保留软骨的去细胞全喉支架制备方法及在喉软骨缺损中的修复效果

目的探讨保留软骨的去细胞全喉支架的制备方法及在大鼠喉软骨缺损中的修复效果。方法取6只大鼠用于支架的制备,分离颈总动脉,结扎分支,经颈总动脉灌注去污剂(SDS、Triton X-100、PBS离子型),3只大鼠去除喉黏膜、肌肉、韧带的同时,保留细胞外基质和软骨细胞制备保留软骨的去细胞全喉支架,其余3只用于制备对照组支架。另取34只大鼠,建立0.5 cm×0.5 cm全层喉软骨缺损模型,根据处理方法不同随机分为对照组(n=17)和保留软骨组(n=17),对照组植入未经处理的异体喉骨支架,保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架,比较两组的修复效果。结果 (1)两种支架经过脱细胞灌注处理后,全喉大体结构完整,体积未发生明显的变化;(2)保留软骨的去细胞全喉支架未见表面细胞组织填充,可见胶原、细胞外基质成分组成的腔隙,细胞之间结构紧密,存在于会厌、声带、环状软骨等表面;对照组支架组织中的细胞成分被完全去除,但是依稀可见网状连接,结构之间不紧密;(3)免疫荧光结果显示:保留软骨的去细胞全喉支架除了有肌肉、软骨细胞外,主要组织相容性复合体(MHC)-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阴性;对照组支架免疫荧光染色下MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ染色均为阳性;(4)保留软骨组大鼠修复6 w后缺损部位存在少许不成熟的软骨细胞,极少的软骨形成陷窝,表面存在纤维组织及炎症细胞;修复12 w后缺损部位得到修复,形成软骨陷窝,炎症反应减少;对照组修复6 w后缺损部位周围软骨细胞较少,缺损部位与周围组织边界明显,存在大量炎症细胞;修复12 w后存在少量纤维组织,存在炎症因子。结论保留软骨组植入保留软骨的去细胞全喉支架在喉软骨缺损中具有良好的修复效果。

羟基乙酸负载软骨细胞组织工程软骨修复喉软骨缺损

背景:三维可降解生物支架材料的选择对组织工程软骨的构建十分重要,它能为细胞生长提供依附的支架及增殖空间。目的:观察羟基乙酸负载软骨细胞修复喉软骨缺损的效果。方法:取新西兰白兔60只,随机分为2组,对照组、实验组建立喉软骨缺损模型,实验组于缺损处植入负载软骨细胞的羟基乙酸,对照组缺损处植入羟基乙酸,植入后4,8周进行大体与组织学观察。结果与结论:(1)大体观察结果:植入后4周,对照组缺损部位色泽暗红,创面明显,与周围组织界限清晰;实验组缺损部位色泽暗红,表面光滑,与周围软骨平齐;(2)甲苯胺蓝染色结果:植入后8周,实验组喉软组织缺损部位未见明显炎症反应,缺损部位无明显软骨陷窝,有大量软骨细胞生成;对照组缺损部位存在轻微炎症反应,缺损部位存在轻微陷窝,有少许软骨细胞生成;(3)糖胺聚糖及Ⅱ型胶原蛋白阳性面积:实验组植入4,8周的糖胺聚糖及Ⅱ型胶原蛋白阳性面积大于对照组(P<0.05);(4)结果表明:羟基乙酸负载软骨细胞的组织工程软骨可促进喉软骨缺损的修复。