高效液相色谱法同时测定尿中新喋呤和生物喋呤

建立了同时分离检测尿中新喋呤 (neopterin ,NP)和生物喋呤 (biopterin ,BP)的高效液相色谱 (HPLC) 荧光检测方法。采用HypersilBDSC18柱、甲醇 水 (体积比为 10∶90 )流动相 (流速 0 5mL/min)、激发波长 36 0nm、发射波长 4 4 0nm、柱温 2 0℃的色谱条件 ,同时分离测定了尿中的NP和BP。尿标本经三氯乙酸处理 ,在 4℃下 ,以 12 0 0 0r/min的速率离心 15min ,上清液用碱中和后 ,取 30 μL直接进样。研究结果表明 ,NP的线性范围为 0 12～ 10 0 0μg/L ,BP的线性范围为 0 4 8～10 0 0 μg/L ;NP和BP的检测限分别为 0 .0 1和 0 .1μg/L ,日内精密度 (以相对标准偏差 (RSD)表示 )分别为 1.0 9%和 3.39% ,平均回收率分别为 10 0 .7%和 10 0 .3%。用该法测定了正常人和尿毒症病人尿中的NP和BP ,同时用苦味酸法测定了尿肌酐 (Cr) ,发现尿毒症病人尿中的NP与Cr和NP与BP的浓度比值较正常组有显著性升高 (P <0 .0 5 ) ,而BP与Cr的浓度比值无显著性变化。该方法简便、稳定、可行 ,可同时检测尿中NP和BP ,适用于临床尿标本的检测。

反相高效液相色谱法同时测定血清中的新喋呤和生物喋呤

目的 建立同时测定血清中新喋呤 (NP)及生物喋呤 (BP)的反相高效液相色谱 (RP HPLC)方法。方法 血清标本经三氯乙酸去蛋白 ,低温、高速离心 ,用碱中和后直接进样 ,采用外标定量法 ,以甲醇 :水 =5∶95 (v/v)为流动相 ,经HypersilBDSC18反相色谱分离后用荧光检测 (Ex =36 0nm ,Em =4 4 0nm)。结果 线性范围 :BP为 0 .4 8～ 80 0 μg/L ,NP为 0 .12～ 80 0 μg/L。检测灵敏度 :BP为 0 .1μg/L ,NP为 0 .0 1μg/L。日内精密度 :BP为 3.96 % ,NP为 2 .87%。高、中、低浓度的平均回收率 :NP为 97.9%,BP为 94 .3%。NP和BP在血清中的线性回归方程分别为 :Y(NP) =1.0 2 5 5x - 0 .0 0 77(r2 =0 .9998) ;Y(BP) =0 .70 2 7x +0 .0 394 (r=0 .9995 )。正常人血清中的NP和BP的浓度分别为 :(5 .76± 2 .4 4 ) μg/L和 (1.81± 0 .5 7) μg/L ;急性心肌梗死患者血清中NP和BP的浓度分别为 :(12 .96± 6 .95 ) μg/L和 (3.36± 1.73) μg/L ,二者血清中的NP和BP浓度均有显著性差异 (P <0 .0 1)。 结论 该法简便、快速、精确 ,适于血清中生物喋呤及新喋呤的检测。

四氢生物喋呤负荷试验在高苯丙氨酸血症鉴别诊断中的临床应用

目的探讨四氢生物喋呤(BH4)负荷试验在高苯丙氨酸血症(HPA)鉴别诊断中的应用价值。方法自2005年5月到2007年4月,51例HPA患儿采用口服BH4(20mg/kg)负荷试验。对其中血苯丙氨酸(Phe)浓度小于600μmol/L患儿采用口服Phe-BH4联合负荷试验,结合尿喋呤分析、血红细胞二氢喋呤还原酶(DHPR)活性测定。结果(1)在BH4负荷试验中,不同类型HPA患儿的血Phe浓度表现出各不相同的改变。51例HPA患儿中,共鉴别出5例BH4缺乏症,10例BH4反应性苯丙氨酸羟化酶(PAH)缺乏症,36例BH4无反应性苯丙氨酸羟化酶(PAH)缺乏症。(2)在17例中度苯丙酮尿症(PKU)患儿中,9例(52.9%)为BH4反应性PAH缺乏症。结论BH4负荷试验在HPA早期鉴别诊断中十分重要,部分中度PKU对BH4有反应,可使用BH4替代治疗。

窒息新生儿脐血中一氧化氮合酶、生物喋呤、新喋呤变化的临床意义

目的通过观察窒息新生儿血浆一氧化氮合酶（NOS）、生物喋呤（BP）、新喋呤（NP）的变化来了解新生儿窒息及其程度的轻重与这三项指标的相关性，以探讨NOS、BP、NP是否参与窒息的病理生理过程。方法轻度窒息15例，重度窒息15例为病例组，30例同期正常新生儿作为对照组，用固相夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）方法测定血浆中的NOS，高压液相色谱法（HPLC）测定血浆中的BP、NP，同时观察各临床指标的变化。结果重度窒息组血浆NOS、BP、NP均高于轻度窒息组和对照组，差异有高度显著性意义；轻度窒息组血浆NOS、BP、NP均与对照组差异无显著性意义。结论NOS、BP、NP参与了窒息的病理生理过程，可作为新生儿窒息后脑损伤判断的有效指标。

血清新喋呤、生物喋呤检测及其在尿毒症患者中的应用

目的探讨尿毒症患者血清中新喋呤(NP)和生物喋呤(BP)的浓度变化及其临床意义。方法采用反相高效液相色谱-荧光检测(RP-HPLC-FD)的方法,分别测定正常对照组、尿毒症组透析前后血清中的NP、BP浓度,并进行比较。结果尿毒症组血清中的NP、BP浓度和NP/BP比值均显著高于正常组(P<0.01),透析后血清中的NP、BP浓度显著低于透析前血清中NP、BP浓度(P<0.01,P<0.05),而NP/BP比值差异无显著性(P>0.05)。结论在尿毒症患者中,血清中的NP、BP浓度可作为炎性介质激活的灵敏指标,同时可作为判断肾功能好坏的标志物。

SLE血清新喋呤、细胞间粘附分子-3、Kappa、Lambda轻链和轻链比值的研究

采用单克隆抗体酶联免疫吸附实验（ＥＬＩＳＡ）和全自动免疫速率散射比浊法测定了６０例ＳＬＥ（系统性红斑狼疮）患者血清新喋呤，细胞间粘附分子－３（ＩＣＡＭ－３），ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、κ轻链，λ轻链和κ／λ比值。结果：ＳＬＥ活动组和非活动组血清新喋呤、ＩＣＡＭ－３浓度明显高于健康对照组，活动组与非活动组间比较有显著性差异（Ｐ＜０．０１），血清ＩＣＡＭ－３在非活动组与健康对照组间比较有显著性差异（Ｐ＜ ０．０１）。血清ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ 水平在ＳＬＥ活动组与非活动组间无显著性差异，但血清中κ、λ轻链在ＳＬＥ活动组明显高于非活动组和健康对照组（Ｐ＜ ０．０１），而κ／λ比值活动组明显低于非活动组（Ｐ＜ ０．０１）。结论：ＳＬＥ活动期与非活动期细胞和体液免疫的紊乱程度不同，细胞免疫的异常活跃在ＳＬＥ疾病发展中起主导作用。

血清β-hCG监测在单剂量氨甲喋呤治疗异位妊娠中的临床价值

目的:评价动态检测血β-hCG 在单剂量氨甲喋呤(MTX)治疗宫外孕的临床价值。方法:回顾性分析MTX单剂量肌肉注射治疗宫外孕104例。结果:治疗总成功率为79.8%。成功组:用药前血β-hCG 948.7±893.8 mIU/mL,与失败组(1784.5±1157.5 mIU/mL)相比差异显著(P<0.001),用药后血β-hCG在d 2 以及d 7 下降显著。结论:MTX治疗前血β-hCG不是影响治疗效果的唯一危险因素,血β-hCG联合超声检测附件包块、后穹隆积液、是适时手术干预的重要客观指标,是保证治疗效果的关键。

四氢生物喋呤缺乏症治疗前后神经系统表现及其脑白质病变分析

目的对比治疗前后四氢生物喋呤缺乏症 (tetrahydrobiopterindeficiency,BH4D)的神经系统表现 ,并观察其治疗前后脑白质的病变 ,为判断治疗效果提供客观的临床和影象学依据。方法BH4D患儿11例 ,男9例 ,女2例 ;年龄17周～4岁。给予四氢生物喋呤 ,美多巴 ,5_羟色胺口服治疗1年 ,行头颅MRI检查 ,采用staudt评估标准 ,对其脑白质病变进行治疗前后的观察评定 ,其中8例以Gesell发育量表测量进行量化比较。结果①治疗后8例Gesell发育量表发育指数较治疗前改善。②治疗前11例患儿 (100 % )均有髓鞘发育延迟 ,其中额叶11例(100 % ) ,枕叶8例 (72.7 % ) ,颞叶4例 (36.4 % ) ,顶叶3例 (27.3 % ) ,胼胝体发育不良6例 (54.5 % ) ,1例小脑发育不良 ,全部病例在双侧侧脑室周围T2加权像 (T2WI)上均有弥漫性高信号病灶。治疗后脑白质病变较前好转 ,但仍存在部分髓鞘发育延迟及T2WI异常高信号。结论治疗后BH4D患儿发育指数较前好转 ,临床症状的改善与脑白质病变具有一致性 ;BH4D患儿脑白质病变具有高发生率 ,表现为髓鞘发育延迟及异常的T2WI高信号 ,推测这种损害不仅与高苯丙氨酸血症有关 ,且与神经递质的合成下降有关 ;治疗后的脑白质病变较治疗前改善 ,与临床症状的改善相一致 ,但依然存在部分脑白质病变 。

扶正排毒片对32例无症状HIV感染者TNF-α及新喋呤的影响

目的探讨扶正排毒片对无症状人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者血清TNF-α及新喋呤(neop-terin,NPI)的影响。方法应用流式细胞技术检测32例服用扶正排毒片6个月的无症状HIV感染者抗凝全血样本中的CD4+T淋巴细胞,并与治疗前比较;应用ELISA法测定血清TNF-α及NPI水平,并与22名健康体检者比较。结果治疗6个月后无症状HIV感染者CD4+T淋巴细胞由(368.63±111.54)个/mm3上升为(412.72±159.63)个/mm3。无症状HIV感染者治疗前血清TNF-α[(20.05±13.08)nmol/L]、NPI[(9.55±2.52)nmol/L]水平均明显高于健康体检组[分别为(12.20±4.07)nmol/L、(5.91±1.43)nmol/L,P<0.05)],治疗后均比治疗前下降(P<0.05),TNF-α水平[(11.06±4.71)nmol/L]与健康体检组比较差异无统计学意义(P>0.05),NPI水平[(8.08±2.13)nmol/L]仍高于健康体检组(P<0.05)。结论血清TNF-α及NPI水平升高代表的异常免疫激活是无症状HIV感染者的病理因素之一;扶正排毒片可降低无症状HIV感染者血清TNF-α及NPI水平,是其疗效的可能机制之一。

生物喋呤的生物学效应及其在脓毒症中的意义

研究表明，一氧化氮（ ＮＯ） 的过度产生可能是诱发脓毒性休克的最后共同通路，而生物喋呤（ 主要为四氢生物喋呤， ＢＨ４） 为一氧化氮合酶（ ＮＯＳ） 重要的辅因子。多种免疫刺激因子均可诱导细胞内ＢＨ４ 合成显著增加，其可与ＮＯＳ 紧密结合，调控ＮＯ 的合成与释放。本文讨论了ＢＨ４ 的生物学效应、调控机制及其在脓毒症中的作用。

多发伤病人血清新喋呤检测的研究

目的 研究多发伤病人血清新喋呤的变化 ,并探讨其与创伤严重度、感染及脏器功能不全的关系。方法 测定 2 8例多发伤病人伤后第 1天、第 3天、第 8天血清新喋呤水平 ,同时评定ISS值、APACHEII评分及记录血常规、感染、脏器功能不全情况。结果 多发伤病人新喋呤为 8 81+7 5 6ng/ml,显著高于对照组 1 37± 0 .75ng/ml(P <0 0 1) ;新喋呤水平与A PACHEII评分值正相关 (r=0 .5 8,P =0 .0 2 ) ;发生脏器功能不全组新喋呤及APACHEII值高于脏器功能正常组 ;发生感染后新喋呤从 5 0 5± 4 13ng/ml升至 11 0 3± 10 42ng/ml(P <0 0 5 )。结论 创伤可引起新喋呤的升高 ,且与创伤严重度正相关 ;监测新喋呤变化有助于及早发现感染 。

中研Ⅱ号对猴感染SIVmac251血清新喋呤水平的影响

目的 :应用中药中研Ⅱ号复方观察对感染SIVmac2 5 1恒河猴血清新喋呤水平的影响。方法 :通过中研Ⅱ号复方对感染SIVmac2 5 1的动物治疗后 ,检测其血清新喋呤水平的变化 ,观察中研Ⅱ号对模型动物的免疫调节作用。结果 :中研Ⅱ号复方能降低感染动物血清新喋呤的水平。结论

肝动脉热化疗栓塞术后患者血清新喋呤和T淋巴细胞rDNA转录活性的改变

目的 研究原发性肝癌患者肝动脉热化疗栓塞术前后血清新喋呤和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的变化及其临床意义。方法 分别用双抗体夹心酶联免疫法(ELISA)和核仁形成区相关蛋白银染技术测定45例中晚期肝癌行肝动脉热化疗栓塞术治疗前后血清新喋呤和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的改变,并与健康对照组比较分析。结果 肝癌组治疗前新喋呤增高,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性降低,与对照组比较有显著性差异(P<0.01);行肝动脉热化疗栓塞术后,患者血清新喋呤降低,外周血T淋巴细胞rDNA转录活性增高,治疗前后有显著性差异(P<0.05);应用免疫调节剂(r-IL-2和r-IFN)组较未用组血清新喋呤下降和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性升高更显著。结论 检测原发性肝癌患者血清新喋呤和外周血T淋巴细胞rDNA转录活性的情况,有助于了解病人的免疫状况,肝动脉热化疗栓塞术能改善机体免疫功能,给予合理的过继免疫治疗能增强这种作用。

降钙素原、新喋呤和C反应蛋白鉴别儿童感染性疾病的临床意义

感染性疾病是儿科的常见病、多发病，可由多种病原微生物引起，快速准确地判断其感染病原体，对正确合理使用抗生素具有重要的指导意义。但是由于部分患儿早期临床表现不典型，或到医院就诊之前已使用解热镇痛类药物，使常规检验的白细胞计数结果受到影响，血液或体液细菌培养耗时长，给临床及时诊断和治疗造成一定的困难。寻找快速准确的诊断指标鉴别病原微生物对临床诊治非常必要。

异源表达细菌二氢喋呤合成酶基因提高拟南芥叶酸含量的研究

植物是人体叶酸的重要来源,人体缺乏叶酸会导致贫血、新生儿神经系统疾病,还与心血管病及某些癌症的发病有关,因此提高食用作物中叶酸的含量是代谢工程的研究目标之一。本研究将从细菌中分离到的编码二氢喋呤合成酶(DHPS)基因FolP,由35S启动子驱动在拟南芥线粒体中过量表达,获得了转基因植株。转基因植株叶酸总含量比野生型对照提高48%,表明DHPS酶对植物叶酸的合成起着调控作用。

血清新喋呤检测在重症急性胰腺炎患者中的价值

目的探讨血清新喋呤检测在重症急性胰腺炎(SAP)患者中的预警价值。方法急性胰腺炎患者77例,根据疾病的严重程度分为SAP 32例和轻症急性胰腺炎(MAP)45例。对照组40名。所有患者于发病入院后次日清晨空腹静脉采血,分离血清测定新喋呤含量。同时监测患者生命体征、血气分析、血常规及反映肝、肾、心等器官功能损害的生化指标的改变,并记录24 h APACHE II评分。结果MAP患者血清新喋呤水平与对照组比较差异无统计学意义,而SAP患者显著高于对照组(P<0.05)及MAP患者(P<0.01);重症组中死亡与存活者之间血清新喋呤水平差异有统计学意义(P<0.01),与病情危重程度有关。结论SAP患者血清新喋呤水平升高,并与疾病的严重程度呈正相关;检测SAP患者血清新喋呤水平有助于判断病情轻重及预后,对早期采取措施、改善预后有重要意义。

甲氨喋呤治疗强直性脊柱炎的系统评价

目的评价甲氨喋呤(MTX)治疗强直性脊柱炎(AS)的疗效和副作用。方法计算机检索CENTRAL(Cochrane图书馆2005年第4期)、MEDLINE (1966～2005．11)、EMbase(1980～2005．11)和CINAHL(1982～2005．11)中的相关文献,语种不限。纳入所有MTX治疗AS的随机对照试验和半随机对照试验,由两名评价员独立纳入试验和提取资料,并对其方法学质量进行评价。对符合纳入标准的研究采用RevMan 4．2软件进行Meta分析。结果共纳入3个随机对照试验(n=116例)。Meta分析结果显示,在改善身体功能、疼痛、脊柱活动度、外周关节/附着点疼痛、肿胀和压痛、脊柱放射学变化、以及患者和医生总体评价等主要结局指标方面,用与不用MTX比较,其差异无统计学意义。唯一的阳性结果是,有1个试验显示MTX组与安慰剂组相比,缓解率提高36%[RR 3．18,95%CI(1．03,9．79)]。该试验中判定缓解的根据是综合晨僵、身体健康状况、Bath强直性脊柱炎活动指数(BASDAI)、Bath强直性脊柱炎功能指数(BASFI)、健康评定问卷(HAQ-S)、患者和医生总体评价等7项指标的变化值,而对所有这些指标的终点值进行分析发现。没有一项显示MTX组与安慰剂组之间有统计学差异。因此,MTX治疗强直性脊柱炎是否有益,值得怀疑。纳入的试验没有报告MTX有严重的副作用。结论目前尚没有足够的证据显示MTX对AS患者有益。还需要开展更多高质量、大样本和更长疗程的随机对照试验,验证MTX治疗强直性脊柱炎的疗效和安全性。中国循证医学杂志,2007,7(4):260～266．

喉癌患者血清新喋呤的水平测定

目的 研究喉癌患者血清新喋呤水平及临床意义。方法 采用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ） 竞争法测定喉癌患者术前、术后（ 各３１ 例） ，及正常对照者（２８ 例） 血清新喋呤水平。结果 患者术前、术后与正常对照者血清新喋呤水平分别为（４．６５±１．９６）ｎｇ／ｍｌ，（４．７３ ±１．９５）ｎｇ／ｍｌ，（０．９６±０．５２）ｎｇ／ｍｌ。喉癌术前、术后组血清新喋呤水平均较正常对照组明显增高（ Ｐ＜０．０１），而喉癌术前、术后组两者之间无显著差异（Ｐ＞ ０．０５） 。结论 喉癌患者体内有Ｔ淋巴细胞免疫异常激活和内源性γ干扰素的增加，此现象可能不受手术的影响。

妊高征患者血清新喋呤、白介素2及可溶性受体的变化与意义

目的:通过观察妊高征患者血清新喋呤、白介素2及可溶性受体(sIL-2R) 水平的变化, 探讨妊高征患者细胞免疫功能的变化及意义。方法: 采用酶联免疫吸附分析法与放射免疫分析法测定28例妊高征(轻、中度12例, 重度16例)和30例正常孕妇的血清新喋呤、白介素2和sIL-2R水平; 比较二组间新喋呤、白介素2和sIL-2R水平的差异; 观察新喋呤、白介素2和sIL-2R水平与妊高征病情的关系。结果: 妊高征患者血清新喋呤、白介素2和sIL-2R水平显著高于对照组(t'=4 543, P<0 .001; t=2. 946, P<0. 01; t'=2 .251, P<0. 05); 重度妊高征患者新喋呤水平显著高于轻、中度患者(t'=2 .913,P<0 .01), 重度妊高征患者与轻、中度患者组比较白介素2和sIL-2R均无显著性差异(t=0 .888, P>0 .2; t=0. 444, P>0 .5)。结论: 妊高征患者血清新喋呤、白介素2及可溶性受体水平显著增高, 新喋呤水平随妊高征病情加重而增高, 提示细胞免疫活性增强可能与妊高征的发生和发病有关。