一株产10-羟基喜树碱喜树内生真菌的分离和鉴定

目的从喜树组织中筛选产10-羟基喜树碱的内生真菌,并对其进行鉴定。方法从喜树(Camptotheca acuminateDecne)树皮中分离、纯化得到6株内生真菌,经摇瓶发酵后,采用TLC法、HPLC和MS分析菌丝的提取物;用插片法进行形态学观察,采用分子生物学方法对XK002菌株rDNA的ITS基因(ITS-5.8S rDNA)进行PCR扩增、测序;利用BLAST软件与GenBank数据库进行相似性分析,并用Clustal X1.81软件法构建系统发育树。结果内生真菌XK002可产10-羟基喜树碱;菌株XK002在PDA培养基上生长迅速,白色绒毛状,4d能长满直径为9cm培养皿,10d后开始形成黑色的子座,产生大量的分生孢子;ITS序列与Valsa mali Miyabe et Yamada相应序列的相似性为100%,基因库接受号(Accession No.)为FJ418170。结论根据形态学和分子生物学方法鉴定可知,XK002菌株为Valsa mali Miyabe et Yamada。

喜树内生真菌的分离及产10-羟基喜树碱菌的鉴定

从喜树(Camptotheca acuminate Decne)树皮中分离、纯化得到6株内生真菌,经摇瓶培养后,采用TLC法与HPLC法对其菌丝体提取物进行分析,结果表明其中1株内生真菌(XK002)产10-羟基喜树碱(10-hydroxycam ptothecin,HCPT),将此菌株命名为XK002,其10-羟基喜树碱产量为410μg/L.对菌株XK002菌落、菌丝体和孢子的有无进行了研究,表明菌株XK002属于无孢菌群(Mycelia sterlia).