红细胞膜蛋白颗粒冷冻蚀刻图像反差不良的原因分析

目的:探讨了红细胞膜蛋白颗粒冷冻蚀刻图像反差不良的相关因素,解决在应用电镜冷冻蚀刻技术制备红细胞膜蛋白颗粒样品的过程中,部分颗粒图像模糊、反差不良,颗粒粘连严重,导致辨识与计数困难的问题。方法:本实验通过采集DMD基因携带者外周静脉血样品,经过抗凝、离心、固定和防冰晶等处理步骤后,应用HUS-5型真空喷镀仪及配套装置,在-100℃条件下制备复型膜。在以往工作的基础上,分析蛋白颗粒图像成因,采取在喷镀过程中控制喷镀电流与真空度,以及在喷镀前精选喷镀源,并在仪器准备阶段注重真空系统良好的清洁和维护等多种手段,制备出了质量良好的冷冻蚀刻复型膜。结果:制备出的复型膜在电镜下显示的蛋白颗粒图像清晰可辨,反差良好。部分改善了图像质量,收到良好的效果。结论:采用精心烧制并优选喷镀源,在冷冻蚀刻实验过程中注重喷镀电流与真空度的配合,结合改进实验器材的准备工作等方法,可提高膜蛋白颗粒冷冻蚀刻图像的质量,制备出边界清晰,背景杂质较少,易于识别的蛋白颗粒复型膜。