微山湖地区2022年三带喙库蚊生境与抗药性调查研究

目的对微山湖地区三带喙库蚊的孳生地种类以及抗药性进行调查和测定,为合理选择、使用杀虫剂和防控乙脑提供科学依据。方法2022年7月至9月在微山湖地区监测点,采用勺捕法采集三带喙库蚊幼虫。按照WHO推荐的幼虫浸渍法,检测三带喙库蚊幼虫对4种常用杀虫剂的抗药性,成蚊则采用接触筒法测定抗性水平。结果三带喙库蚊幼虫主要孳生于稻田和灌溉渠,对敌敌畏、残杀威、溴氰菊酯和氯氰菊酯的抗性倍数分别为6.53、3.27、98.75和295.50。对溴氰菊酯和氯氰菊酯的抗药性最高,表现为高度抗性;对敌敌畏和残杀威表现为中度抗性。将三带喙库蚊成蚊暴露于0.05%溴氰菊酯、0.15%氯氰菊酯、0.5%马拉硫磷和0.1%残杀威各1 h、24 h,死亡率分别为21.05%、19.35%、45.45%、94.11%。结论微山湖地区三带喙库蚊对4种常用杀虫剂均产生了抗药性,其中以菊酯类杀虫剂抗性水平最高,当地媒介防控部门应合理选择使用杀虫剂,以更好地控制蚊媒密度及其传染病流行。

基于线粒体ND5基因的我国三省三带喙库蚊种群分化研究

三带喙库蚊是乙型脑炎病毒等多种虫媒病毒的重要传播媒介,我国江苏、浙江和海南省普遍种植水稻,为三带喙库蚊孳生的适宜环境。为了调查三带喙库蚊在这三省的种群分化状态,本研究拟以线粒体ND5基因作为遗传标记对各区域三带喙库蚊种群的遗传多样性和结构进行探讨。结果显示,各区域三带喙库蚊的遗传多样性较高,单倍型多样性指数(Hd)为0.533~0.981,且浙江省三带喙库蚊单倍型多样性指数(0.944)要略高于海南省(0.931)和江苏省(0.910)。各三带喙库蚊种群以单倍型H1、H2和H3为主,而单倍型H9和H12仅分布于海南海口(HNHK)、单倍型H15和H18仅分布于浙江金华(ZJJH)、单倍型H20、H21和H22仅分布于江苏连云港(JSLG)以及单倍型H24和H25仅分布于江苏盐城。UPGMA聚类结果表明该区域三带喙库蚊种群共演化出两个聚类分支,且海南海口株(HNHK)与江苏连云港株(JSLG)、江苏淮安株(JSHA)以及江苏盐城株(JSSY)之间的基因流较强,分别达到13.927、17.423和10.976;江苏连云港株(JSLG)与浙江台州株(ZJTZ)之的基因流达到11.222。AMOVA分析结果显示该区域三带喙库蚊种群分化的主要分子变异来于区域内的各种群之间,所占变异百分比为95.93%;同时,中性检测结果表明三带喙库蚊种群未出现明显的种群扩张。

2017-2021年四川省三带喙库蚊种群监测

目的分析2017-2021年四川省三带喙库蚊监测数据,掌握四川省三带喙库蚊的分布和种群动态变化情况,为防控工作提供科学依据.方法2017-2021年在四川省21个市州采用诱蚊灯法捕获不同生境中的三带喙库蚊.结果2017-2021年共捕获三带喙库蚊106841只,平均蚊密度为0.609只/(灯·h),农村监测点的平均蚊密度为1.407只/(灯·h),城市监测点的平均蚊密度为0.079只/(灯·h),农村平均蚊密度显著高于城市.四川东部城市的蚊密度明显高于西部城市.季节消长变化趋势呈单峰曲线,蚊密度的峰值月份为6-9月.2019年7月蚊密度最高,为3.476只/(灯·h).结论三带喙库蚊在四川省内分布广泛,在部分城市已成为优势蚊种,需要加强农村地区的三带喙库蚊防治工作.

云南三带喙库蚊分布特点及自然感染乙型脑炎病毒的调查

目的：研究三带喙库蚊的分布特点及乙型脑炎病毒的感染率。方法：在农村畜圈和人房捕蚊，用Ｃ６／３６细胞和小白鼠法分离病毒。结果：采获成年雌蚊３５种７０１６７只，其中三带喙库蚊２０４６４只，构成比为２９１６％，季节高峰是７～９月。从三带喙库蚊中分离出２０株乙型脑炎病毒，批阳性率为６２３％，现场感染比１∶７７２，最低带病毒率１３０‰。结论：三带喙库蚊在云南广泛分布，属优势蚊种，是云南乙型脑炎的主要传播媒介。

汉中市三带喙库蚊对常用杀虫剂的抗药性研究

目的了解汉中市三带喙库蚊对常用杀虫剂的抗药性水平。方法用区分剂量法进行抗性检测;测定常用药物对三带喙库蚊的LC50。结果三带喙库蚊对敌敌畏、溴氰菊酯均已达到高抗水平,对氯菊酯达到中抗水平,对氯氰菊酯、DDT较为敏感;DDT、敌敌畏、高效氯氰菊酯、氯菊酯、溴氰菊酯、氯氰菊酯、双硫磷、残杀威对三带喙库蚊的LC50分别为0.221、9.212、0.006、0.026、0.008、0.003、1.747、12.079mg/L。结论灭蚊工作避免使用敌敌畏和溴氰菊酯,应注重综合防治。

保幼激素Ⅲ对三带喙库蚊滞育发生期间卵巢滤泡和体内RNA变化的影响

目的：探索保幼激素Ⅲ（ＪＨ３）对滞育三带喙库蚊卵巢滤泡和体内ＲＮＡ变化的影响。方法：短光照和低温联合作用导致三带喙库蚊滞育后，用２ｐｐｍ０．５ｕｌ或３ｐｐｍ０．５ｕｌ／蚊外源ＪＨ３点滴处理，观察卵巢滤泡发育情况，并测定蚊体内ＲＮＡ和卵巢内蛋白质含量的变化。结果：低温和短光照引起三带喙库蚊滞育后，卵巢滤泡发育受到抑制，体内ＲＮＡ的含量明显减少，ＪＨ３处理可诱导部分滞育的三带喙库蚊转入发育状态，解除滞育的个体卵巢第一滤泡增大，体内ＲＮＡ含量增加，但对卵巢蛋白的含量没有影响。结论：ＪＨ３可诱导滞育三带喙库蚊卵巢发育，体内ＲＮＡ合成增加。

云南三带喙库蚊实验种群的建立及生物学特性观察

目的 建立三带喙库蚊实验室种群 ,观察其生物学特性。方法 采用人工控制温湿度和光照、模拟自然环境的方法 ,幼虫饲料为牛肝馒头粉 ,成蚊供血动物为兔子和小白鼠。结果 在室温 2 4～ 2 7℃ ,昼夜温差 <2℃ ,相对湿度70 %～ 80 %及人工光照 12～ 14h的条件下养殖 ,并在蚊笼中放入枝叶较嫩、多汁、无毒的植物 ,成蚊从叮吸兔血逐渐过渡到叮吸小白鼠血。于 2 0 0 3年 8月至 2 0 0 4年 1月成功繁殖了 7个世代。它们的平均孵化率、蛹化率和羽化率依次为75 .64 %、80 .74%、90 .97% ,经 9～ 16d可完成一个世代的繁殖。羽化后的成蚊 1～ 2d开始交配 ,雌蚊第 3天开始吸血 ,第6天达吸血高峰。吸血后第 3天开始产卵。结论 驯化繁殖三带喙库蚊成功的关键在于提高成活率、交配率、吸血率 ,所获数据对进一步了解该蚊的生长繁殖特性及防治提供了依据。

云南三带喙库蚊对DDT和溴氰菊酯的抗药性研究

目的 了解云南省三带喙库蚊对DDT和拟除虫菊酯类的抗药性现状和分布。 方法 选择云南省昭通市昭阳区、德宏州芒市、普洱市江城县和孟连县，以及玉溪市元江县为调查点，采集三带喙库蚊成蚊，采用成蚊滤纸接触筒法，测定其对DDT和溴氰菊酯的敏感性，根据校正死亡率判定抗性级别。 结果 云南昭阳、芒市、江城、孟连和元江的三带喙库蚊暴露DDT 1 h，24 h后的死亡率分别为51.1%、86.8%、35.4%、21.0% 和4.6%，KT50的范围为18.76～395.65 min，除芒市为初步抗性（M）外，其余4地均为抗性（R）；对溴氰菊酯的死亡率分别为36.9%、59.2%、43.1%、34.1% 和3.3%，KT50的范围为8.69～715.37 min，各调查点均为抗性（R）。 结论 云南省从北到南的三带喙库蚊对DDT和溴氰菊酯同时存在抗性，未来在上述地区使用化学杀虫剂的策略应进行调整。

上海市城区中心地带三带喙库蚊种群新动态及应对措施的研究

为全面掌握上海中心城区三带喙库蚊Culextritaeniorhynchus种群动态新变化并开展相应的科学有效的防治，选取城区成蚊较容易出现的公园和绿化区域环境类型（人民广场及人民公园地区），采用24h连续性成蚊动态监测与蚊幼孳生地调查相结合的方法，对上海市中心城区三带喙库蚊种群动态变化进行研究。研究结果显示三带喙库蚊高峰出现在7月份；人民广场及人民公园地区的三带喙库蚊构成比最高达到32．79％，人民公园2号监测点的三带喙库蚊构成比达到52．6％，并在人民公园1号监测点周边发现2处三带喙库蚊孳生地，而历年监测中三带喙库蚊间断性捕获，多出现在8月份。本研究在上海中心城区首次报道三带喙库蚊的孳生地，且该蚊种已成为公园和绿化区域的优势蚊种。随着气候变化与城市环境的改变，三带喙库蚊对城市环境的适应性不断提高，除淡色库蚊和白纹伊蚊外，三带喙库蚊也应成为上海市城区的重点防治蚊种。

三带喙库蚊携带猪繁殖与呼吸综合征病毒的初步证实

从3个临床发病猪场采集三带喙库蚊提取RNA样本,采用针对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)NSP2基因设计的引物进行RT-PCR检测,并进行克隆、测序和序列分析;同时取三带喙库蚊匀浆上清接种Marc-145细胞进行PRRSV的分离与鉴定。结果表明:从三带喙库蚊提取的3份RNA样品均扩增出大小约为1 060 bp的特异性DNA条带,其序列与从相应猪场病猪分离得到的猪源PRRSV毒株高度同源,与国内参考株CH-1a株相应序列比较均缺失90个碱基。将3份三带喙库蚊匀浆上清接种Marc-145细胞后,均可观察到明显的细胞病变;以间接免疫荧光试验进行检测,可观察到培养细胞内的特异性荧光;采用RT-PCR反应可检出培养细胞内的PRRSV核酸。上述试验证实,三带喙库蚊可携带PRRSV,可能是引起PRRS传播与流行的重要途径之一。

2014—2016年四川省三带喙库蚊的动态监测

目的调查四川省三带喙库蚊成蚊种群动态情况,为做好蚊类的防治,降低流行性乙型脑炎暴发风险提供科学依据。方法 2014—2016年连续在全省21个市州,统一采用诱蚊灯法开展三带喙库蚊成蚊密度、分布和季节消长的监测。结果四川省三带喙库蚊总体密度较低,在全省除甘孜州外均有分布,其中成都市平均密度最高;在不同环境中均捕获了三带喙库蚊,其中牲畜棚捕获数量最多,3年共捕获成蚊129 273只,构成比占70.58%;全省三带喙库蚊密度高峰期集中在6—8月。四川省三带喙库蚊分布广泛,密度最高的为成都市。不同生境中以牲畜棚和农户最高。结论四川省是乙脑高发省份,而三带喙库蚊是乙脑的主要传播媒介,因此密切关注乙脑疫情和三带喙库蚊的动态变化是十分重要的。

实验感染的三带喙库蚊和来亨鸡体内西尼罗病毒的分离与鉴定

采用C636细胞培养分离活病毒、间接免疫荧光染色检测病毒抗原、RTPCR扩增病毒基因片段和PCR产物测序等方法,对实验感染的三带喙库蚊Culextritaeniorhynchus和来亨鸡血液样本中的西尼罗病毒进行分离和鉴定。结果表明,接种实验感染蚊虫研磨液和来亨鸡血液样本的C636细胞出现细胞融合、空泡形成的病变效应;用西尼罗病毒抗血清进行间接免疫荧光染色,感染病毒的细胞呈现黄绿色荧光,为阳性反应;采用3对不同引物的RTPCR体系扩增分别出现预期的408bp、498bp和559bp的基因片段,序列测定证实扩增序列与实验所用毒株相应的基因序列基本相同。从而证实实验感染三带喙库蚊和来亨鸡体血液内的西尼罗病毒与实验感染所用的西尼罗病毒Chin01株一致。

三带喙库蚊胸腔接种乙型脑炎减毒活疫苗病毒的感染动态及致病力观察

目的通过蚊虫胸腔接种乙脑病毒减毒活疫苗SAl4-14-2株。了解该疫苗病毒在蚊虫体内的繁殖情况及其毒力稳定性，进一步评价该疫苗的安全性。方法建立三带喙库蚊的实验室种群，用SA14-14-2、SA14和中山株胸腔接种三带喙库蚊，感染后不同时间取一定数量的蚊虫。研磨制成悬液，用空斑试验检测蚊虫体内的病毒滴度。用感染蚊悬液接种乳鼠和感染蚊虫直接叮咬乳鼠的方法，观察对乳鼠的致病性。结果SAl4-14-2、SAl4和中山株病毒感染蚊虫后，第2～20d蚊虫体内均能检测到病毒，其中SA14-14-2株的滴度为2～3．72logPFU／ml，SAl4株为3～4．85logPFU／ml，中山株为3～5．40log-PFu／ml。中山株的感染滴度最高，其次是SA14株，SAl4-14—2株的感染滴度最低。表明蚊虫对野毒株（中山株和SA14株）更为敏感。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊悬液接种乳鼠，未能引起乳鼠发病或死亡。感染SA14-14-2病毒的三带喙库蚊叮咬乳鼠，未见乳鼠发病或死亡，也未从小白鼠血清中检测到乙脑病毒抗体。结论经胸腔接种。SA14-14-2病毒能在三带喙库蚊体内稳定繁殖。动物接种和蚊虫叮咬试验表明，经蚊体内繁殖的SA14-14-2病毒毒力仍保持原有的弱毒特性，表明该减毒活疫苗通过蚊虫体内繁殖后不会造成传播。

三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18～4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力.

三带喙库蚊密度及季节消长的调查研究

目的掌握辽宁省三带喙库蚊密度和季节消长，为预防流行性乙型脑炎提供科学依据。方法诱蚊灯。结果2007年168次监测共捕获三带喙库蚊768只，占捕蚊总数的7.23%。三带喙库蚊活动时间7~9月，8~9月上旬为高峰期。结论辽宁地区三带喙库蚊的密度和流行性乙型脑炎发病率相吻合。

乙型脑炎减毒活疫苗病毒SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种后的生物学和分子生物学特性

目的研究乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后的生物学和分子生物学特性,进一步评价该株病毒的稳定性和安全性。方法将乙型脑炎病毒减毒活疫苗SA14-14-2株胸腔接种的三带喙库蚊研磨,离心收集上清液,接种于BHK21细胞中培养,得到SA14-14-2M1C1病毒液。应用空斑形成单位法测定病毒滴度,再进行小鼠脑内毒力测定和乳鼠脑内回传后毒力返祖试验。提取病毒RNA,RT-PCR扩增E基因片段,测序后与SA14-14-2原株的E基因序列进行比较分析。结果SA14-14-2M1C1病毒液滴度达1.4×107PFU/ml,小鼠脑内毒力测定结果无小鼠发病死亡,乳鼠脑内传代对小鼠的脑内致病力很低,毒力为1.9LgLD50/0.03ml,小于《中国药典》规定的3.0LgLD50,且皮下注射未见小鼠发病死亡。扩增出的E基因片段序列与原株相比较,只有E区1340位一个核苷酸的变化A→G,导致E447位1个氨基酸的改变D(Asp)→G(Gly),此差异位点不是SA14-14-2株发生基因变异的8个位点之一。结论SA14-14-2疫苗株病毒经三带喙库蚊胸腔接种繁殖后,其生物学(弱毒)特性和基因特征(E区8个氨基酸突变)未发生改变,进一步证实了该病毒的稳定性。

淮安市三带喙库蚊和白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗药性测定

目的了解淮安市三带喙库蚊和白纹伊蚊对常用杀虫剂的抗性现状。方法采用浸渍法测定两种蚊虫对9种杀虫剂的抗药性。结果淮安市三带喙库蚊幼虫仅对胺菊酯产生低度抗性,白纹伊蚊幼虫对敌敌畏、双硫磷、乙酰甲胺磷、残杀威、仲丁威、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯、胺菊酯、吡虫啉的抗性倍数分别为8.18、3.40、3.56、2.02、5.15、1.00、1.60、2.28、2.84。结论在蚊虫防治工作中要注重综合治理措施,加强抗药性监测,控制抗药性发展。

早春猪舍三带喙库蚊自然感染乙脑病毒调查

目的 了解温带地区早春猪舍三带喙库蚊自然感染流行性乙型脑炎病毒情况。方法 于 2 0 0 1和 2 0 0 2年 3月 1日～ 5月 31日 ,每日 18:0 0至次日 6 :0 0 ,对上海奉贤地区陈河洪猪舍采用诱蚊灯诱获蚊虫 ,应用逆转录一聚合酶联反应技术 (RT -PCR)进行乙脑病毒鉴定。结果 2 0 0 1年共诱获成蚊 4 4 2 8只 ,2 0 0 2年 82 6 8只 ,2年蚊种鉴定结果一致 ,均分为 4属 8种。 2 0 0 1年和 2 0 0 2年的优势蚊种均为三带喙库蚊 ,构成比分别为 5 7 81%和 72 0 4 % ;吸血率比较有显著性差异 (χ2 =171 2 7,P <0 0 1)。 2 0 0 1年 5月 2 2日首先在三带喙库蚊检出乙脑病毒 ,检测 99批次标本 ,阳性率为 4 9 4 9% ;2 0 0 2年 5月 19日也是首先在三带喙库蚊检出乙脑病毒。结论 在温带地区蚊虫自然感染乙脑病毒于 5月中下旬开始 ,2年均以三带喙库蚊首先染毒 ,其带毒率明显高于其他蚊种 。

海南省西南部地区流行性乙型脑炎媒介三带喙库蚊季节消长与宿主动物感染状况调查

目的了解海南省流行性乙型脑炎(乙脑)传播媒介的种类、密度、季节消长及动物宿主的乙脑病毒感染状况,为制定乙脑防控措施提供科学依据。方法于2006年4-10月动态监测蚊虫种类、密度和猪血清乙脑抗体水平;蚊媒监测采用人工小时法,猪血清抗体实验室检测采用ELISA。结果海南省黄昏时的优势蚊种为三带喙库蚊,其次是致倦库蚊和中华按蚊;其中三带喙库蚊占捕蚊总数的50.24%,密度为16.43只/人工小时;蚊密度最高峰出现在4月下半月,6月上半月至10月底基本恒定。猪血清乙脑抗体平均阳性率67.95%,最高村阳性率99.04%,随着时间变化呈上升趋势。结论海南省乙脑传播媒介三带喙库蚊密度高,宿主动物猪感染率随蚊密度增高而上升,存在乙脑传播和流行的自然环境。