早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含突触外GABA_A受体δ亚基的影响

目的探讨早期嗅觉剥夺对SD大鼠海马齿状回及其所含GABAA受体δ亚基表达的影响。方法将3日龄与8日龄SD乳鼠各36只均随机分为空白对照组、实验组、假手术组,共6组。其中通过三氯甲烷滴注法对实验组乳鼠的嗅粘膜进行破坏;假手术组用生理盐水替代;空白对照组不给予任何处理。各组在4周龄时断头取脑组织进行尼氏染色观察;免疫组织化学相对定量分析海马齿状回中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白的表达;实时荧光定量核酸扩增(q-Pcr)定量分析海马中突触外GABAA受体δ亚基mRNA的表达。结果尼氏染色显示3d实验组乳鼠海马齿状回神经元细胞排列紊乱,细胞间距加大,胞质内尼氏体减少,齿状回颗粒细胞边界不齐、间距增宽、排列松散紊乱。3d实验组乳鼠与8d组比较,海马齿状回神经元数目差异均无统计学意义(P>0.05)。而3d实验组乳鼠中海马齿状回突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白和mRNA的表达均下降,分别与3d假手术组和空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在8d实验组、8d假手术组和空白对照组之间结果进行两两比较中,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 3d实验组SD鼠海马中突触外GABAA受体δ亚基相关蛋白及mRNA表达显著减少,表明早期嗅觉剥夺对海马齿状回及其所含突触外GABAA受体δ亚基表达的降低有影响。

嗅觉剥夺对小鼠大脑桶状皮层谷氨酸能神经元动作电位及Ankyrin-G表达的影响

目的探讨嗅觉剥夺触觉功能上调小鼠模型大脑桶状皮层谷氨酸能神经元动作电位及Ankyrin-G表达变化的相关性。方法12 d龄雄性小鼠40只予氯仿40μL滴入小鼠一侧鼻腔,破坏小鼠一侧嗅觉,复制嗅觉剥夺小鼠模型。实验分为2组,对照组和嗅觉剥夺组。其中嗅觉剥夺模型小鼠的嗅觉剥夺侧脑区为嗅觉剥夺组,对侧脑区为对照组。行为学实验检测嗅觉剥夺对小鼠触觉,即触须功能的影响,如小鼠触须功能增强表明模型建立成功。模型建立成功后,膜片钳电生理记录小鼠大脑桶状皮层谷氨酸能神经元动作电位发放及免疫组织化学法测量其轴突近端Ankyrin-G表达的变化。结果与对照组相比,嗅觉剥夺组小鼠谷氨酸能神经元动作电位发放表现为峰间距缩短和绝对不应期降低(P<0.01),桶状皮层谷氨酸能神经元轴突近端Ankyrin-G表达量增加(P<0.01)。结论嗅觉剥夺可诱导小鼠触觉功能上调,其发生发展机制可能与大脑桶状皮层谷氨酸能神经功能增强及Ankyrin-G表达增加有关,这可能是引发小鼠触觉敏感性增加的机制之一。

电烙铁损伤左侧外周鼻孔区构建单侧嗅觉剥夺模型:嗅球神经的发生和转化

背景:近年来嗅球的神经发生、转化以及成熟已成为研究热点,并且嗅觉经验和神经活动能影响嗅球神经发生,但是到目前为止关于嗅觉功能活动是否影响豚鼠嗅球的神经发生尚无报道。目的:观察单侧嗅觉功能剥夺对幼年豚鼠两侧嗅球微管聚合蛋白、维生素D依赖性钙结合蛋白和小白蛋白表达的影响。方法:将24只幼年豚鼠随机分成2组,通过电烙铁损伤左侧外周鼻孔区建立嗅觉功能剥夺模型,分别于建立嗅觉功能剥夺模型后3,6周灌注取材,应用免疫组织化学技术观察不同时间点豚鼠自身两侧嗅球微管聚合蛋白、小白蛋白和维生素D依赖性钙结合蛋白的表达情况。结果与结论:造模后3周组豚鼠嗅觉未剥夺侧嗅球表达的微管聚合蛋白、小白蛋白和维生素D依赖性钙结合蛋白数目明显高于嗅觉剥夺侧(P<0.05);造模后6周组豚鼠嗅觉未剥夺侧嗅球表达的微管聚合蛋白、小白蛋白和维生素D依赖性钙结合蛋白数目明显高于嗅觉剥夺侧(P<0.05)。提示豚鼠嗅觉功能活动影响神经发生和转化。

嗅觉剥夺对成年豚鼠梨状皮质NeuN和CB表达的影响

目的观察嗅觉功能剥夺后对成年豚鼠两侧梨状皮质神经元特异性核蛋白(NeuN)、维生素D依赖性钙结合蛋白(CB)表达的影响。方法将20只豚鼠随机分成两组,通过电烙铁损伤左侧外周鼻孔区建立嗅觉功能剥夺模型,饲养3周和6周之后灌注取材,采用尼氏染色与免疫组织化学技术观察各个时间点豚鼠自身两侧梨状皮质尼氏体、NeuN和CB的表达情况。结果 3周组与6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质尼氏体的密度、CB^+细胞密度均显著高于剥夺侧(P<0.05);3周组与6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质NeuN^+细胞密度低于剥夺侧,差异有统计学意义(P<0.05)。结论嗅觉功能活动对成年豚鼠梨状皮质神经元的表达有重要作用。

建立嗅觉剥夺模型观察嗅觉活动调节成年豚鼠梨状皮质神经元的表达

背景:动物实验和临床研究表明在大脑发育的早期进行功能剥夺可能会引起成年期神经和认知功能障碍,但是到目前为止关于嗅觉功能活动是否影响成年豚鼠梨状皮质的神经发生尚无报道。目的:建立嗅觉剥夺模型观察嗅觉经验对成年豚鼠两侧梨状皮质的微管聚合蛋白、小白蛋白、谷氨酸脱羧酶67以及微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白共表达的影响。方法:将20只成年豚鼠随机平分成2组,建立嗅觉剥夺模型饲养3周和6周之后灌注取材,应用免疫组织化学技术观察各个时间点豚鼠自身两侧梨状皮质微管相关蛋白、小白蛋白和谷氨酸脱羧酶67的分布,免疫荧光观察微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白的共表达。结果与结论:3周和6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质表达的微管相关蛋白、小白蛋白和谷氨酸脱羧酶67阳性细胞数目均明显多于嗅觉剥夺侧梨状皮质,两侧相比差异有显著性意义(P<0.05);3周组和6周组两侧梨状皮质微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白的共表达细胞差异无显著性意义(P>0.05)。提示嗅觉经验对成年豚鼠梨状皮质神经元的成熟及分化起着重要促进作用。

大鼠同性别社会交往引起主嗅觉系统相关脑区pERK1/2表达变化

目的:探讨大鼠同性别社会交往行为脑内pERK1/2的表达与可能作用。方法:采用三箱室社会交往箱检测雄性大鼠同性别社会交往行为,运用免疫组织化学染色观察动物10 min社会交往行为后脑内pERK1/2的表达;采用10%硫酸锌(ZnSO4)滴鼻嗅觉剥夺后观察大鼠同性别社会交往行为以及脑pERK1/2的表达状况。结果:大鼠呈现明显的同性别社会交往偏好;社会交往后,pERK1/2在与主嗅觉系统相关的脑区(如主嗅球、内嗅皮质、梨状皮质等)以及眶额皮质、前扣带皮质等脑区表达明显增加;嗅觉剥夺后大鼠的同性别社会交往行为显著减少,pERK1/2在主嗅觉系统相关脑区表达明显下降。结论:主嗅觉系统参与了雄性大鼠同性别社会交往行为,pERK1/2表达水平变化随着社会交往行为改变而改变,提示ERK1/2信号通路可能参与大鼠同性别社会交往行为。

嗅觉功能活动调节豚鼠海马未成熟神经元的发育

目的观察嗅觉功能活动对豚鼠两侧海马齿状回颗粒细胞下层(SGZ)未成熟神经元表达及发育的影响。方法通过电烙铁将2月龄(n=10)和1岁龄(n=10)雄性豚鼠左侧鼻腔内嗅粘膜损伤,然后堵住鼻孔以建立嗅觉剥夺模型。将每组豚鼠编排随机数字表,随机饲养4周(n=5)和8周(n=5)之后灌注取材,采用免疫组织化学技术观察2组豚鼠在2个时间点自身两侧SGZ区微管相关蛋白(doublecortin,DCX)的表达;运用免疫荧光双标染色观察SGZ区DCX+细胞转化为Neu N(成熟神经元标记物)的频率。结果 2月龄豚鼠嗅觉剥夺4周、8周后,1岁龄豚鼠嗅觉剥夺8周后,剥夺侧SGZ区DCX+细胞密度较自身非剥夺侧均显著下降;2月龄和1岁龄豚鼠嗅觉剥夺8周后,两组豚鼠嗅觉剥夺侧SGZ区DCX+细胞与Neu N+细胞共表达的频率显著低于自身未剥夺侧。结论正常的嗅觉功能活动对豚鼠海马未成熟神经元的表达及发育起调节作用。