导流杂交基因芯片技术在成人喉乳头瘤病毒感染分型检测中的临床应用

目的探讨核酸分子快速导流杂交基因芯片技术（HybriMax）在人乳头瘤病毒（HPV）喉部感染分型检测中的应用,并探讨HPV感染与成人喉乳头瘤发病的关系。方法选取2010年3月-2012年10月在本科住院的患者,其中喉乳头瘤36例、声带息肉30例。在支撑喉镜下手术切除喉部病变组织,留取部分组织。同时留取本院妇科门诊HC-Ⅱ检测阴/阳性各10份的宫颈细胞标本;采用HybriMax技术行HPV感染分型检测。结果 10例HC-Ⅱ法阳性宫颈细胞标本HybriMax法均检测出HPV,亚型分别为52、59、68型,其中52型50%（5/10）、58型30%（3/10）,59型20%（2/10）;1例HC-Ⅱ法阴性宫颈细胞标本HybriMax法检测出HPV。36例喉乳头瘤患者HPV阳性率50%（18/36）,分别检测出2种亚型,依次为HPV 6型（33.33%、12/36）、11型（16.67%、6/36）;声带息肉患者均未检测出HPV。结论 HybriMax检测HPV有很好的敏感性和特异性,能检测HPV亚型,是临床喉HPV感染分型检测的有效方法。HPV6、HPV11型可能在成人喉乳头瘤的发病中起作用。

人类乳头瘤病毒DNA在喉乳头瘤病的表达

目的探讨不同型人类乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA在喉乳头瘤中的作用。方法用多聚酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)及原位杂交(in situ hybridism,ISH)方法对喉乳头瘤病(laryngeal papillomatosis,Lp)不同标本检测,10例鳞癌标本对照。结果 PCR检测结果显示35/36瘤体标本HPV6b/11阳性。10/36例瘤体标本6b/11和16/18同显阳性。3/7例瘤旁正常组织标本、5/5例碳化标本以及1/4烟雾标本HPV6b/11阳性。ISH检测结果显示瘤体27/36例HPV6b/11阳性,2例16型阳性,1例18型阳性。鳞癌对照组中HPV16、18阳性各1例;无6b/11阳性者。结论我们研究认为LP中HPV感染以6b/11为主,少部分伴16/18型,而后二者更倾向于与恶性肿瘤及LP恶变有关。LP瘤旁组织及CO_2激光碳化气雾存在HPV。

双温聚合酶链反应检测喉乳头瘤中HPV－DNA

应用双温聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测喉乳头瘤石蜡包埋组织中的人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）ＤＮＡ。结果与常规ＰＣＲ（三温循环）相同：３０例喉乳头瘤中ＨＰＶ总检出率为４６．７％（１４／３０），ＨＰＶ－６／１１／１６的检出率分别为４０％（１２／３０）、１６．７％（５／３０）和６．７％（２／３０），ＨＰＶ－６的检出率极显著高于ＨＰＶ－１１／６（ｘ２＝１０．６，Ｐ＜０．０１）。初步结果表明，本地区喉乳头瘤主要与ＨＰＶ－６的感染密切相关。该法具有缩短检测时间、节省一个恒温水浴箱等优点。

喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力及影响因素分析

目的:探讨喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力现状并分析其影响因素。方法:采用便利抽样法,选取2020年4月-2023年1月在医院住院的127例喉乳头状瘤患儿主要照顾者为研究对象,采用一般资料调查表、家庭坚韧力量表和亲职压力量表对喉乳头状瘤患儿主要照顾者进行现状调查,采用多元线性回归分析喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力的影响因素。结果:喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力得分为(38.49±7.02)分,亲职压力得分为(95.94±15.43)分,相关性分析显示喉乳头状瘤患儿主要照顾者的家庭坚韧力与亲职压力呈负相关(r=-0.619,P<0.05)。多元线性回归分析显示文化程度、亲职愁苦、亲子互动失调和困难儿童是喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力的影响因素。结论:喉乳头状瘤患儿主要照顾者家庭坚韧力处于较低水平,临床护理人员应该采取积极的措施,缓解患儿照顾者的亲职压力,提高患儿照顾者的家庭坚韧力。

复发性喉乳头状瘤患儿照护者照护体验的质性研究

目的了解复发性喉乳头状瘤患儿照护者照护过程的真实体验,以期为改善患儿照护者照护体验提供参考。方法运用现象学研究法,对某三级甲等儿童医院14名复发性喉乳头状瘤患儿的主要照护者进行半结构访谈,运用Colaizzi七步分析法对资料进行分析,分类编码,提炼主题。结果复发性喉乳头状瘤患儿照护者的照护体验可归纳为3个主题:心理感受复杂(母亲的质疑与自责感、对患儿未来担忧)、应对方式水平不一(诊断初期依赖网络获取治疗信息、气道危急征象应对疲乏、反复手术生活秩序感被破坏、积极心理调适与角色转变)与照护需求(嗓音康复渠道、缓解经济压力、渴望社会和家庭成员理解)。结论复发性喉乳头状瘤患儿照护者照护不同阶段的体验感有所差异,存在较多负性心理体验,应在不同阶段给予针对性疾病宣教、照护指导与社会支持,以改善照护者照护体验。

lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进喉乳头状瘤细胞的增殖和凋亡逃逸

目的探讨长链非编码RNA核富集转录本1(lncRNA NEAT1)对喉乳头状瘤(LP)细胞的增殖和凋亡逃逸的调控作用和机制。方法培养人喉乳头状瘤细胞Hs840.T,将正常人口腔上皮细胞(HOECs)作为对照。将Hs840.T分为lncRNA NEAT1过表达载体(pcDNA-NEAT1)组、pcDNA-NEAT1阴性对照(pcDNA-NC)组、沉默lncRNA NEAT1的小干扰RNA载体(siNEAT1)组、siNEAT1的阴性对照(siNC)组、miR-let-7a的模拟物(mimic)组、mimic阴性对照(mimic-NC)组、miR-let-7a抑制剂(inhibitor)组、inhibitor阴性对照(inhibitor-NC)组、沉默碱性亮氨酸拉链和W2结构域2(BZW2)的小干扰RNA载体(siBZW2)组、siBZW2的阴性对照(siBZW2-NC)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2)组、pcDNA-NEAT1联合siBZW2-NC给药(pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC)组。qRT-PCR检测各组中lncRNA NEAT1及其预测靶分子miR-let-7a的表达。Western blot和qRT-PCR检测BZW2的表达。双荧光素酶报告基因实验检测Hs840.T中lncRNA NEAT1和miR-let-7a以及miR-let-7a和BZW2的靶向关系。MTT实验测定Hs840.T的增殖能力。Annexin V-FITC/PI双染法检测Hs840.T的凋亡逃逸能力。结果Hs840.T中的lncRNA NEAT1和BZW2表达高于HOECs(P<0.05),而miR-let-7a表达低于HOECs(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果表明,Hs840.T中lncRNA NEAT1吸附抑制miR-let-7a并上调BZW2的表达(P<0.05),且BZW2是miR-let-7a的靶基因。与pcDNA-NC组相比,pcDNA-NEAT1组Hs840.T的增殖率增加(P<0.05),早期、晚期凋亡率均降低(P<0.05);与siNC组相比,siNEAT1组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增加(P<0.05)。另外,与pcDNA-NEAT1+siBZW2-NC组相比,pcDNA-NEAT1+siBZW2组Hs840.T的增殖率降低(P<0.05),早期、晚期凋亡率均增高(P<0.05)。结论lncRNA NEAT1通过抑制miR-let-7a激活BZW2促进LP细胞的增殖和凋亡逃逸。

低温等离子消融治疗喉乳头状瘤临床疗效及术后复发影响因素

目的观察低温等离子消融治疗喉乳头状瘤的临床疗效并分析其术后复发影响因素。方法选取2020年6月至2021年6月海南医学院第二附属医院收治的80例喉乳头状瘤患者,随机分为对照组及观察组各40例,对照组采用瘤体钳除术治疗,观察组采用低温等离子消融术治疗,记录两组手术指标、治疗有效率、术后并发症及术后12个月复发率;利用多因素Logistic回归分析对术后复发可能的影响因素进行分析。结果与对照组比较,观察组手术及住院时间显著缩短、术中出血量、并发症发生率及复发率显著降低,治疗有效率显著提高(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示,手术次数、手术时机、切割深度、病灶数量是喉乳头状瘤复发的独立危险因素(P<0.05)。结论低温等离子消融治疗喉乳头状瘤临床疗效显著,可有效降低并发症及术后复发发生率,应加强手术次数、手术时机、切割深度、病灶数量等因素在临床治疗中的关注度,以降低术后复发率,改善预后效果。

长链非编码RNA在喉乳头状瘤中的表达及功能分析

目的:分析喉乳头状瘤(laryngeal papilloma,LP)中长链非编码RNA(long chain non-coding RNA,lncRNA)的差异表达谱并预测其靶基因,为喉乳头状瘤的治疗及预防提供新的思路及靶点。方法:用RNA-seq技术对喉乳头状瘤组织及瘤旁组织测序,以差异倍数(FC)作为标准筛选差异表达lncRNAs,分析并提取10 kb范围内lncRNA顺式调控靶标基因,并进入基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析其生物学功能及参与信号通路等。结果:共筛选出227个差异表达基因(Log2FC≥2或≤0.5,P<0.05),其中高表达的上调基因76个(33%)、下调基因151个(67%)。满足位置要求和共表达关系的lncRNA顺式调控靶标基因共有44个,并进入GO和KEGG通路富集分析结果显示,差异表达基因GO BP显著富集在信号传导,KEGG通路显著富集在MAPK信号通路及PI3K-Akt信号通路。结论:lncRNA差异表达及其靶基因以及相关信号通路可能与喉乳头状瘤复发及其癌变密切相关。

低温等离子体对喉乳头状瘤细胞的影响及机制

目的探讨低温等离子体(Non-Thermal Plasma,NTP)对人喉乳头状瘤细胞的影响及机制。方法人喉乳头状瘤细胞株Hs840.T重悬细胞后分为A组(正常培养的Hs840.T细胞株)、B组(正常培养的Hs840.T细胞株经NTP干预2 min)及C组(正常培养的Hs840.T细胞株经NTP干预4 min)。采用细胞计数试剂盒-8方法检测各组细胞存活率;流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;免疫印迹检测各组细胞中表皮生长因子受体(Epidermal Growth Factor Receptor,EGFR)、单克隆血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)、B细胞淋巴瘤2(B-Cell Lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-Associated X Protein,Bax)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteine-Aspartic Acid Protease 3,Caspase-3)蛋白水平;定量反转录聚合酶链式反应检测各组细胞miRNA-196a和miRNA-196b表达。结果与A组相比,B组和C组24、48、72、96 h时细胞活性均显著降低(P<0.05)。A组、B组及C组Hs840.T细胞凋亡率比较存在显著差异(P<0.05)。与A组相比,B组和C组Hs840.T细胞中Bcl-2表达升高,EGFR、VEGF、Bax及Caspase-3、miRNA-196a及miRNA-196b水平显著降低(P<0.05);与B组相比,C组Hs840.T细胞中Bcl-2表达显著升高,EGFR、VEGF、Bax、Caspase-3、miRNA-196a及miRNA-196b水平显著降低(P<0.05)。结论NTP对人喉乳头状瘤细胞杀伤较强,伴随时间依赖性,可以调节EGFR、VEGF、Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白活性而加快肿瘤细胞凋亡,研究机制可能与抑制miRNA-196a表达相关。

喉乳头状瘤不同手术方式预后现状

喉乳头状瘤(LP)是喉部最常见的良性肿瘤,以声嘶、呼吸不畅甚至呼吸困难症状为主[1]。目前,普遍认为喉乳头状瘤的发病与发生与人乳头瘤病毒(HPV)的感染有者密不可分的关系[2],人是HPV唯一的宿主,HPV-6和HPV-11是目前公认的引起LP的HPV分型。LP的治疗上以手术切除病灶为首选,显微镜并用支撑喉镜CO2激光切除喉乳头状瘤手术在治疗LP的手术中的优势相比其他术式更加明显,它能够数倍乃至数十倍的放大术区,达到清楚定位、精准切除病灶,同时达到更小的创伤,且显微镜下能够做到双手操作,方便省时[3]。成人喉乳头状瘤中复发或癌变很常见,在儿童LP中,术后复发较常见,如何防止乳头状瘤复发成为LP治疗的难点之一。本文通过文献复习,简要回顾喉乳头状瘤不同术式,术后复发率是否存在显著差异。

小儿复发性喉乳头状瘤治疗现状

复发性喉乳头状瘤(recurrent laryngeal papilloma,RLP)是小儿常见的喉良性肿瘤, 与感染人乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)直接相关,其具体发病机制目前尚不明确,缺乏有效根治措施,从而给予患儿家庭造成巨大心理压力和经济负担。因此,治疗小儿复发性喉乳头状瘤是临床医生面临的巨大挑战。本文对小儿复发性喉乳头状瘤临床临床常用的手术方式和辅助治疗进展进行综述。

支撑喉镜下二氧化碳激光治疗成人喉乳头状瘤的近远期疗效分析

目的支撑喉镜下手术切除是治疗成人喉乳头状瘤的主要方法,文中分析支撑喉镜下二氧化碳激光治疗成人喉乳头状瘤的近期和远期疗效,并与传统的肿瘤钳除术进行对比。方法收集2012年1月至2014年6月在南京军区南京总医院接受治疗并符合纳入和排除标准的成人喉乳头状瘤患者61例临床资料,依据治疗方法分为观察组26例(二氧化碳激光切除)和对照组35例(肿瘤钳除术)。比较2组患者一般临床资料,短期临床效果(手术时间、住院时间、手术并发症、短期疗效)、手术前后免疫炎症指标的变化以及长期疗效(术后1年的复发率)。结果观察组患者手术时间、住院时间均显著低于对照组[(33.66±4.71)min vs(37.19±5.21)min、(4.07±1.25)d vs(4.83±1.38)d,P<0.05];2组手术并发症和短期疗效差异均无统计学意义(P>0.05)。术后3 d免疫炎症指标C-反应蛋白、白细胞介素-6、肿瘤坏死因子-α及白细胞介素-1β水平,观察组分别为(6.15±1.67)mg/L、(6.51±1.12)ng/L、(23.56±4.16)ng/L、(5.25±1.21)ng/L,对照组分别为(12.20±3.41)mg/L、(15.63±4.11)ng/L、(36.16±7.37)ng/L、(12.63±4.12)ng/L,组间比较差异均有统计学意义(P<0.001)。观察组患者术后1年累积复发率显著低于对照组(12.00%vs 37.93%,P=0.029)。结论在成人喉乳头状瘤的手术治疗中,与传统的肿瘤钳除术相比,二氧化碳激光手术的创伤更小,术后恢复更快,复发率更低,值得临床推广。

儿童复发性喉乳头状瘤样病变的临床研究

目的 探讨儿童喉乳头状瘤样病变 (juvenilrecurrentlaryngealpapillomatosis,JRLP)的治疗方法及儿童复发性呼吸道乳头状瘤 (juvenileonsetrecurrentrespiratorypapillomatosis,JORRP)与小儿喉尖锐湿疣 (infantilelaryngealcondylomaacuminatum ,ILCA)的关系。方法 回顾分析 1994年 3月～ 2 0 0 2年 3月诊治的 4 4例JRLP的临床资料。结果 4 4例中普通组织病理学诊断为ILCA 2 8例 ,JORRP 16例 ;采用斑点杂交和聚合酶链反应检测人乳头状瘤病毒阳性率达 4 2 / 4 4。JRLP患儿平均初诊时间 1 6岁 ,平均手术次数 5 3次 ,平均手术间隔期 2 4个月 ;在总共 2 33次手术中 ,各种并发症总发生率为 3 9%。目前 ,长期缓解 18例 ,正在随访的有 11例 ,失访 10例 ,死亡 5例。手术加有治疗目的的气管切开 (延长手术间隔期 )和手术加中药两种治疗方式效果较好。JORRP和ILCA存在广泛的共性。结论 深入研究JORRP和ILCA的关系具有十分重要的理论价值和临床意义。应尽量避免用气管切开术来缓解JRLP所引起的喉梗阻 ,手术加有治疗目的的气管切开术和手术加中药治疗两种治疗方式值得进一步探讨。

HPV感染在咽喉部鳞癌及喉乳头状瘤中的分布研究

目的人乳头瘤病毒(HPV)被推测为头颈部鳞癌发生、发展的病因。文章旨在研究咽喉部鳞癌、喉乳头状瘤组织中HPV感染型别分布状况及其意义。方法收集自2014年1月至2017年5月间于南京同仁医院耳鼻咽喉头颈外科手术治疗的67例咽喉部鳞癌及喉乳头状瘤患者新鲜组织标本,其中喉癌、下咽癌、口咽癌26例,喉乳头状瘤41例;以同时期手术的良性病变声带息肉20例为对照组。用PCR法进行HPV分型检测。分析受检者HPV肿瘤组感染型别及分布状况。结果研究组67例标本中,HPV阳性者(HPV+)44例(65.7%)。其中喉乳头状瘤的感染型别为HPV11(36/41)和HPV6(4/41),喉癌、下咽癌、口咽癌为HPV16型(6/26),对照组声带息肉HPV均为阴性。结论 HPV16可能是部分喉癌、口咽癌发病的危险因素。喉乳头状瘤的HPV感染率较喉癌、下咽癌更高。

静脉复合麻醉用于儿童喉乳头状瘤手术

目的探讨儿童喉乳头状瘤手术的麻醉方法。方法对我院近年收治的28例喉乳头状瘤患儿的术中麻醉资料进行分析。结果在静脉复合麻醉下,大部分患儿术中生命体征平稳,放置支撑喉镜顺利,安全度过围手术期,仅少数患儿因并发喉痉挛或喉水肿导致呼吸道梗阻行气管插管或气管切开。结论儿童喉乳头瘤手术的麻醉关键是保证有效通气的情况下,保持足够的麻醉深度,使声带松弛无咽喉反射,心血管反应轻,术毕苏醒快,避免任何可加重喉梗阻和呼吸困难的因素。

支撑喉镜下小儿喉乳头状瘤切除术的麻醉探讨

目的探讨支撑喉镜下小儿喉乳头状瘤切除术的麻醉处理方法。方法36例喉乳头状瘤患儿,在支撑喉镜下采用静脉复合麻醉并给予小剂量肌松药连接吸引管高频喷射控制呼吸(HFJV)下行喉乳头状瘤切除术。术中监测动脉血气和ECG,记录患儿在麻醉诱导前、手术开始时、术后15min、术毕及苏醒后5minMAP、HR、SpO2。结果所有患儿术野暴露充分,手术顺利。术中无缺氧和二氧化碳蓄积;MAP、HR、ECG、SpO2、pH、动脉氧分压(PaO2)和动脉二氧化碳分压(PaCO2)稳定;停药后5～10min患儿完全清醒,醒后无复睡、喉头水肿及憋气,苏醒时间为(7.2±3.4)min。支撑喉镜置入时3例患儿HR明显减慢,静脉注射阿托品0.01mg/kg后HR恢复正常;1例患儿在置入支撑喉镜时,MAP与诱导前比较明显升高,观察2～3min后恢复正常。结论静脉复合麻醉加HFJV可安全、有效地应用于支撑喉镜下小儿喉乳头状瘤切除术。

凋亡抑制蛋白Livin在喉乳头状瘤组织中的表达

目的研究凋亡抑制蛋白Livin在喉乳头状瘤(LP)组织中的表达及其与临床复发、恶变的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测43例LP和10例正常喉黏膜中Livin的表达,分析其表达与肿瘤复发和恶变之间的关系和意义。结果Livin定位于细胞胞浆,LP中Livin阳性表达率为19%(8/43);其表达率与临床复发次数及恶变有统计学意义,在正常喉黏膜不表达。结论表达Livin的LP更易于复发和恶变,Livin可能是评价预后的一个重要指标,可辅助临床诊断治疗。