保留软骨的去细胞全喉支架制备方法及在喉软骨缺损中的修复效果

目的探讨保留软骨的去细胞全喉支架的制备方法及在大鼠喉软骨缺损中的修复效果。方法取6只大鼠用于支架的制备,分离颈总动脉,结扎分支,经颈总动脉灌注去污剂(SDS、Triton X-100、PBS离子型),3只大鼠去除喉黏膜、肌肉、韧带的同时,保留细胞外基质和软骨细胞制备保留软骨的去细胞全喉支架,其余3只用于制备对照组支架。另取34只大鼠,建立0.5 cm×0.5 cm全层喉软骨缺损模型,根据处理方法不同随机分为对照组(n=17)和保留软骨组(n=17),对照组植入未经处理的异体喉骨支架,保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架,比较两组的修复效果。结果 (1)两种支架经过脱细胞灌注处理后,全喉大体结构完整,体积未发生明显的变化;(2)保留软骨的去细胞全喉支架未见表面细胞组织填充,可见胶原、细胞外基质成分组成的腔隙,细胞之间结构紧密,存在于会厌、声带、环状软骨等表面;对照组支架组织中的细胞成分被完全去除,但是依稀可见网状连接,结构之间不紧密;(3)免疫荧光结果显示:保留软骨的去细胞全喉支架除了有肌肉、软骨细胞外,主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阴性;对照组支架免疫荧光染色下MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阳性;(4)保留软骨组大鼠修复6 w后缺损部位存在少许不成熟的软骨细胞,极少的软骨形成陷窝,表面存在纤维组织及炎症细胞;修复12 w后缺损部位得到修复,形成软骨陷窝,炎症反应减少;对照组修复6 w后缺损部位周围软骨细胞较少,缺损部位与周围组织边界明显,存在大量炎症细胞;修复12 w后存在少量纤维组织,存在炎症因子。结论保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架在喉软骨缺损中具有良好的修复效果。

羟基乙酸负载软骨细胞组织工程软骨修复喉软骨缺损

背景:三维可降解生物支架材料的选择对组织工程软骨的构建十分重要,它能为细胞生长提供依附的支架及增殖空间。目的:观察羟基乙酸负载软骨细胞修复喉软骨缺损的效果。方法:取新西兰白兔60只,随机分为2组,对照组、实验组建立喉软骨缺损模型,实验组于缺损处植入负载软骨细胞的羟基乙酸,对照组缺损处植入羟基乙酸,植入后4,8周进行大体与组织学观察。结果与结论:(1)大体观察结果:植入后4周,对照组缺损部位色泽暗红,创面明显,与周围组织界限清晰;实验组缺损部位色泽暗红,表面光滑,与周围软骨平齐;(2)甲苯胺蓝染色结果:植入后8周,实验组喉软组织缺损部位未见明显炎症反应,缺损部位无明显软骨陷窝,有大量软骨细胞生成;对照组缺损部位存在轻微炎症反应,缺损部位存在轻微陷窝,有少许软骨细胞生成;(3)糖胺聚糖及Ⅱ型胶原蛋白阳性面积:实验组植入4,8周的糖胺聚糖及Ⅱ型胶原蛋白阳性面积大于对照组(P<0.05);(4)结果表明:羟基乙酸负载软骨细胞的组织工程软骨可促进喉软骨缺损的修复。

同种异体软骨细胞-聚羟基乙酸复合物修复喉软骨缺损

目的探讨同种异体软骨细胞－聚羟基乙酸 (PGA)复合物在有免疫力的动物体内对喉甲状软骨的修复能力。方法消化分离乳兔肋软骨，获取种子细胞，体外培养，收养第 2～ 3代培养细胞，接种于经多聚赖氨酸处理后的 PGA三维可降解生物支架料上。结果复合物体外培养 7～ 10d，可见呈蜘蛛网状基质产生。术后 4周，修复区愈合良好，无瘢痕及坏死现象；组织学观察可见愈合面有软骨细胞生成和基质分泌。结论软骨细胞－ PGA复合物可用于喉软骨缺损的修复，修复区愈合良好，无明显免疫排斥反应。

人工听骨链重建材料生物相容性、特性及修复喉软骨缺损的效果

背景:喉软骨缺损替代品较多,包括自体软骨、同种异体软骨以及金属支架等,这些材料在喉软骨缺损中均能取得理想效果,但是也存在许多不足。目的:研究人工听骨链重建材料生物相容性及其特性,探讨人工听骨链重建材料在喉软骨缺损中的修复效果。方法:(1)从新鲜人骨中提取骨形态发生蛋白,将羟基磷灰石高温煅烧后制备多孔羟基磷灰石,将获得的多孔羟基磷灰石听骨放入骨形态发生蛋白溶液中,制备骨形态发生蛋白-羟基磷灰石人工听骨链重建材料,分析材料的生物相容性及特性。(2)将40只新西兰雄性成年白兔随机分为多孔羟基磷灰石组和人工听骨链重建材料组,每组20只。制备新西兰雄性成年白兔喉软骨缺损模型,多孔羟基磷灰石组采用多孔羟基磷灰石材料进行修复,人工听骨链重建材料组采用骨形态发生蛋白-羟基磷灰石人工听骨链重建材料修复。结果和结论:(1)不同孔隙率人工听骨重建材料抗压强度和抗压强度差异有显著性意义;(2)骨形态发生蛋白-羟基磷灰石人工听骨链重建材料外表面空洞未形成对称性球状,外观表现为多边形,空隙尺寸为100-200μm;(3)2组大鼠分别植入骨形态发生蛋白-多孔羟基磷灰石和骨形态发生蛋白-羟基磷灰石人工听骨链重建材料后未见明显的不良反应。但人工听骨链重建材料组出现较多的结缔组织及明显骨性结节,且材料降解速度较快。(4)提示骨形态发生蛋白-羟基磷灰石人工听骨链重建材料具有良好的生物相容性和特性,利用其修复喉软骨缺损效果理想,具有较高的临床应用价值。

同种异体软骨修复甲状软骨缺损的实验研究

目的 观察用不同类型的同种异体软骨修复喉软骨缺损的效果。方法 取新西兰白兔16只 ,平均分成两组。在每只兔的双侧甲状软骨切除 6mm× 3mm× 1mm全层软骨。一组动物将RPMI 16 4 0液和甲醛保存 30d的同种异体甲状软骨 (大小为 5mm× 2mm× 1mm)分别植入甲状软骨两侧缺损处 ,另一组动物于甲状软骨两侧缺损处分别植入新鲜的自体和异体软骨。分别于术后 7、30、180及 36 0d时处死取材 ,用大体观察、HE染色及免疫组织化学方法观察移植修复效果。结果经连续 1年观察 ,RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨与自体软骨移植排斥反应轻 ,均能较好修复甲状软骨缺损 ,而甲醛保存软骨早期有明显炎性细胞浸润 ,移植 180d至 36 0d时软骨基质明显吸收 ,软骨细胞退变 ,甲状软骨缺损区为纤维结缔组织修复。结论 RPMI 16 4 0液保存的及新鲜的同种异体软骨都具有活性 ,和自体软骨一样是软骨缺损修复的良好材料 。

喉软骨支架缺损应用骨形态发生蛋白再生的实验研究

目的 :观察骨形态发生蛋白 纤维蛋白复合物 (BMP FG)、骨基质明胶 (BMG)、羟基磷灰石 (HA)在行犬甲状软骨缺损移植修复中的效果 ,为寻求一种理想的移植材料提供实验依据。方法 :制备甲状软骨缺损动物模型 ,将其分为 4组 :空白组、HA组、BMG组和BMP FG组 ,分别用相应的上述材料进行修复 ,并于术后 1、2、4、8和12周随机抽取一定数量的犬取材行大体标本观察 ,光镜和电镜检测。结果 :BMP FG和BMG均能诱导缺损部位形成软骨或骨 ,但前者效果明显优于后者 ;HA不能将缺损形成良好修复。结论 :BMP FG是喉软骨缺损修复的良好材料 ,优于BMG 。