牛源无乳链球菌对喹诺酮耐药的基因特征

采用微量肉汤稀释法测定左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星3种喹诺酮类药物对110株奶牛隐性乳腺炎无乳链球菌(分离自中国10省区21个规模化奶牛养殖场)的最小抑菌浓度(MIC),通过PCR检测gyrA、gyrB、parC和parE基因的喹诺酮耐药决定区(QRDR),并分析其突变位点.结果表明:110株牛源无乳链球菌对左氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为85.5%、98.2%、94.5%;左氧氟沙星耐药菌株对其他2种喹诺酮类药物耐药,且均发生了QRDR基因突变,氨基酸突变位点有GyrA的Ser81Leu、Glu85Lys,ParC的Ser79Phe、Asp83Tyr,ParE的Asp437Asn,其中,耐药菌基因最主要的突变类型是GyrA(Ser81Leu)+ParE(Asp437Asn),该突变类型对喹诺酮类药物呈中高度耐药;ParC的Ser79Phe或Asp83Tyr突变类型对喹诺酮类药物的敏感性下降,ParC的Ser79Phe突变与GyrA的Ser81Leu或Glu85Lys突变联合时,对喹诺酮类药物高度耐药.本研究结果对兽医临床上喹诺酮类药物的耐药控制及合理使用提供了一些依据.

PMQR与耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌喹诺酮耐药机制的关系

目的 分析质粒介导的喹诺酮耐药基因(PMQR)在耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)中的分布,探讨喹诺酮类药物的耐药机制。方法 收集2021年7月至2022年9月该院临床分离非重复的43株CRE菌株,采用全自动微生物分析系统进行菌株鉴定和药敏试验,聚合酶链反应(PCR)技术检测PMQR、碳青霉烯酶和β内酰胺酶耐药基因,进行CRE菌株的喹诺酮耐药机制分析。结果 31株耐碳青霉烯类大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药率为93.55%~96.77%。12株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌对喹诺酮类药物的耐药率为66.67%~83.33%。43株CRE对β内酰胺酶阻滞剂类药物的耐药率均在79.07%~100.00%;对多黏菌素和替加环素100.00%敏感。对氨基糖苷类的阿米卡星和妥布霉素耐药率较低。43株CRE中,88.37%携带有1个或2个PMQR,其中acc(6′)Ib-cr检出率为83.72%,qnrS检出率为69.77%,qnrB检出率为2.33%,没有检测到qnrA和qepA。碳青霉烯酶耐药基因以NDM(88.97%)和KPC(32.56%)为主。β内酰胺酶耐药基因以SHV(83.23%)和CTX-M15(67.57%)为主。结论 PMQR在CRE菌株中的检出率很高,与CRE的喹诺酮类药物耐药机制有关,可能与NDM、KPC、CTX-M15共同作用导致多药耐药。

1株携带质粒介导喹诺酮耐药基因qnrS1和qepA1的多耐药沙门菌的基因特点分析

目的分析一株多重耐药沙门菌SM846的遗传背景,研究其对喹诺酮耐药的机制。方法测定SM846对14种药物的最小抑菌浓度(minimal inhibitoryconcentration,MIC)。用三代测序技术对菌株进行全基因组测序,根据耐药数据库注释SM846序列中的耐药基因。使用NCBI的BLAST工具搜索与耐药质粒相似的序列,并进行生物信息学分析。结果SM846对14种测试抗生素中的12种表现出耐药,包括喹诺酮类抗生素萘啶酸和环丙沙星。SM846包含1条染色体和1条质粒。染色体序列不含可导致耐药的基因和突变,质粒携带13个耐药基因,包括喹诺酮类耐药基因qepA1和qnrS1。qepA1和qnrS1位于质粒内部的可移动原件I类整合子上。13条相似质粒的分析表明中国分离的此型别的质粒耐药性强于美国和加拿大分离的。结论QnrS1和qepA1基因通过IS6和可移动元件整合到质粒的I类整合子上,说明SM846可能迫于抗生素压力通过获得耐药基因来快速适应环境。中国分离菌株的耐药性强,地区间的耐药情况差异,尤其是与不发达国家之间的差异提示我们应当继续监测各地区的耐药表现型,以制定本地的耐药控制策略。

大肠埃希菌耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因分布

目的调查大肠埃希菌分离株的耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因流行状况。方法纸片扩散（K-B）法进行药物敏感试验,采用双纸片法检测产超广谱β内酰胺酶（ESBL）,聚合酶链反应（PCR）检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac（6＇）-Ib、qep A基因,限制性酶切反应确定aac（6＇）-Ib-cr基因型。结果 179株大肠埃希菌中95株ESBL表型确证试验阳性,检出率为53.1%;产ESBL菌株未见对美罗培南耐药,对亚胺培南耐药率极低（1.1%）,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦耐药率皆低于30%,对哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率皆高于70%,对庆大霉素、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率在60%~70%;PCR扩增结果显示产ESBL菌株,具有qnr基因9株（9.5%）,其中qnr A 2株、qnr B 5株、qnr S 2株。非产ESBL菌株,具有qnr B基因3株（3.6%）;酶切反应显示产和非产ESBL菌株具有aac（6＇）-Ib-cr基因分别为21株（22.1%）和5株（6.0%）。所有菌株皆未检测到qep A基因。结论产ESBL大肠埃希菌呈现多重耐药趋势,质粒介导喹诺酮耐药基因以aac（6＇）-Ib-cr基因型为主。

南京地区肺炎链球菌的耐药变迁及喹诺酮耐药机制研究

目的了解南京地区肺炎链球菌临床分离株的耐药性变迁及对喹诺酮类的耐药机制。方法收集2010—2012年南京7所教学医院共147株肺炎链球菌,琼脂稀释法测定9种抗菌药物的MIC,与南京2006—2007年分离的肺炎链球菌耐药情况进行比较。并对氟喹诺酮耐药株的gyrA、gyrB、parE和parC基因喹喏酮耐药决定区域(QRDR)进行PCR扩增及测序。结果 147株肺炎链球菌中,对红霉素的耐药率为89.1%;青霉素不敏感肺炎链球菌(MIC≥4 mg/L)占3.4%;对头孢呋辛、头孢曲松、美罗培南、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率分别为26.5%、1.4%、3.4%、1.4%、0.7%;所有分离株对万古霉素、利奈唑胺敏感。与2006—2007年分离株相比,2010—2012年临床分离株对青霉素、头孢呋辛耐药率下降,对红霉素、头孢曲松耐药率变化不大,出现了少数左氧氟沙星及莫西沙星耐药株。对喹诺酮耐药株进行基因测序发现1菌株有gyrA突变(Asn167—Ile)和ParE突变(Ile 460—Val);另1菌株则有ParC突变(Ser 81—Gly;Asn 94—Asp)。结论南京地区肺炎链球菌对红霉素耐药率居高不下,对青霉素仍较敏感,出现了少数莫西沙星、左氧氟沙星耐药株。喹诺酮耐药株有gyrA、parE和parC的QRDR突变。

上海地区肺炎链球菌对氟喹诺酮类的敏感性及其喹诺酮耐药决定区突变研究

目的了解上海地区临床分离肺炎链球菌对氟喹诺酮类等抗菌药物的敏感性，并对氟喹诺酮类敏感菌株的喹诺酮耐药决定区（QRDR）突变进行初步研究。方法收集上海地区部分医院2004-2005年共176株肺炎链球菌临床分离株，用琼脂稀释法测定环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星和莫西沙星等15种抗菌药物的抗菌活性，并选取部分左氧氟沙星敏感肺炎链球菌菌株进行QRDRPCR扩增、测序。结果176株受试菌株中．PSSP、PISP和PRSP各占48．9％、47．1％和4．0％，受试菌株对环丙沙星、左氧氟沙星、加替沙星和莫西沙星敏感率均为100％。QRDR的扩增测序结果发现，20株左氧氟沙星MIC1～2mg／L的敏感菌株中，19株的parC、parE基因上已存在不同程度的氨基酸突变．包括ParC：Phe 105→Leu／Asp136→Tyr，Pare：Asp435→AsnjIle460→ValjAsn477→Lys．而在gyrA、gyrB基因上仅发现点突变，未导致相关氨基酸突变。结论上海地区未发现氟喹诺酮类耐药肺炎链球菌临床分离株，但左氧氟沙星MIC1～2mg／L的敏感株中已发现QRDR一级突变现象，突变的基因位点均见于parC、pare基因。

鲍曼不动杆菌质粒介导喹诺酮耐药机制研究

目的调查临床分离的鲍曼不动杆菌中质粒介导喹诺酮耐药(PMQR)基因及超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因的分布情况,并对PMQR阳性菌株中染色体介导的喹诺酮耐药机制进行分析。方法采用琼脂二倍稀释法测定菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性;PCR检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6’)-Ib-cr和qep A,对PMQR阳性菌株扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaPER,同时扩增测序分析染色体基因gyr A、gyr B、par C和par E的突变情况;接合转移试验验证PMQR与bla基因的转移性。结果 91株鲍曼不动杆菌中有2株携带qnr B4基因。2株PMQR阳性菌株均接合转移成功,qnr B4和blaCTX-M-14、blaSHV-12基因可以通过质粒共同转移。PMQR阳性菌株均在Gyr A亚基和Par C亚基存在氨基酸突变,其相应的接合子以及受体菌均未发现突变。结论临床分离的鲍曼不动杆菌中存在qnr B基因,qnr与bla基因能共同转移,造成多重耐药的传播。

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌(福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株)进行耐药性检测,聚合酶链反应(PCR)检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%(9/100),福氏志贺菌为4%(2/50),宋内志贺菌为14%(7/50);qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率(11.1%)高于阴性菌株(5.5%),但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。

阴沟肠杆菌喹诺酮耐药基因的检测

目的调查阴沟肠杆菌中喹诺酮耐药基因(qnr)的携带状况,为临床治疗提供依据。方法使用VITEK-AMS鉴定病原菌;qnr与超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)耐药基因型检测采用聚合酶链反应(PCR)扩增技术;耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据CLSI指南进行药敏试验。结果55株阴沟肠杆菌中,23.6%qnr基因检测阳性,其中46.2%的qnr基因阳性菌株对环丙沙星敏感,qnr基因阴性菌株的敏感率为83.3%;38.2%的产ESBLs菌株qnr基因检测阳性,2株qnr基因阳性菌株接合试验成功。结论产ESBLs阴沟肠杆菌中常同时携带qnr基因,qnr基因可以进行菌株间的水平传递。

中国氟喹诺酮耐药结核分枝杆菌gyr基因序列特征分析

目的明晰我国氟喹诺酮类药物耐药结核分枝杆菌株gyrA、gyrB基因突变的分子特征。方法以检索式"quinolones resistance AND Mycobacterium tuberculosis AND(China OR Hong Kong OR Tai Wan OR Macon)"和"结核AND喹诺酮耐药"分别在英文数据库(pubmed、Embase、SciFinder)和中文数据库(万方、中国知网、中国生物医学文献服务系统与维普期刊资源服务平台)中检索有关我国结核分枝杆菌喹诺酮类药物耐药基因突变的研究文献,对符合纳入标准的文献中氟喹诺酮耐药基因gyrA、gyrB进行突变位点和氨基酸变化类型等计数资料的信息提取和分析。结果 32篇外文和23篇中文文献纳入研究,3 641株氟喹诺酮类耐药结核分枝杆菌的gyrA基因得到分析,其中1 958株同时分析了gyrB基因。3 641株耐药菌中,2 830株检测到gyrA基因突变(突变率为77.73%),共47种突变类型,均为氨基酸错义突变,其中单位点、双位点突变的发生率分别为75.83%和1.92%,94、90、91位密码子突变率分别为49.33%(1 796/3 641)、19.14%(697/3 641)、5.80%(211/3 641),出现频率最高的突变类型依次为Asp94Gly、Ala90Val、Asp94Ala、Asp94Asn、Ser91Pro、Asp94Try;1 958株耐药菌中,175株发生gyrB基因突变(突变率为8.94%),其中56株的29个突变类型为gyrB单基因突变,其余119株36种突变类型与gyrA基因突变共同发生,占gyrB序列突变的68%。结论我国结核分枝杆菌氟喹诺酮耐药株gyrA基因突变以94、90、91位密码子单位点突变为主;gyrB基因突变位点较为分散,常与gyrA基因突变伴随发生。

一株福氏志贺菌中同时检出CTX-M-3型超广谱β-内酰胺酶和质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrS

目的明确1株福氏志贺菌RJ506对第3代头孢菌素和氟喹诺酮同时耐药的分子机制。方法通过E-test检测RJ506对各抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC),接合试验了解耐药性是否由质粒介导;用聚合酶链反应(PCR)分别扩增染色体和质粒介导的喹诺酮耐药基因并进行序列分析,检测染色体介导耐药的突变位点和质粒介导耐药的基因型;用PCR扩增CTX-M各组超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因并进行序列分析,检测ESBLs的基因型。结果RJ506对头孢噻肟和环丙沙星同时耐药,其染色体DNA旋转酶gyrA亚基的83位发现Ser→Leu突变,而gyrB和parC未见突变;该菌株同时含有ESBLs基因blaCTX-M-3和喹诺酮耐药基因qnrS,且分别位于不同的可接合质粒上。结论本实验在国内的志贺菌中检出质粒介导的喹诺酮耐药基因qnrS和CTX-M-3型ESBLs。

临床分离铜绿假单胞菌质粒介导的喹诺酮耐药机制研究

目的了解临床分离的铜绿假单胞菌中PMQR基因及ESBLs的分布情况,并对PMQR阳性菌株中染色体介导的喹诺酮耐药机制进行分析。方法采用琼脂稀释法测定菌株对环丙沙星和左氧氟沙星的药物敏感性;PCR检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac(6’)-Ib-cr和qep A,对PMQR阳性菌株扩增blaTEM、blaSHV、blaCTX-M和blaPER,同时扩增测序分析染色体基因gyr A、gyr B、par C和par E的突变情况;接合转移试验验证PMQR与bla基因的转移性。结果 106株铜绿假单胞菌中,2株携带qnr S,1株携带qnr D,2株携带aac(6’)-Ib-cr。4株PMQR阳性菌株中有2株接合转移成功,qnr S1和blaTEM-1基因可以通过质粒共同转移。PMQR阳性菌株均在Gyr A亚基和/或Par C亚基存在氨基酸突变,其相应的接合子以及受体菌均未发现突变。结论临床分离的铜绿假单胞菌中存在qnr S、qnr D和aac(6’)-Ib-cr基因,PMQR与bla基因能共同转移,造成多重耐药的传播。

变形杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测

目的了解临床分离的变形杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr基因)存在情况。方法用PCR检测对146株变形杆菌的qnr基因。药敏试验用M-H肉汤微量稀释法。结果146株变形杆菌中有3株检出qnr基因:分别为qnrA、qnrB2、qnrS1,其中有1株同时携带qnrB2和qnrS1。qnrB2在第259位碱基发生C→A(精氨酸→丝氨酸)突变,3种qnr基因序列已在基因库注册,授权号:EF488761,EF488762,EF501989。3株qnr基因阳性株中2株为产ESBLs菌株。结论qnr基因在变形杆菌中的携带率较低。

尿道感染大肠埃希菌对喹诺酮耐药性及相关因素分析

目的探讨尿道感染(urinary tract infection,UIT)大肠埃希菌对喹诺酮耐药性及其相关因素。方法对我院2010—2011年749例UIT尿液标本中分离的705株大肠埃希菌的耐药性进行检测,以对喹诺酮敏感与否分为耐药株组和敏感株组,分析耐药株感染的相关因素。结果 705株大肠埃希菌中对喹诺酮耐药474株(67.2%)(耐药株组),敏感231株(32.8%)(敏感株组),未见碳青霉烯耐药株。耐药株组对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林、阿米卡星、复方新诺明、庆大霉素、头孢吡肟的耐药率与敏感组比较差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic回归分析显示女性患者、三代头孢及喹诺酮类药物使用、尿路引流和细菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)是喹诺酮耐药株出现的独立危险因素。两组在住院时间和住院费用方面比较差异亦有统计学意义(P<0.05)。结论 UIT大肠埃希菌中喹诺酮耐药株的检出率高,耐药株的出现与抗生素应用及侵入性操作、细菌变异等有关,加强对危险因素的控制有助于预防和控制感染。

小肠结肠炎耶尔森菌O:3血清型喹诺酮耐药的分子机制研究

目的研究中国部分地区小肠结肠炎耶尔森菌菌株的耐药特征,为小肠结肠炎耶尔森菌感染的预防控制工作提供依据。方法自2002年至2007年,选择几个省市在不同季节对腹泻人群进行了该病原菌的分离,并对分离到的菌株进行血清学分型、生物学分型、药敏试验以及gyrA和parC基因突变检测。结果通过对该菌喹诺酮耐药决定区gyrA和parC基因的变异情况检测发现,在22株萘啶酸耐药的菌株中,有20株gyrA基因检出氨基酸变异,其中83位点共检出Ser(AGC)→Arg(AGA或AGG)突变12株,Ile(ATC)突变3株,Cys(TGC)1株,87位点检出Gly(GGC)突变2株,Tyr(TAC)和Asn(AAC)突变各1株;3株萘啶酸敏感O∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌未检出上述氨基酸位点突变,而parC基因无论耐药株或敏感株均未检出突变。结论我国小肠结肠炎耶尔森菌对萘啶酸的耐药比较严重,这可能是因为氟喹诺酮类抗生素是临床最常用药物之一,而高水平用药,用药时间过长,以及动物饲料中抗生素的使用可能是小肠结肠炎耶尔森菌对喹诺酮类抗生素耐药的根本原因。氟喹诺酮的过度应用使萘啶酸耐药株选择性形成。

质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株中超广谱β-内酰胺酶的研究进展

质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因是近年来新发现的细菌耐药机制,研究发现PMQR阳性菌株也往往对大部分β-内酰胺类抗菌药物耐药而表现为多药耐药,最主要的原因是该类细菌产生了能分解绝大多数β-内酰胺类药物的超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)。PMQR基因阳性菌株中ESBLs的发生率和主要型别在世界各地的报道各不相同,现就质粒介导喹诺酮耐药基因阳性菌株中超广谱β-内酰胺酶的基本进展进行综述。

多重耐药菌中质粒介导喹诺酮耐药基因的检测和分析

目的分析广州医学院第一附属医院临床分离的60株多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮耐药基因存在状况。方法采用VITEK-2全自动细菌鉴定仪检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对抗生素的药物敏感性，选择多重耐药的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌作为研究对象，用多重PCR法进行质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测和分析。结果检测出耐药基因qnrA型2株，qnrB型耐药基因15株，aac（6’）-Ib基因9株，其中aac（6’）-Ib—cr型耐药基因5株。其中有1株肺炎克雷伯菌检测到同时含有qnrA和aac（6’）-Ib—cr基因；还有3株肺炎克雷伯菌检测到同时含有qnrB和aac（6’）-Ib—cr基因。未检测到qnrC、qnrD、qnrS、qepA型的耐药基因。结论临床分离的多重耐药大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌含有多种质粒介导的喹诺酮耐药基因，应引起临床的重视。

环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌喹诺酮耐药决定区基因突变分布特征

目的比较研究环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌的喹诺酮耐药决定区(QRDR)的基因突变分布特征。方法对临床分离甲型副伤寒沙门菌QRDR基因进行扩增和测序分析,比较环丙沙星敏感性降低菌株与环丙沙星敏感菌株QRDR基因突变点差异。结果环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌QRDR基因存在较明显的突变特征,其中gyrA的Ser83及parC的Thr57位点突变占主导(分别占78.3%和91.3%),Ser83位点突变率与敏感株相比存在明显差异。结论喹诺酮耐药决定区的基因突变可能是导致甲型副伤寒沙门菌对环丙沙星敏感性降低的原因之一。

新质粒介导喹诺酮耐药基因qnrB24的基因分析

目的 对新的质粒介导喹诺酮耐药基因（qnrB24）进行相关研究和分析。方法 对新发现的qnrB24基因阳性菌株进行转移接合实验,了解qnrB24对喹诺酮类药物的耐药性,碱裂解法提取接合子质粒,Southern blot明确质粒大小。采用热不对称交错聚合酶链反应（PCR）技术研究基因5′端以及3′端未知侧翼碱基序列。结果 这个突变基因命名为qnrB24（Genbank登录号HM192542）。药敏试验结果显示携带qnrB24基因接合子对环丙沙星的最小抑菌浓度（MIC）值为0.125μg/mL,左氧氟沙星MIC值为0.190μg/mL。接合子对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较大肠杆菌J53受体菌下降约8~11倍,接合子耐药水平低于临床分离菌株。Southern杂交显示该基因位于约60.0Kb质粒上。热不对称交错PCR结果显示,qnrB24基因5′端为假定的转座酶。结论 qnrB24通过质粒介导引起细菌对喹诺酮类药物的耐药性上升,容易发展成高水平耐药,因此需要监测其在细菌中的流行性。