测到的HPV16 DNA必定在其多步癌变过程中发挥了重要作用。

喉上皮性肿瘤与人乳头状瘤病毒的关系

目的 :研究 HPV与喉上皮性肿瘤的关系。方法 :采用一对 HPV L1区通用引物及 6、1 1、1 6、1 8型特异 E6区引物多聚酶链反应 ,对 1 2 8例喉癌及喉上皮增生性病变样本进行 HPV检测。结果 :2 4例检出HPV,1 6例为 HPV6型 ,4例 HPV 1 1型 ,1例 HPV 1 8型 ,2例未定型。 60例喉癌中 5例阳性 ,其中 3例 6、1 1型均为整合状态 ,另 2例为未定型。结论 :大部分喉癌和上皮增生性病变与 HPV感染无关 ;良性型 HPV可整合于宿主细胞核 ;对少数 HPV阳性患者 ,除采用手术、化疗及放疗外 ,还需抗病毒治疗。

喉粘膜上皮异型增生p53、H-ras过度表达与预后的关系

目的：探讨喉粘膜上皮异型增生p53、H－ras过度表达与预后的关系。方法：应用免疫组化ABC法对63例喉粘膜上皮异型增生（经随访其中40例恶变为癌）、56例喉鳞癌和7例喉正常组织进行检测。结果：p53蛋白阳忖率在喉粘膜卜皮异型增生恶变组为50．0％，未恶变组为17.4％，喉癌组为51.8％，正常组织无表达。恶变组与未恶变组间，未恶变组与喉癌组间的p53蛋白表达差异有统计学意义（分别为P＜0．05和p＜0.01）。H－ras蛋白阳性率在喉正常组织、异型增生恶变组、未恶变组、喉癌组依次为0％、52．5％、522％和73．2％。恶变组和未恶变组间H－ras表达差异无统计学意义。结论：p53蛋白的过度表达与喉粘膜上皮异型增生的预后有密切关系。H－ras的表达与喉粘膜上皮异型增生的预后无关。

基因芯片筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因的初步研究

目的:应用基因芯片技术进行喉鳞状上皮细胞癌相关基因表达谱差异分析,筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因。方法:从4例喉鳞状上皮细胞癌中相同患者体内取喉鳞状细胞癌组织和癌旁正常组织,应用含有人类全基因组的基因芯片进行分析。结果:在4例喉鳞状上皮细胞癌中共同基因表达显著差异的有349条,其中112条表达上调,237条表达下调。结论:基因芯片能提供大量喉癌相关基因表达谱的信息,分析这些差异表达的基因能够阐明喉鳞状上皮细胞癌复杂的生物学特性与基因表达之间的内在联系,并识别肿瘤的标记物,为进一步研究喉鳞状上皮细胞癌发生、发展相关基因打下基础。

RKIP和VEGF在喉鳞癌及喉鳞状上皮不典型增生组织中的表达及临床意义

目的通过检测Raf-1激酶抑制蛋白(RKIP)、血管内皮生长因子(VEGF)在喉鳞癌及喉鳞状上皮不典型增生组织中的表达情况,分析二者在喉鳞癌发生、发展及转移中的作用及可能分子机制。方法采用免疫组化方法检测43例喉鳞癌组织、20例喉鳞状上皮不典型增生组织及9例正常喉黏膜组织中RKIP、VEGF的表达情况,分析其临床意义及二者之间的相关性。结果正常喉黏膜组织、喉鳞状上皮不典型增生组织及喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率逐渐降低,VEGF表达阳性率逐渐上升,喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率显著低于正常喉黏膜组织及喉鳞状上皮不典型增生组织(P均<0.05);有转移的喉鳞癌组织中RKIP表达阳性率低于无转移的喉鳞癌组织(P<0.05),VEGF表达阳性率高于无转移的喉鳞癌组织(P<0.05)。在正常喉黏膜组织、喉鳞状上皮不典型增生组织及喉鳞癌组织中,RKIP与VEGF的表达呈显著负相关(r=-0.324,P=0.006)。结论 RKIP具有抑制喉鳞癌发展及转移的作用,这可能是通过下调VEGF表达来实现的。

VEGF及其受体FIK-1的表达和血管发生与喉粘膜上皮癌变的关系

血管生成在机体出生前后的生理及病理过程中是至关重要的因素。肿瘤组织的生长在多方面也依赖于肿瘤内新生的血管,目前已有实验证实了微血管定量与乳腺癌、黑色素瘤等肿瘤的发生和转移有关。但是,血管的生长受到多种因素的影响,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)作为主要的血管生成因子在血管的发生中发挥着重要的作用。VEGF无论在组织器官的发生。

喉粘膜上皮不典型增生定性诊断和早期喉癌诊断方法的探讨

目的 :探讨喉粘膜上皮不典型增生定性诊断和早期喉癌诊断的方法。方法 :应用 p53基因PCR- SSCP分析、P53蛋白和 型胶原纤维蛋白免疫组化方法、流式细胞技术 (测细胞周期 )和核仁组成区嗜银蛋白 (Ag NORs)染色对 34例不典型增生上皮 (DS)、1 9例喉癌和 1 7例声带息肉的石蜡包埋组织进行研究。结果 :在 34例 DS中有 1 1例上述指标均为阳性 ,其中有 7例与病理诊断为癌相符合 ,有 4例病理诊断为良性 ;有 5例上述指标均为阴性 ,其中 2例病理诊断为癌 ,1例为良性 ,另外 2例无随访结果。结论 :只有将形态学指标和生物学指标联合应用 ,才能科学准确地对癌前病变进行定性诊断 。

人胎儿喉APUD细胞的研究

本文取12例治疗流产的胎儿全喉标本,作矢状连续切片,用改良浸银法等染色,研究了喉内APUD细胞的分布状况,并对其形态学作为详细的分型和描述。

喉癌组织中CD70的表达及其意义

目的探讨分化抗原簇70(CD70)在喉鳞状上皮细胞癌(LSCC)组织中的表达。方法利用CD70单克隆抗体,通过免疫组织化学技术对32例LSCC组织和22例正常声带组织标本进行免疫组织染色,探讨CD70在人喉癌组织中的表达。结果全部32例喉癌组织中CD均有表达,阳性率为100%;而在正常声带组织中仅有2例呈弱阳性表达,阳性率仅为9%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CD70在LSCC中高度表达,可能参与喉癌组织的抗肿瘤免疫活性。

基因芯片筛选喉鳞状上皮细胞癌相关基因的实验研究

目的:进行喉鳞状上皮细胞癌相关基因的验证研究,为喉鳞状上皮细胞癌相关基因的进一步研究打下基础。方法:在基因芯片筛选结果中挑出部分基因(SENP1、CD109、Lamininα2、Lamininα3),应用RT-PCR、Western blot进一步检测这些基因在12例喉鳞状上皮细胞癌及其癌旁正常组织中mRNA和蛋白水平的表达。结果:RT-PCR结果显示SENP1、CD109、Lamininα3基因在喉鳞状上皮细胞癌组织中表达上调,Lamininα2基因表达下调。Westernblot结果显示SENP1、CD109蛋白在喉鳞状细胞癌组织中的表达明显高于对应的癌旁正常组织。结论:SENP1、CD109、Lamininα2、Lamininα3可能与喉鳞状上皮细胞癌的发生、发展相关,这对从分子水平研究喉癌的发病机制提供了有益的线索。

喉肿瘤及其治疗

65-11-114. 局限性喉淀粉样变性 McAlpine, J. C. 等 J Laryng, 1966, 78, №3, 296～314(英文) 一例报告及文献溫习。 65-11-115.