新疆多源喹诺酮类耐药大肠杆菌耐药基因检测及分析

【目的】了解新疆不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌携带质粒介导的喹诺酮耐药因子(plasmid mediated quinolone resistance,PMQR)的流行现状,及其与主要的β-内酰胺酶基因和16S rRNA甲基化酶基因的共存情况。【方法】通过PCR方法对猪源(79株)、牛源(8株)和羊源(96株)喹诺酮类(环丙沙星,诺氟沙星和恩诺沙星)耐药大肠杆菌进行PMQR(qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,qnrS,qepA,oqxA,oqxB,aac(6’)-Ib-cr)、β-内酰胺酶基因(blaTEM,blaCTX-M,blaSHV,blaKPC,blaCMY-2,blaLAP-1)及16S rRNA(armA,rmtB)等基因检测,对目的条带进行DNA测序,确定阳性菌株,对检出携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA甲基化酶基因的大肠杆菌进行β-内酰胺类及氨基糖苷类药敏试验,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。【结果】猪源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(5/79,6.33%),oqxA(35/79,44.30%),oqxB(40/79,50.60%)和aac(6’)-Ib-cr(4/79,5.06%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(79/79,100%),检出的16S rRNA基因为rmtB(3/79,3.80%);牛源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(1/8,12.50%),oqxA(1/8,12.50%),oqxB(1/8,12.50%)和aac(6’)-Ib-cr(1/8,12.50%)和qepA(1/8,12.50%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(8/8,100%)和blaSHV(1/8,12.50%);羊源大肠杆菌中检出的PMQR因子为qnrS(6/96,6.25%),oqxA(32/96,33.3%),oqxB(37/96,38.5%)和aac(6’)-Ib-cr(22/96,22.91%),检出的β-内酰胺酶基因为blaTEM(96/96,100%)和blaCTX-M(2/96,2.08%),检出的16S rRNA基因为rmtB(2/96,2.08%);未检出qnrA,qnrB,qnrC,qnrD,blaKPC,blaCMY-2和blaLAP-1被检基因。不同动物源大肠杆菌中存在基因共存现象,携带β-内酰胺酶基因和16S rRNA甲基化酶基因的喹诺酮类耐药大肠杆菌对β-内酰胺类和氨基糖苷类药物耐药呈一定的相关性。【结论】不同动物源喹诺酮类耐药大肠杆菌中存在PMQR因子,可与主要的β-内酰胺酶和/或16S rRNA甲基化酶基因共存。此外,首次在羊源大肠杆菌中检出PMQR因子、β-内酰胺酶及16S rRNA甲基化酶基因。

鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药性分析和耐药基因检测

为研究江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类抗菌药物的耐药情况和耐药基因,分析其耐药表型与耐药基因的相关性,以K-B纸片扩散法对分离的20株鸡源大肠杆菌进行11种β-内酰胺类药物的敏感性分析,PCR法检测bla_(CTX-M-1)、bla_(CTX-M-2)、bla_(CTX-M-8)、bla_(CTX-M-9)、bla_(TEM)与bla_(SHV)等6种耐药基因携带情况。结果显示:20株鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药率较高,其中苯唑西林为100%,氨苄西林为75%,头孢呋辛为70%,对头孢哌酮、头孢曲松的耐药率最低,均为30%,且分离菌株表现为多重耐药;共检出3种耐药基因,bla_(CTX-M-1)、bla_(TEM)、bla_(SHV),检出率分别为85%、30%、30%,7株分离菌同时携带2种及以上耐药基因,占比35%(7/20);11种β-内酰胺类药物与blaCTX-M-1基因的符合率较高,均达85%以上,与bla_(SHV)基因的符合率相对低些,均在40%以下,且耐药表型与耐药基因型并不完全吻合。提示:江苏部分地区鸡源大肠杆菌对β-内酰胺类药物的耐药问题比较严重,应加强当地鸡源大肠杆菌的耐药性监测,从而选择合适的药物防治鸡大肠杆菌病。

1993-2008年禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物耐药性分析

目的了解上世纪90年代以来我国部分地区禽源大肠杆菌和沙门菌分离株对1-4代喹诺酮类药物耐药情况。方法血清型采用常规的凝集试验进行测定;药敏纸片试验采用CLSI(clinical and laboratory standards institute)推荐的K-B药敏纸片法。结果344株禽源大肠杆菌分离株覆盖了27个血清型,其中O78、O2、O1和O18血清型菌株分别有141、47、27和22株,共237株,占定型菌株的68.90%;224株禽源沙门菌经血清型鉴定均为鸡白痢沙门菌。1993-1999年禽源大肠杆菌分离株仅对萘啶酸的耐药率超过60%(62.43%,113/181);2000-2008年禽源大肠杆菌分离株对1-3代9种喹诺酮类药物的耐药率均超过60%;禽源沙门菌从2000年起开始出现喹诺酮类耐药菌株,2000-2008年分离到的沙门菌对萘啶酸的耐药率达到了83.74%,但对其它喹诺酮类抗生素的耐药率相对较低。结论近20年来,我国禽源大肠杆菌和沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性不断上升,10种喹诺酮类药物之间存在着不同程度的交叉耐药性,且禽源大肠杆菌比沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性更为严重,交叉耐药情况亦更为复杂。

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在鸡源大肠杆菌中的流行

为了解河南省质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2005-2008年在河南省病鸡病料中分离保存的158株16SrRNA甲基化酶阳性鸡大肠杆菌进行PCR扩增。结果显示,在158株产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中,qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr的检出率分别为0.6%,2.5%,13.9%,2.5%和58.2%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南省产16S rRNA甲基化酶鸡源大肠杆菌中普遍存在,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。

耐氟喹诺酮类药物大肠杆菌基因突变耐药机制的研究

取临床分离的 4株耐药菌、实验室诱导培养获得的 3株耐药菌和 1株敏感菌 ,提取其染色体 DNA,PCR扩增 gy-r A和 par C基因片段 ,并将其克隆和测序。结果表明 ,无论是临床分离的还是实验室诱导的耐药菌 ,gyr A基因在其编码第 83位或第 87位氨基酸处均发生突变 ,par C基因在其编码第 80位或第 84位氨基酸处发生突变 ,而敏感菌 ES在2个基因位点上均未发生突变。其中 2株低度耐药菌株的 gyr A基因出现单一突变 ,使其编码的氨基酸发生改变 ,分别为 Ser83→ L eu或 Asp87→ Asn,但在 par C基因上却未发生突变 ;其余 5株高度耐药菌 gyr A基因突变导致氨基酸发生改变 :Ser83→ L eu(n=5 ) ,Asp87→ Asn(n=4 )和 Tyr(n=1) ,par C基因突变导致氨基酸改变 :Ser80→ Ile(n=4 )和Glu84→ L ys(n=1)。这 2个基因的突变均与文献报道的突变相同 ,表明 gyr A基因 Ser83和 Asp87突变以及 par C基因 Ser80和 Glu84突变可能与大肠杆菌的喹诺酮类药耐药机制有关 ,且低度耐药只在 gyr A基因上出现单一位点突变 ,当高度耐药时 ,才同时在 par

质粒介导的喹诺酮类耐药基因在猪源大肠杆菌中的检测

为了解河南地区质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnrA、qnrB、qnrS、qepA和aac(6′)-Ib-cr)在健康猪源大肠杆菌中的流行与分布,分别设计特异性引物对2009年在河南地区2个规模化猪场猪群的肛门拭子中分离保存的109株猪源大肠杆菌进行聚合酶链式反应扩增。检测结果显示,仅检测到qnrB、qnrS和aac(6′)-Ib-cr,检出率分别为2.8%、10.1%和24.8%。提示质粒介导的喹诺酮类耐药基因在河南地区健康猪源大肠杆菌中有一定的发生率,且以qnrS和aac(6′)-Ib-cr为主。质粒介导的喹诺酮类耐药基因的出现,可导致耐药基因的水平扩散,势必造成兽医临床用药的难度加大。

宠物源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的研究

【目的】对临床分离的宠物源大肠杆菌进行质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrD的检测,并对该基因进行序列分析和传播机制的研究。【方法】采用微量稀释法对阳性菌株进行15种抗生素的最小抑菌浓度试验;通过PCR对基因克隆,并对克隆产物和菌株阳性质粒进行转化;同时对菌株进行接合转移试验。【结果】从164株宠物源大肠杆菌中检测出1株qnrD阳性菌株(GP2009-036),GP2009-036对14种兽医临床常用抗生素耐药严重,表现为多重耐药(14耐);PCR产物经连接PMD19-T载体后可转化入DH5α感受态细胞中;接合转移试验成功地将质粒转移到大肠杆菌J53中;可从GP2009-036与其转化子中抽提出阳性质粒。【结论】该qnrD阳性菌株对临床常用抗生素耐药严重,且阳性质粒可在病原微生物间进行水平传播,其水平传播机制可能使该基因在宠物临床上进行传播。

鸡大肠杆菌O78对喹诺酮类药物高耐药株的分子鉴定

就临床分离的鸡大肠杆菌O 78对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(M IC)进行了测定,得到对喹诺酮类药物有不同耐药水平的细菌23株。根据G enB ank已公布的QRDR s序列,设计了分别扩增gyrA、gyrB、parC和parE基因的4对引物,以筛选的23株耐药菌DNA为模板,进行了PCR扩增。序列分析及A crA的W estern b lotting检测结果表明,临床分离的鸡大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药水平与G yrA和ParC的突变密切相关,而A crAB外输泵的表达水平无显著变化。提示临床分离的鸡大肠杆菌O 78的耐药水平与喹诺酮类药物的选择性压力有关,它诱导了DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的基因突变,可能不能激活A crAB外输泵。

大肠杆菌、金葡菌和铜绿假单胞菌对喹诺酮类药物的耐药性研究

目的 研究大肠埃希氏杆菌 (大肠杆菌 )、金黄色葡萄球菌 (金葡菌 )和铜绿假单胞菌分别暴露于喹诺酮类药物、染料、紫外线后耐药性产生情况及不同浓度喹诺酮类药物作用于这三种细菌后其生长和形态特征的改变。方法 采用琼脂平板表面涂菌和试管双倍稀释法。结果 引起细菌耐喹诺酮类药物的主要原因是低浓度喹诺酮药物反复作用于细菌后所致 ,未见到紫外线照射、染料物质作用后引起大肠杆菌、金葡菌和铜绿假单胞菌对喹诺酮类产生耐药性。细菌经不同浓度环丙沙星作用后 ,产生不同程度的数量减少和形态改变。结论 大肠杆菌最容易产生喹诺酮耐药性 ,在环丙沙星作用后最易发生形态和耐药性改变 。

贵州猪 鸡源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因调查

为调查贵州省动物源性大肠杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)流行情况,从贵州省5个地区147个规模养殖场采集猪肛门拭子、鸡泄殖腔拭子2469份,分离得到1 928株大肠杆菌,应用PCR方法和基因测序检测大肠杆菌qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA和aae(6′)Ib-c,基因的携带情况。结果表明,6种PMQR基因的总检测率为60.72%,qnrA、qnrB、qnrS、qnrD、qepA及aac(6′)Ib-cr的检出率分别为9.54%(184/1928)、12.03%(232/1928)、22.04%(425/1928)、4.36%(84/1928)、3.42%(66/1928)和30.65%(591/1928),且细菌同时携带多个基因的情况严重。

大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制研究现状

大肠杆菌是典型的革兰氏阴性杆菌 ,其耐药谱广 ,耐药机制复杂 ,是国内外耐药性研究较为详细的细菌。大肠杆菌对氟喹诺酮药物的耐药性问题是当前国内外研究的热点。本文就大肠杆菌与氟喹诺酮耐药性有关的 gyrA、gyrB、parC、parE点突变 ;多药外输泵 ;多重耐药基因 ;抗性质粒等方面的研究进展作一综述。

猪肠外致病性大肠杆菌对氟喹诺酮类耐药机制研究

肠外致病性大肠杆菌是一类定殖于肠道外组织并引起严重感染的大肠杆菌，临床上可引起人的泌尿系统感染、新生儿脑膜炎、败血症、肺炎、心内膜炎，家禽的腹膜炎、肉芽肿，猪的败血症、肺炎、脑膜炎。我国猪源肠外致病性大肠杆菌（ExPEC）在兽医临床上的分离率和对动物的危害逐年增加。国内外对猪源普通大肠杆菌耐药性及耐药机理的研究较多，

鸡源大肠杆菌喹诺酮类药物耐药基因的检测与分析

为了解湖北地区鸡源大肠杆菌喹诺酮类耐药基因（PMQR）的流行现状与耐药表型的相关性，采用纸片扩散法对2014～2015年分离的54株鸡源大肠杆菌临床分离株进行7种喹诺酮类药物体外敏感性测定，通过PCR检测qnrA、qnrB、qnrS基因，对基因检测阳性株进行I类整合子检测。结果：54株鸡源大肠杆菌对萘啶酸、依诺沙星、洛美沙星、培氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星、左旋氧氟沙星耐药率分别为72．2％、53．7％、53．7％、51．8％、50．0％、44．4％和22．2％；54株鸡源大肠杆菌中，10株（18．5％）检出qnrA基因，未检出qnrB、qnrS基因，且qnrA基因阳性株I类整合子为阳性。结果表明，湖北地区鸡源大肠杆菌对兽医临床常用的喹诺酮类药物耐药严重，且存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA的流行，而qnrA基因与I类整合子具有相关性，应加强监测。

不同地区鸡源大肠杆菌质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因调查

喹诺酮类药物是兽医临床治疗动物细菌性疾病一类常用抗菌药物,此类药物的广泛应用,使动物源大肠杆菌对其耐药性也随之逐渐上升[1]。细菌对喹诺酮类药物的耐药机制主要是染色体介导的靶位改变、膜通透性改变和主动外排。

中药消除大肠杆菌对氟喹诺酮类耐药性的作用研究

通过对重庆市部分养殖场分离到的120株致病性大肠杆菌进行了耐药谱的调查,并利用加有100μmol/l的黄连、丹参提取液的培养基进行感触培养,观察培养前后大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药谱的变化。试验结果显示,经两种不同中药提取液感触培养后,8耐以上的菌株从72.5%分别下降到61.7%和54.2%。表明中药可部分逆转致病性大肠杆菌对氟喹诺酮类药物的耐药性。

大肠杆菌耐喹诺酮类药物机制研究进展

综述了大肠杆菌耐喹诺酮类抗菌药物的基因机制，可为大肠杆菌耐喹诺酮类抗菌药物药研究提供参考。

耐氟喹诺酮类药大肠杆菌gyrA和parC基因的突变研究

从患有典型大肠杆菌病畜的心、血、肝等病料中分离大肠杆菌,并对其进行生化鉴定.按常规的试管二倍稀释法测定几种兽用氟喹诺酮类药(恩诺沙星、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、麻保沙星)的最小抑菌浓度(MIC),筛选出4株临床耐药菌株(其中猪源1株,鸡1株,犬1株,猫1株).同时,用亚MIC连续递增式传代培养法获得对恩诺沙星稳定的高度和低度耐药禽大肠杆菌(MIC为64μg/ml和1μg/ml)以及高度耐药的猫大肠杆菌(MIC提高至8μg/ml).

牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测分析

为研究近年来新疆地区牛源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的分布及其对喹诺酮类抗生素的耐药情况,本研究于2016-2018年从新疆石河子、沙湾、奎屯、玛纳斯和伊犁5个地区12个规模化奶牛场分离出116株牛源大肠杆菌,药敏试验检测其耐药性,同时利用PCR扩增PMQR耐药基因。药敏试验结果显示,62.93%的菌株对氨苄西林耐药,耐药率最高。对链霉素、四环素、卡那霉素和恩诺沙星的耐药率依次为56.90%、54.31%、43.10%和42.24%。对头孢他啶和头孢噻肟的耐药率较低,分别为7.76%和11.21%。分离菌主要携带qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种耐药基因;116株大肠杆菌中有31株携带PMQR的耐药基因,检出阳性率为26.72%,其中26株仅携带1种PMQR耐药基因,占所有菌株的22.41%,4株携带2种PMQR耐药基因,占所有菌株的3.45%,1株携带3种PMQR耐药基因,占所有菌株的0.86%。综上所述,新疆地区牛源大肠杆菌质粒介导喹诺酮类药物基因主要为qnrA、qnrS和aac(6′)-Ⅰb-cr 3种,且对恩诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星均产生不同程度的耐药性。

2012-2013年山东省禽源大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药基因的检测

为研究近年来山东省禽源致病性大肠杆菌中质粒介导喹诺酮类药物耐药（plasmid-mediated quinolone resistance， PMQR）基因的基因型分布，及其对喹诺酮类抗生素的耐药性的影响，分别采用针对qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、oqxA、oqxB与qepA 8个耐药基因的通用引物，对93株2012-2013年分离自山东省的禽源大肠杆菌进行PCR检测，并对其进行了5种喹诺酮类药物的药敏试验。结果表明山东省禽源大肠杆菌对5种喹诺酮类抗生素均产生了较高耐药性（50.54%-86.30%）；PMQR基因携带率达到60.21%（56/93），其中26.88%（25/93）的菌株携带2种PMQR基因，1.07%（1/93）的菌株携带3种PMQR基因；qnrA、qnrB、qnrC、qnrD与qepA基因未被检测到，qnrS、oqxA和oqxB基因在山东省禽源致病性大肠杆菌中分布较为广泛，其检出率依次为22.58%（21/93）、40.86%（38/93）和24.73%（23/93）。