利用膜片钳技术对小鼠嗅感觉神经细胞电生理学的初步研究

目的利用全细胞膜片钳技术初步探讨小鼠嗅感觉神经细胞的电生理学特性。方法取生后7～14d的昆明小鼠的嗅黏膜，用胰蛋白酶消化组织，获取单个嗅感觉神经细胞，并用全细胞膜片钳技术对急性分离的嗅感觉神经细胞的离子通道进行记录和分析。结果急性分离的小鼠嗅感觉神经细胞的功能状态良好，在膜片钳记录过程中细胞与记录电极之间能形成高阻封接，并可记录到电压门控性的内外向电流。内向电流具有快速激活和失活的特性，并可被0．1μmol／L河豚毒（TTX）完全阻断，说明内向电流主要由Na^＋介导；外向电流包含有瞬时成分和持续成分，并可被CsCl完全阻断，说明外向电流主要由K^＋介导。结论急性酶分离的小鼠嗅感觉神经细胞的电生理学特性的初步研究，为嗅觉传导机制和药理学的研究提供依据和指导。

嗅感觉神经细胞的分离与培养

目的 建立哺乳动物嗅感觉神经细胞体外培养的方法。方法取成年家兔的嗅区粘膜,用胰酶和胶原酶消化法进行嗅感觉神经细胞的分离与原代培养,并应用抗神经微丝蛋白(NFP)抗体、抗嗅觉标记蛋白(OMP)抗体进行免疫细胞化学染色,同时采用甲苯胺蓝神经特异性染色和扫描电镜对其进行鉴定。结果 从嗅粘膜分离以及原代培养得到的嗅感觉神经元,光镜、电镜下为典型的双极神经元,OMP、NFP阳性,神经元特异性染色阳性。分离的嗅感觉神经元可在体外存活数小时,其细胞形态、生存数量和存活时间均能满足体外实验的基本要求。结论 本实验在家兔建立了较稳定、可靠的嗅感觉神经细胞分离和原代培养方法。为深入开展嗅感觉神经细胞的离体研究,提供了较为理想的材料来源和技术保障。

小鼠嗅感觉神经细胞的急性分离

目的建立一种急性分离小鼠嗅感觉神经细胞的方法。方法利用酶消化结合机械吹打方法,急性分离昆明小鼠嗅粘膜的嗅感觉神经细胞。结果本实验方法能分离出具有正常形态特征的嗅感觉神经细胞,细胞在体外可以存活5小时左右,可用于膜片钳等实验研究。结论本研究建立了一种快速、可靠、简便易行的急性分离成年小鼠嗅感觉神经细胞的方法,此法不损伤细胞膜的电生理学特性。

嗅觉通路神经干细胞研究进展

干细胞是能自我更新增殖和分化的细胞,能够产生表现型与基因型和自身相同的子细胞,同时还能分化为祖细胞。神经干细胞指来自神经系统并可以经过自我更新或者不对称分裂,产生除自身以外的其它细胞,可向特定类型的神经元或星形胶质细胞和少突胶质细胞分化[1]。研究发现,从发育中甚至成年中枢神经系统组织中,可以分离出具有多潜能干细胞,并能在体外培养成永生的神经祖细胞系,这有望成为合适的体外转基因载体之一,为中枢神经系统先天性、创伤性和退行性疾病的治疗提供新策略。