美洛昔康对人喉癌Hep-2细胞株作用的研究

目的探讨美洛昔康对喉癌细胞株Hep-2凋亡作用和对体外培养喉癌Hep-2细胞周期的影响及作用机制。方法应用肿瘤细胞培养技术,随机分实验组和空白对照组,培养不同时间后,用流式细胞仪检测美洛昔康对Hep-2细胞凋亡发生率及对细胞周期的影响,同时检测美洛昔康作用Hep-2细胞后细胞线粒体跨膜电位的变化。结果流式细胞仪分析显示美洛昔康呈浓度依赖性诱导Hep-2细胞凋亡,且实验组G1期细胞数明显增加,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);实验组Hep-2细胞线粒体跨膜电位明显下降,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论美洛昔康具有诱导Hep-2细胞凋亡及抑制细胞分化的作用,其机制可能与触发了线粒体凋亡途径有关。

抗肿瘤药物与TRAIL联用对喉癌HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响

目的探讨化疗药物顺铂(DDP)、5氟尿嘧啶(5-Fu)单独及与TRAIL联合对HEP-2细胞株增殖、凋亡的影响。方法MTT法检测其增殖抑制作用,FCM法检测细胞凋亡率。结果TRAIL与5-Fu、DDP联合作用于HEP-2细胞株时,其抑制率、凋亡率高于单独作用时的抑制率和凋亡率。结论TRAIL与5-Fu、DDP联合作用有协同抑制HEP-2细胞株增殖、诱导HEP-2细胞株凋亡的作用。

Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖及生长周期的影响

目的:探讨肿瘤转移抑制基因Kai1对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及生长周期的影响。方法:本研究以喉癌Hep-2细胞株为研究对象,将携带有Kai1基因的重组腺病毒(rAd-Kai1)进行扩增、纯化并测定其滴度,用适量rAd-Kai1转染人喉癌Hep-2细胞株,利用RT-PCR技术对转染效果进行检测,以未转染Kai1的喉癌细胞株为对照组,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术测定转染组细胞株的增殖抑制率和细胞周期。结果:rAd-Kai1经扩增、纯化后,滴度可达1010PFU/ml,当病毒量为30MOI时,对Hep-2细胞的转染率达93%以上。MTT实验显示转染Kai1的Hep-2细胞株体外增殖能力明显弱于对照组(P<0.01),抑制率可达29%。流式细胞术显示与对照组比较,转染组G0/G1期细胞数量增加,S期细胞数量减少,差异有显著性(P<0.05)。结论:通过重组腺病毒介导,成功地将Kai1基因转入喉癌Hep-2细胞株,Kai1对喉癌细胞体外增殖能力具有抑制作用,其机制可能是将Hep-2细胞生长周期阻滞于G0/G1期,提示:Kai1抑癌基因可能通过阻滞肿瘤细胞生长周期实现抑制肿瘤细胞增殖。

TRAIL联合化疗药物诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡的研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(Tumor necrosis factor related apoptosis-inducingligand,TRAIL)与化疗药物氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)联合使用诱导喉癌HEP-2细胞株凋亡。方法:不同浓度的TRAIL、5-FU、DDP单独及TRAIL与5-FU、DDP联合处理HEP-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测其细胞毒作用,荧光显微镜下观察并计算凋亡率,流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率。结果:HEP-2细胞对低毒性的TRAIL不敏感,对化疗药物相对敏感,TRAIL与低毒性的化疗药物联合作用于细胞后可增强杀伤效应。结论:TRAIL与低毒性的5-Fu、DDP联用表现出高效的杀灭肿瘤细胞作用。

甘草甜素对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及机制研究

目的:探究甘草甜素(Gly)对喉癌Hep-2细胞侵袭和迁移的影响及作用机制。方法:体外培养正常人喉黏膜上皮细胞和喉癌Hep-2细胞,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和蛋白印迹实验检测微小RNA-205-5p(miR-205-5p)、沉默信息调节因子2相关酶3(SIRT3)mRNA和蛋白表达水平。将喉癌Hep-2细胞分为对照组、Gly低浓度组、Gly中浓度组、Gly高浓度组、Gly高浓度+空载质粒组、Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组。各组给予相应浓度的Gly干预或转染对应质粒培养48 h。Transwell实验和划痕实验分别检测各组Hep-2细胞侵袭和迁移能力。RT-qPCR法和蛋白印迹实验检测各组Hep-2细胞miR-205-5p、SIRT3 mRNA和蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验分析miR-205-5p与SIRT3的靶向关系。结果:与人喉黏膜上皮细胞比较,喉癌Hep-2细胞miR-205-5p水平降低,SIRT3 mRNA和蛋白水平升高(均P<0.05)。与对照组比较,Gly低、中、高浓度组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平依次降低,miR-205-5p水平依次升高(均P<0.05)。与Gly高浓度组和Gly高浓度+空载质粒组比较,Gly高浓度+miR-205-5p抑制剂组穿膜细胞数和划痕愈合率、SIRT3 mRNA和蛋白水平升高,miR-205-5p水平降低(均P<0.05)。miR-205-5p可靶向调控SIRT3表达。结论:Gly能够抑制Hep-2细胞侵袭和迁移,其机制可能与上调miR-205-5p表达,进而靶向下调SIRT3表达有关。

粉防己碱对喉癌耐药细胞株Hep-2／ADM多药耐药逆转作用研究

目的探讨天然有效成分粉防己碱(tetrandrine,TET)对喉癌耐药细胞株Hep-2/ADM的多药耐药逆转作用及其可能机制。方法采用MTT法检测不同浓度粉防己碱对Hep-2/ADM细胞的增殖抑制效应,选取其无毒剂量;MTT法检测长春新碱(vincristine,VCR)对HEP-2和Hep-2/ADM细胞增殖的抑制作用及加用粉防己碱后的变化;采用流式细胞仪检测细胞内药物蓄积和外排程度以及细胞凋亡。结果1.5μg/ml及更低浓度的粉防己碱对Hep-2/ADM细胞无明显细胞毒性作用。加入1.0μg/ml和1.5μg/ml粉防己碱后,Hep-2/ADM对VCR的耐药逆转倍数分别为1.72和2倍。1.5μg/ml浓度的粉防己碱可提高VCR在Hep-2/ADM细胞内药物的蓄积,增强VCR诱导的Hep-2/ADM细胞凋亡。结论粉防己碱可以部分逆转Hep-2/ADM细胞的多药耐药,随药物浓度增加,逆转效果有可能增强,其逆转机制可能与抑制P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)外排功能和增强化疗药物诱导的细胞凋亡有关。

抑制自噬可以增加mTOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡

目的探讨抑制自噬是否可以增加哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(m TOR)抑制剂(AZD8055)引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡。方法选用人喉癌细胞株Hep-2细胞系,应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测m TOR抑制剂AZD8055和(或)自噬抑制剂3-甲基嘌呤(3-MA)对Hep-2细胞活性的影响。Western印迹检测AZD8055和(或)3-MA对Hep-2细胞凋亡通路相关蛋白〔Cleaved多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)、Cleaved Caspase-3、细胞色素C〕的作用。结果 AZD8055作用Hep-2细胞24 h后,细胞生存率显著下降,具有浓度依赖性。AZD8055浓度依赖性地增加Hep-2细胞凋亡相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3及细胞色素C表达。当3-MA与AZD8055联用时,二者联用与单用AZD8055组相比,细胞活性显著降低,显著下调凋亡通路相关蛋白Cleaved PARP、Cleaved Caspase-3、细胞色素C表达。结论抑制自噬可以增加m TOR抑制剂AZD8055引起的喉癌细胞株Hep-2的凋亡。

脂质体阿霉素对人喉癌HEP-2细胞株的影响

[目的]研究脂质体阿霉素对人喉癌HEP-2细胞株的作用特点。[方法]以MTT法分别测定脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别作用于HEP-2细胞株72h后的细胞增殖抑制率并比较两组的半数抑制浓度(IC50);通过流式细胞仪(FCM)检测两组药物分别作用于HEP-2细胞株72h后对其细胞周期的影响;采用荧光分光光度法分别测定脂质体阿霉素和游离阿霉素分别作用于HEP-2细胞株1、3、6h后实验细胞内的药物浓度。[结果]脂质体阿霉素对HEP-2细胞株的IC50是游离阿霉素的1/4倍。脂质体阿霉素组与游离阿霉素组分别采用0.016μg/ml、0.06μg/ml的浓度作用于HEP-2细胞株72h后,均使HEP-2细胞株停滞于G2/M期,且脂质体阿霉素G2/M期百分率高于游离阿霉素。荧光分光光度法结果显示:脂质体阿霉素组内药物浓度在1、3、6h后均分别大于游离阿霉素组,且6h后脂质体阿霉素作用于HEP-2细胞株内的阿霉素浓度是游离阿霉素的4倍。[结论]与游离阿霉素相比,脂质体阿霉素对人喉癌HEP-2细胞株具有较好的增殖抑制作用,并且阻滞HEP-2细胞株于G2/M,其可能机制是与脂质体阿霉素增加细胞内阿霉素浓度有关。

抗人喉癌/抗CD_3双功能抗体的制备及对Hep-2细胞株的杀伤作用

目的 :研究制备抗人喉癌 抗CD3 双功能抗体 ,探讨喉癌主动免疫治疗。方法 :以化学方法将人喉癌及抗CD3单克隆抗体交联为双功能抗体 ,进行介导对肿瘤细胞的杀伤作用。结果 :该双功能抗体介导效应细胞对靶细胞的杀伤率高于抗CD3 的介导作用 ,并随着效靶比的提高而升高。结论 :采用化学交联法制备的抗人喉癌 CD3 双功能抗体具有潜在的临床应用价值。

喉癌细胞株 HEp-2 性激素代谢的研究

人喉癌细胞株ＨＥｐ－２经无性激素培养基（活性碳处理小牛血清）培养后，收集细胞制备匀浆，用３Ｈ标记配体测定其雄激素受体、雌激素受体，同时测定５α－还原酶（５α－Ｒ）和１７β－羟类固醇脱氢酶（１７β－ＨＳＤ）活性。结果显示，ＨＥｐ－２细胞株含雄激素受体，受体水平为１３．７３ｆｍｏｌ·Ｌ－１·ｍｇ－１Ｐｒ，未测到雌激素受体；５α－Ｒ催化睾酮还原为二氢睾酮的转换率为５０％，１７β－ＨＳＤ活性极低。提示ＨＥｐ－２喉癌细胞株仍保留表达雄激素受体的能力，而且５α－Ｒ的活性较高。

ERK 1/2-PKM2/P53信号通路在喉癌Hep-2细胞株增殖中的作用

目的:探究ERK1/2通过PKM2/P53信号通路调节喉癌Hep-2细胞株增殖的潜在机制。方法:采用细胞计数的方法统计经ERK1/2抑制剂U0126、P53抑制剂PFTα处理后0,24,48h时Hep-2细胞的细胞密度,实验随机分为空白对照组(Control)、对照组(Vehicle)、处理组(U0126或PFTα)。采用转染PKM2-siRNA或PKM2-cDNA的方法在Hep-2细胞株上抑制或过表达PKM2。采用免疫印迹(WesternBlot)的方法检测不同处理情况下ERK1/2、p-ERK1/2、P53、PKM2的蛋白水平。结果:抑制ERK1/2的磷酸化可抑制Hep-2细胞生长,抑制P53可阻断抑制ERK1/2导致的Hep-2细胞生长变缓。同时,抑制ERK1/2可下调PKM2水平,抑制或过表达PKM2可分别上调或下调P53。过表达PKM2可阻断抑制ERK1/2引起的Hep-2细胞生长变缓。结论:抑制ERK1/2的磷酸化可通过下调PKM2水平促进P53表达进而抑制Hep-2细胞生长。

睾酮对喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶活性的影响

目的研究睾酮对人喉癌HEP-2细胞株分裂增殖及端粒酶表达活性的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法研究不同浓度睾酮对Hep-2细胞株分裂增殖的影响,用免疫细胞化学检测10-8mol/L睾酮作用48 h细胞雄激素受体及端粒酶的表达活性。结果10-8mol/L睾酮作用48 h,人喉癌细胞Hep-2细胞OD值由作用前的0.150±0.008增至0.281±0.010,其他实验浓度组均不能明显促进Hep-2细胞的分裂增殖。睾酮作用前后Hep-2细胞均强表达雄激素受体,表达率分别为95.73%和93.84%,差别无统计学意义。端粒酶表达率由睾酮作用前的52.35%增至89.21%,端粒酶强阳性细胞爬片由2张增至8张,差异有统计学意义。结论HEP-2细胞株为雄激素敏感型细胞,睾酮可能通过上调端粒酶的表达促进喉癌Hep-2细胞的分裂增殖,这对研究喉癌的激素疗法及开发端粒酶抑制剂有重要的意义。

miR-135a通过下调SOX2抑制喉癌Hep-2细胞的恶性生物学行为和增强对奥沙利铂的敏感性

目的:探讨敲降miR-135a对人喉癌上皮Hep-2细胞的恶性生物学行为和奥沙利铂敏感性的影响。方法:收集2018年1月至2018年6月郑州大学附属南阳医院南阳市中心医院行喉癌切除术10例患者的喉癌组织和癌旁组织标本。采用qPCR检测喉癌组织和Hep-2细胞中miR-135a的表达水平。miR-135 inhibitor转染喉癌Hep-2细胞后,采用CCK-8检测Hep-2细胞活性,集落形成实验检测Hep-2细胞集落形成能力,Transwell实验检测Hep-2细胞的侵袭及迁移能力,WB实验检测Hep-2细胞中SOX2蛋白的表达水平。0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L的奥沙利铂处理已转染miR-135 inhibitor的Hep-2细胞,CCK-8实验检测Hep-2细胞的增殖活性,Annexin-V-FITC/PI染色流式细胞术检测Hep-2细胞的凋亡率。采用miR-135a inhibitor质粒、对照pcDNA空载体(SOX2-Con)质粒、pcDNA-SOX2(SOX2-OE)质粒共转染Hep-2细胞,构建miR-135a inhibitor+SOX2-Con组和miR-135a inhibitor+SOX2-OE组,检测此2组细胞的增殖活性、集落形成能力、侵袭及迁移能力。结果:与癌旁组织比较,喉癌组织中miR-135a表达水平显著升高(P<0.01);与正常NHP细胞比较,miR-135a在Hep-2细胞中表达水平明显上调(P<0.01);转染miR-135a inhibitor导致Hep-2细胞中miR-135a表达水平明显降低(P<0.01)。敲降miR-135a明显降低Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移、侵袭和SOX2表达(均P<0.01);明显增强细胞对奥沙利铂敏感性(P<0.01);与miR-135a inhibitor+SOX2-Con组比较,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞的增殖活性、细胞集落数、迁移与侵袭能力均明显增加(均P<0.01);同时,用不同浓度的奥沙利铂处理此2组细胞,相对于miR-135a inhibitor+SOX2-Con组,miR-135a inhibitor+SOX2-OE组的Hep-2细胞存活率显著升高(P<0.01)。结论:敲降miR-135a可能通过下调转录因子SOX2的表达抑制Hep-2细胞的恶性生物学行为,并增强其对奥沙利铂的敏感性。

槲皮素对喉癌细胞Hep-2的抑制增殖和诱导凋亡作用

目的研究槲皮素在体外对喉癌Hep-2细胞株的生长和凋亡的影响。方法应用MTT法、电镜和流式细胞术等方法对在体外经不同浓度槲皮素处理过的Hep-2细胞进行检测,观察细胞增殖和凋亡的改变。结果①槲皮素在一定浓度范围内能明显抑制Hep-2细胞的生长,作用72 h的半数抑制浓度(IC50)是52.48μmol/L,呈剂量依赖性关系。②PB能诱导Hep-2细胞凋亡,发生G1→S期阻滞。结论槲皮素可使喉癌Hep-2细胞增殖抑制和凋亡,为槲皮素用于喉癌临床治疗提供了部分依据。

藻蓝蛋白诱导喉癌HEP-2细胞凋亡的实验研究

目的:探讨藻蓝蛋白对人喉癌HEP-2细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法:不同浓度藻蓝蛋白处理HEP-2细胞,分别以MTT、倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜、流式细胞术检测藻蓝蛋白对HEP-2细胞活力及凋亡的影响;DCFH-DA标记的流式细胞术检测细胞内的活性氧水平;分光光度法检测细胞内caspase-3、-8、-9的活性;RT-PCR、Western blot检测细胞凋亡相关基因的表达。结果:MTT结果显示藻蓝蛋白能够抑制喉癌HEP-2的细胞活力,且呈时间和剂量依赖性;倒置显微镜、电镜、流式细胞术的一系列定性化和定量化实验证实藻蓝蛋白可显著诱导HEP-2细胞的凋亡;藻蓝蛋白处理后细胞内ROS水平升高,caspase-3、-8、-9被激活;RT-PCR结果表明,藻蓝蛋白作用后Bax、Fas、P53、caspase-3和caspase-9表达显著上调(P<0.05),Bcl-2表达显著下调(P<0.05);Western blot结果和RT-PCR结果一致。结论:藻蓝蛋白能够诱导HEP-2细胞的凋亡,其机制可能与细胞内ROS水平升高,上调Bax、Fas和P53 mRNA,下调Bcl-2 mRNA的表达,从而促进凋亡信号的转导最终导致细胞凋亡有关。

松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因转录的影响

运用基因芯片技术分析松乳菇多糖对人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因表达的影响及分子机制。结果表明,经松乳菇多糖600μg/m L处理48 h后,在人喉癌Hep-2细胞中发现相关肿瘤差异基因共68个,其中人喉癌Hep-2细胞肿瘤相关基因下调倍数大于100倍的基因共8个,下调50~100倍的基因共14个,同时按基因转录水平将这些基因进行了分类。运用KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)通路分析技术分析相关基因通路,结果显示松乳菇多糖主要抑制人喉癌Hep-2细胞中的MAPK信号转导通路和PI3K-AKT信号转导通路。在松乳菇多糖的刺激作用下,人喉癌Hep-2细胞的凋亡是多种基因共同作用的综合结果。用筛选出的基因进一步研究肿瘤凋亡的分子机制,对寻找潜在的抗肿瘤作用靶点具有重要生物学意义。

两种藻胆蛋白对人喉癌Hep-2细胞的光动力杀伤效果

从条斑紫菜中提取高纯度R-藻红蛋白(R-PE)和R-藻蓝蛋白(C-PC),采用MTT法测定主要研究了不同浓度(10、25、50和100μg/ml)R-PE和C-PC分别介导的光动力效应对人喉癌Hep-2细胞的生存率的影响。实验结果显示,两种藻胆蛋白的光动力作用对Hep-2细胞具有杀伤作用。在浓度为100μg/ml,照射剂量为50J/cm2的条件下,藻蓝蛋白对应的细胞存活率为64%,藻红蛋白对应的仅为57%;单用碘钨灯处理,Hep-2细胞的存活率达到86.9%;而单独使用这两种藻胆蛋白处理Hep-2细胞,培养24h后,低浓度藻胆蛋白(10、25μg/ml)对细胞的抑制效果不明显,高浓度对细胞生长具有一定的抑制效果,抑制率为68%。实验证明条斑紫菜R-藻红蛋白和C-藻蓝蛋白具有可开发人喉癌治疗光敏剂应用前景。

金纳米花介导的近红外热疗对人喉癌Hep-2细胞增殖的抑制作用

各向异性的金纳米粒子由于其表面等离子共振吸收峰可红移至近红外光区而具有特殊的近红外光热转换性能[1].研究结果表明,纳米棒等各向异性金纳米粒子可将入射的近红外光能转换成热能,从而有效杀伤肿瘤细胞[2].与手术、放化疗等常规治疗相比,金纳米粒子介导的近红外（NIR）热疗具有非侵入及无耐药性等优点,在肿瘤热疗和载药等领域具有广泛应用前景[3,4].传统的各向异性金纳米粒子的制备过程中需引入对生物体有毒的表面活性剂作配体[5,6],限制了其在生物医学领域的应用.

TNF-α和IFN-γ对Hep-2喉癌细胞MMPs表达的调节作用

目的 :研究喉癌 Hep- 2细胞系中 MMP- 2、MMP- 9、TIMP- 1、TIMP- 2和 MT1 - MMP的表达及 TNF- α和 IFN- γ对 MMPs表达的调节作用。方法 :分别在细胞生长的不同时期收集细胞 ,采用半定量 RT- PCR方法 ,分析 Hep- 2细胞 MMP- 2、MMP- 9、MT1 - MMP和 TIMP- 1、TIMP- 2 m R-NA的表达水平。结果 :细胞接种后 2 4 h MMP- 2和 MMP- 9的 m RNA水平最高。Hep- 2细胞在第2、3天 MT1 - MMP m RNA的表达水平最高 ,细胞表达相对恒定的 TIMP- 1而细胞内 TIMP- 2 m R-NA的表达水平比 TIMP- 1高 2倍。 TNF-α可增强 Hep- 2细胞的 MMP- 2 m RNA的表达 ,IFN-γ可抑制 MMP- 2的表达。两种因子联合应用时其作用可相互抵消。 MT- MMP和 TIMP- 1对 TNF-α和 IFN- γ的调节不敏感。 TIMP- 2 m RNA的水平可被 TNF- α抑制 1倍 ,而 IFN- γ能够增强TIMP- 2 m RNA的水平。结论 :细胞因子对 MMPs的转录有调节作用 ,IFN- γ能够降低 MMP- 2、MMP- 9的表达 ,可成为一种很有价值的喉癌辅助治疗药物。

中药HB对喉癌Hep-2细胞的抑制作用及其机制研究

目的 研究蜈蚣提取物HB对喉癌Hep 2细胞生长的抑制作用及其作用机制。方法 MTT法观察不同浓度的HB对Hep 2细胞的生长抑制情况 ;采用激光扫描共聚焦技术分析HB作用Hep 2细胞 48h后细胞内钙、DNA含量的变化情况。结果 Hep 2细胞用 10 μg/ml、10 0 μg/ml的HB处理 72h后 ,细胞存活率显著降低 ;用 10 μg/ml和2 0 μg/ml的HB处理Hep 2细胞 48h后 ,细胞内钙含量显著升高 (P <0 .0 0 1) ,DNA含量显著降低 (P <0 .0 0 1)。 结论 中药HB在体外对Hep 2细胞的生长有明显地抑制作用 ,机制与降低细胞内DNA含量 。