中性粒细胞胞外陷阱在慢性阻塞性肺疾病中的作用

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)是一种以中性粒细胞浸润所致炎症为特征的呼吸道疾病,目前已成为全球第三大死亡原因。发生COPD后,中性粒细胞持续聚集可促进中性粒细胞胞外陷阱(neutrophil extracellular traps,NETs)过度形成,在局部捕获与清除病原体、快速控制感染、免疫调节等方面发挥重要作用。本文主要介绍COPD发生与NETs形成机制以及NETs在COPD中的作用研究进展,并梳理基于NETs进行COPD治疗的相关药物靶点,以期为进一步研究提供参考。

MTHFD2过表达通过糖酵解促进慢性阻塞性肺疾病的中性粒细胞胞外陷阱

目的 慢性阻塞性肺疾病(COPD)中亚甲基四氢叶酸脱氢酶2(MTHFD2)基因的表达水平对胞外陷阱(NET)的形成和糖酵解代谢的影响。方法 通过生物信息学探寻MTHFD2与糖酵解和中性粒细胞(NEU)标志物之间的相关性,随后利用Picogreen染色实验检测胞外DNA含量。免疫荧光染色检测中性粒细胞胞外陷阱(NET)相关标志物MPO和cit-H3的表达水平。qRT-PCR检测MTHFD2、糖酵解相关基因(HK1、PDK1、SLC2A1、MYC)的表达量。细胞分子实验分别检测NC中性粒细胞、过表达MTHFD2的中性粒细胞、过表达MTHFD2+糖酵解抑制剂(2-DG)的中性粒细胞中NET的形成水平以及葡萄糖和乳酸的含量。结果 MTHFD2在COPD患者组织高表达,与糖酵解通路相关基因、中性粒细胞标志物的表达呈正相关。免疫荧光染色和Sytox Green染色实验显示COPD中NET水平显著上调。细胞分子实验结果显示过表达MTHFE2可诱导HK1、PDK1、SLC2A1、MYC的表达,促进葡萄糖分解成乳酸,进而促进中性粒细胞NET形成。结论 本研究探讨了MTHFD2基因对中性粒细胞的NET形成和糖酵解代谢的影响,分析了MTHFD2通过糖酵解促进COPD患者NET形成的相关机制,为COPD患者的治疗提供新型潜在诊断标志物和治疗靶点。

乙型肝炎肝硬化并发门静脉血栓形成患者中性粒细胞胞外陷阱标志物变化

目的初步探讨乙型肝炎肝硬化并发门静脉血栓形成(PVT)患者血清中性粒细胞胞外陷阱(NETs)标志物变化。方法2018年9月~2022年10月我院诊治的乙型肝炎肝硬化患者55例,经医院HIS系统采集病例资料,使用超声检查诊断PVT。;采用ELISA法检测血清髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)和瓜氨酸组蛋白H3(CitH3)水平。结果经超声检查,本组发现PVT患者21例(38.2%);PVT组MELD评分、Child C级和脾切除术史占比分别为18.2(17.6,19.5)分、52.4%和42.9%,显著高于非PVT组【分别为13.2(9.3,16.8)分、14.7%和2.9%,差异显著(P<0.05);PVT组血清总胆红素、D-二聚体、中性粒细胞/淋巴细胞比率、MPO、NE和CitH3水平分别为25.6(21.6,36.0)μmol/L、1095.0(532.5,2202.5)ng/ml、2.3(1.9,4.2)、42.4(20.7,78.9)ng/ml、2468.2(1344.8,5620.6)ng/ml和79.2(44.8,126.2)ng/ml,均显著大于非PVT组【分别为18.9(16.5,28.3)μmol/L、390.0(280.0,680.0)ng/ml、1.9(1.2,2.6)、10.8(5.6,16.0)ng/ml、623.5(241.4,1006.3)ng/ml和28.8(10.4,39.6)ng/ml,P<0.05】,而血清白蛋白水平为(31.5±5.8)g/L,显著低于非PVT组【(35.4±5.8)g/L,P<0.05】。结论脾切除手术可能诱发乙型肝炎肝硬化患者发生PVT。术后,可能纠正了血细胞降低,但血清NETs标志物水平升高可能具有一定的提示作用,需要密切随访,以期早期发现和处理。

血清中性粒细胞胞外陷阱水平与短暂性脑缺血患者大脑中动脉粥样硬化斑块特征的关系及对近期脑卒中的预测研究

目的分析血清中性粒细胞胞外陷阱(NETs)水平与短暂性脑缺血患者大脑中动脉粥样硬化斑块特征的关系及对近期脑卒中的预测效能。方法回顾性选择自2021年1月至2023年7月咸阳市中心医院收治的120例短暂性脑缺血患者作为研究对象,随访6个月,根据患者是否发生脑卒中,将其分为脑卒中组(n=32)和非脑卒中组(n=88)。所有患者在入组时均检测血清NETs的标记物游离DNA(cf-DNA/NETs),对大脑中动脉开展三维高分辨磁共振成像检查,定量测量大脑中动脉粥样硬化斑块特征(大脑中动脉狭窄率、斑块负荷百分比、斑块面积、重构指数、偏心指数)。比较脑卒中组和非脑卒中组血清cf-DNA/NETs表达水平、大脑中动脉粥样硬化斑块特征;采用Pearson相关性分析对血清cf-DNA/NETs与大脑中动脉粥样硬化斑块特征的关系进行分析;使用多因素Logistic回归分析对影响短暂性脑缺血患者近期脑卒中的因素进行分析;通过受试者操作特征(ROC)曲线评价血清cf-DNA/NETs与大脑中动脉粥样硬化斑块特征对短暂性脑缺血患者近期脑卒中的预测效能。结果脑卒中组血清cf-DNA/NETs表达水平为(480.51±89.87)ng/mL,高于非脑卒中组[(158.72±41.26)ng/mL],脑卒中组大脑中动脉狭窄率、斑块负荷百分比、斑块面积、重构指数、偏心指数分别为(71.15±7.08)%、(29.56±7.67)%、(6.55±1.79)mm 2、0.95±0.19、0.80±0.27,均大于非脑卒中组[(65.23±5.43)%、(23.25±4.51)%、(5.27±0.86)mm 2、0.76±0.13、0.56±0.16],差异均有统计学意义(P<0.05)。经Pearson相关性分析,短暂性脑缺血患者血清cf-DNA/NETs表达水平与大脑中动脉狭窄率、斑块负荷百分比、斑块面积、重构指数、偏心指数均呈正相关(r=0.325、0.416、0.387、0.379、0.423,P<0.05)。经多因素Logistic回归分析,血清cf-DNA/NETs、斑块负荷百分比、重构指数和偏心指数均是短暂性脑缺血患者近期脑卒中的独立危险因素(P<0.05)。经ROC曲线分析,血清cf-DNA/NETs预测短暂性脑缺血患者近期脑卒中的曲线下面积(AUC)为0.900,大于斑块负荷百分比、重构指数或偏心指数的AUC(P<0.05)。结论NETs在短暂性脑缺血患者血清中呈高表达,与大脑中动脉粥样硬化斑块特征密切相关,且预测近期脑卒中的效能较好,值得进一步研究应用。

血清中性粒细胞外陷阱与子宫内膜异位症患者保守性手术后复发的关系分析

目的探究血清中性粒细胞外陷阱(NETs)与子宫内膜异位症(EMT)患者保守性手术后复发的关系。方法以2018年1月至2021年5月本院接受保守性手术治疗的123例EMT患者为研究对象,根据随访期间疾病复发情况,将其中27例复发患者分为复发组,88例未复发患者分为未复发组。通过单因素及多因素分析血清NETs与EMT患者保守性术后复发的关系。结果术后随访2年,115例患者中27例疾病复发,复发率为23.48%;复发组病灶最大直径较未复发组长,疾病分期较未复发组高,血清NETs水平较未复发组高,差异有统计学意义(P<0.05);多因素logistic回归分析发现,病灶最大直径、疾病分期、出院前血清NETs水平均为影响EMT患者保守性术后复发因素的影响因素(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,出院前血清NETs预测EMT患者保守性术后复发的曲线下面积为0.705(95%CI=0.597~0.812),具有一定预测价值。结论血清NETs与EMT患者保守性术后复发有关,其水平升高会增加患者术后复发风险,可作为临床早期预测患者疾病复发的辅助指标。

缺氧诱导的胃癌细胞外泌体通过促进中性粒细胞胞外诱捕网的形成对胃癌细胞增殖能力的影响

目的探究缺氧条件下胃癌细胞外泌体(exosome,exo)诱导的中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)对胃癌细胞生长的影响。方法提取正常和缺氧培养条件下SGC-7901和HGC细胞分泌的外泌体(记为N-SGC-7901 exo、N-HGC exo、H-SGC-7901 exo和H-HGC exo),中性粒细胞分为磷酸盐缓冲溶液(phosphate buffered solution,PBS)组、N-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC-7901组、H-HGC组、N-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC-7901 exo组、H-HGC exo组,Sytox Green染色检测各组细胞NETs的形成。SGC-7901细胞分为PBS/培养液(culture medium,CM)组、N-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM组、H-SGC-7901 exo/CM+DNAse组,HGC细胞分为PBS/CM组、N-HGC exo/CM组、H-HGC exo/CM组和H-HGC exo+DNAse/CM组。CCK8检测SGC-7901和HGC细胞增殖能力,克隆形成实验检测各组细胞克隆形成能力。结果相比于PBS组,N-SGC-7901组、H-SGC-7901组、N-HGC组、H-SGC组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901组高于N-SGC-7901组,H-SGC组高于N-HGC组。相比于PBS组,N-SGC-7901 exo组、H-SGC-7901 exo组、N-HGC exo组、H-SGC exo组中性粒细胞NETs增加,且H-SGC-7901 exo组高于N-SGC-7901 exo组,H-SGC exo组高于N-HGC exo组。相比于PBS/CM组,N-SGC-7901 exo/CM组和H-SGC-7901 exo/CM组SGC-7901细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-SGC-7901 exo/CM组高于N-SGC-7901 exo/CM组(P<0.001),而H-SGC-7901 exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-SGC-7901 exo/CM组。相比于PBS/CM组,N-HGC exo/CM组和H-HGC exo/CM组HGC细胞增殖和克隆形成能力显著增加(P<0.01),并且H-HGC exo/CM组高于N-HGC exo/CM组(P<0.001),H-HGC exo/CM+DNase组增殖和克隆形成能力显著低于H-HGC exo/CM组。结论缺氧条件下胃癌细胞外泌体通过促进NETs形成而促进胃癌细胞的生长。

DNase Ⅰ预处理和样本储存时间对血浆中性粒细胞胞外诱捕网相关指标检测结果的影响

目的 分析DNase Ⅰ预处理和样本储存时间对血浆样本中性粒细胞胞外诱捕网(NET)检测结果的影响。方法 随机筛选无基础疾病且无吸烟史的4名体检健康者,采集其外周血,提取血浆,检测NET的4个代表性指标[双链DNA(dsDNA)、瓜氨酸化组蛋白3(citH3)、核小体、髓过氧化物酶(MPO)-DNA复合物]。分析DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物检测结果的影响。将样本采集2.5 h的检测结果作为基线值,比较样本于4℃低温冰箱放置12、24、48 h后,4项指标检测结果的差异。结果 经DNase Ⅰ预处理和未经DNase Ⅰ预处理血浆MPO-DNA复合物检测结果差异无统计学意义(P>0.05)。血浆样本于4℃低温冰箱放置12、24、48h,dsDNA、MPO-DNA复合物含量稳定,各时间点检测结果差异无统计学意义(P>0.05);citH3在样本放置24 h时有所升高,核小体在样本放置12 h时有所降低,但各时间点检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 DNase Ⅰ预处理血浆对MPO-DNA复合物的检测结果无影响。血浆样本在4℃低温冰箱放置48 h NET的4个代表性指标均相对稳定,但建议在样本采集12 h内尽快冻存血浆样本。

基于中性粒细胞胞外诱捕网探讨暖心康改善缺血性心力衰竭小鼠心功能的机制

目的探讨暖心康通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,从而改善缺血性心衰小鼠心室重塑,提高心功能的作用机制。方法将30只成年健康雄性C57BL/6J小鼠随机分为3组:假手术组、模型组、暖心康组,模型组与暖心康组结扎冠状动脉左前降支建立缺血性心衰小鼠模型,假手术组仅开胸但不结扎冠状动脉。暖心康组给予暖心康灌胃,假手术组和模型组给予等量0.9%氯化钠溶液灌胃,1次/d,持续4周。对每组小鼠行心脏彩超检测左室射血分数(left ventricular ejection fraction,LVEF)、左室缩短分数(left ventricular fractional shortening,LVFS);苏木精-伊红染色法(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色、天狼星红染色检测心肌结构及纤维化程度,RT-PCR检测各组心肌组织脑钠肽(Brain Natriuretic Peptide,BNP)、白细胞介素-6(Interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-alpha,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的表达;免疫组化染色(immunohistochemistry,IHC)观察MPO在心脏中的表达情况,酶联免疫吸附测定法(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测小鼠外周血瓜氨酸化组蛋白3(citrullinated histone 3,CitH3)水平。结果与假手术组比较,模型组小鼠室壁运动幅度减弱,LVEF、LVFS显著降低(P<0.01),心脏组织炎性细胞浸润增多,心肌细胞肥大、排列紊乱,胶原纤维增多,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平升高(P<0.01),心脏组织中MPO的蛋白表达明显增多,mRNA表达水平显著升高(P<0.001),外周血CitH3含量显著升高(P<0.001);与模型组比较,暖心康组小鼠室壁运动幅度增大,左室射血分数、左室缩短分数升高(P<0.05),心脏组织炎性细胞浸润减少,心肌细胞结构与排列改善,心衰标志物BNP与炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平降低(P<0.05),MPO的蛋白表达明显减少,mRNA表达水平显著下降(P<0.001),CitH3含量显著减少(P<0.001)。结论暖心康可改善缺血性心衰小鼠心功能,其作用机制可能是通过干预中性粒细胞胞外诱捕网形成,抑制炎症反应,改善心肌细胞内环境稳态,减少心肌细胞损伤,进而改善缺血性心衰小鼠心室重塑。

中性粒细胞胞外诱捕网浸润促进尿道创伤后尿道成纤维细胞活化和增生性瘢痕形成

目的:探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对创伤后尿道瘢痕形成的影响。方法:(1)2021年6月至2022年12月,收集福建医科大学附属第一医院泌尿外科患者的临床样本,比较尿道创伤患者(n=20)与健康志愿者(n=20)血液和尿液NETs水平的差异,并分析其与尿道瘢痕形成的关系。(2)从尿道瘢痕组织中提取原代尿道成纤维细胞,体外诱导中性粒细胞以获得NETs,分别以生理盐水、0.5 mg/L NETs和1.5 mg/L NETs处理尿道成纤维细胞,探索NETs对尿道成纤维细胞活化和胶原合成的影响。(3)构建尿道创伤新西兰兔模型,将动物分为非手术组、手术+转化生长因子β1(TGF-β1)注射(阳性对照)组、手术+生理盐水注射组和手术+脱氧核糖核酸酶I(DNase I)溶液注射组,探索NETs降解剂DNase I对尿道瘢痕形成的治疗作用。结果:尿道创伤后,患者尿液NETs水平显著升高(P<0.05),而血液NETs水平无显著差异(P>0.05)。尿道创伤新西兰兔模型中,创伤后尿液NETs水平越高,形成的尿道瘢痕纤维化程度越高(P<0.05);在细胞层面上,NETs促进尿道成纤维细胞活力、迁移与胶原合成(P<0.05)。在新西兰兔尿道创伤模型中,创伤后尿道注射DNase I可降低局部NETs水平,抑制尿道瘢痕形成(P<0.05)。结论:NETs浸润促进尿道创伤后尿道成纤维细胞活化和增生性瘢痕形成。

南蛇藤总萜抑制中性粒细胞胞外诱捕网形成的作用与机制研究

为探索南蛇藤总萜(the total terpenoids of Celastrus orbiculatus Thunb.,TTC)对中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)形成及其作用机制,通过分离与制备中性粒细胞,建立佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导的NETs形成细胞模型。利用瑞氏-姬姆萨染色、扫描电镜与免疫荧光技术研究南蛇藤总萜对NETs形成及其生物学标志的影响,并利用Annexin V/PI试验研究南蛇藤总萜对中性粒细胞凋亡的影响。结果表明:南蛇藤总萜能剂量依赖性地抑制PMA诱导的NETs形成;南蛇藤总萜(80μg·mL^(-1))可阻断中性粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase,NE)的释放,并破坏NETs相关DNA-NE复合物的形成;南蛇藤总萜(80μg·mL^(-1))可显著抑制PMA诱导的瓜氨酸化组蛋白H3(citrullinated histone H3,CitH3)的表达水平;南蛇藤总萜可剂量依赖性地促进中性粒细胞凋亡。综上,南蛇藤总萜对中性粒细胞NETs的形成具有抑制作用,其机制可能与其直接诱导中性粒细胞凋亡有关。

中性粒细胞胞外诱捕网在肺部疾病中的研究进展

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是中性粒细胞受到刺激后失去内膜,并随之产生的一种染色质纤维网状结构。最初作为中性粒细胞的第二种抗菌机制被发现,认为其完善了中性粒细胞的抗菌作用;然而,越来越多的研究表明,NETs的过度产生导致炎症反应在许多肺部疾病中发挥重要作用,并与疾病的严重程度密切相关。有针对性地上调、下调、破坏或保护已经形成的NETs可能会成为未来呼吸系统疾病的新疗法。本文综述了NETs的形成及对肺部疾病影响,并讨论了药物治疗的策略。

基于中性粒细胞胞外诱捕网途径探讨胃黏膜肠上皮化生的发生机制及中药预测研究

目的探讨中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)对胃黏膜肠上皮化生(Intestinal metaplasia,IM)的作用机制及治疗靶点,为中医药防治IM提供新思路和新方向。方法从公共数据库下载IM及NETs相关数据集,通过免疫浸润分析、差异分析及基因相关性分析获得IM与NETs共表达的关键基因集;采用功能富集分析、蛋白互作网络、分子对接技术及实验验证等方法进一步阐述IM及NETs的相关性;最后将获得的关键基因与Coremine Medical平台相互映射,预测中医治疗IM的有效中药和治法。结果共筛选出6个IM与NETs形成相关的共表达的差异基因,分别为THBD、HDAC9、FGA、AQP9、DECR1和PIK3CD,这些基因与NETs的3个标记性蛋白(NE、PADI4、MPO)存在不同程度的相关性,其功能主要富集在呼吸爆发与防御反应、纤维蛋白溶解等生物学过程上;中药预测共映射出中医治疗IM的中药112味,按照功效可归为34类,其中清热解毒类中药出现频次最高,其次为活血化瘀药、温里药、补气药等。结论在IM的病理发生及发展过程中存在NETs,靶标基因NE和THBD可能存在相互关联作用,共同通过NETs通路参与IM进展;健脾化瘀解毒法是中医治疗IM的核心治法,其可能通过抑制NETs的形成,从而减缓IM的发展进程。

肺癌免疫治疗新靶点:中性粒细胞胞外诱捕网

肺癌是我国居民发病率和死亡率都较高的恶性肿瘤之一,了解其发生和发展的机制以便采取更好的策略进行预防和治疗尤为重要。肿瘤相关微环境在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,肿瘤相关的中性粒细胞代表着肿瘤微环境中的大部分炎性细胞,中性粒细胞能够分泌一种网状结构称为中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular trapping networks,NETs),然而,NETs促进肿瘤发生、发展的相关机制尚不清楚,本综述着重讨论了其在肺癌发生、发展中所起的关键作用。

PAD4介导中性粒细胞胞外诱捕网促甲状腺癌细胞增殖、侵袭的机制研究

目的探究肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)介导的中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)在甲状腺癌细胞增殖、侵袭和细胞周期中的作用机制以及临床相关性研究。方法收集60例甲状腺癌患者和60例健康受试者的外周血,ELISA检测血清中PAD4和组蛋白H3瓜氨酸化(H3cit)水平,并分析甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平与疾病进展的相关性。提取甲状腺癌患者和健康受试者外周血中性粒细胞,qRT-PCR检测PAD4 mRNA表达水平,离子霉素刺激和绿菁染色检测NETs形成水平。将NETs、GSK484与人甲状腺癌细胞株CAL-62共孵育,分为Control组、NETs组和NETs+GSK484组。采用CCK-8法、Transwell法和流式细胞术分别检测细胞增殖和侵袭水平以及细胞周期进展。结果与健康受试者相比,甲状腺癌患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),且PAD4和H3cit水平呈正相关(P<0.05)。甲状腺癌患者的PAD4和H3cit水平均与TNM分期有关(P<0.05)。与健康受试者相比,甲状腺癌患者外周血中性粒细胞PAD4 mRNA表达及NETs形成水平升高(P<0.05)。与Control组相比,NETs组细胞增殖、侵袭水平升高(P<0.05),S期细胞比例升高(P<0.05),G1期细胞比例降低(P<0.05)。GSK484可抑制NETs形成。与NETs组相比,NETs+GSK484组细胞增殖、侵袭水平降低(P<0.05),S期细胞比例降低(P<0.05),G1期细胞比例升高(P<0.05)。结论PAD4介导的NETs通过激活细胞周期进展,促进甲状腺癌细胞增殖和侵袭,加速甲状腺癌疾病进展。

多房棘球蚴原头节诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

目的通过定性和定量方法初步探析多房棘球蚴原头节诱导中性粒细胞胞外诱捕网(Neutrophil extracellular traps,NETs)的形成情况。方法1.从沙鼠模型中分离出多房棘球蚴原头节,并检测原头节的存活率;2.用Polymorph Prep梯度离心法提取中性粒细胞,用PE-CD66b标记分离的中性粒细胞,以流式细胞术鉴定分离的中性粒细胞纯度;3.将原头节与中性粒细胞共培养于体外,用PicoGreen dsDNA定量检测试剂盒检测共培养上清液中的dsDNA浓度;4.在激光共聚焦显微镜下观察形成的NETs结构;5.用流式细胞仪检测共培养后形成NETs标志物髓过氧化酶(Myeloperoxidase,MPO)、瓜氨酸化组蛋白H3(Citrulline H3,H3Cit)的水平;6.用PCR技术鉴定NETs中DNA的来源。结果1.从沙鼠中分离出的原头节存活率可达90%以上;2.从健康人外周血中提取的中性粒细胞经分离纯化后,其纯度达到87%以上;3.PicoGreen dsDNA定量检测结果显示,NETs的产生随原头节数量和共培养时间的增加而增加(P<0.01);4.在激光共聚焦显微镜下观察到共培养后产生的NETs,其DNA骨架呈网状分布,被标记的MPO、H3Cit的数量比对照组显著增多;5.流式细胞术检测结果显示,与原头节共培养的实验组中的MPO+、H3Cit+的中性粒细胞数量(6.83±1.87)%与阴性对照组(0.53±0.12)%相比明显增加(P<0.05),与阳性对照组(17.33±2.59)%相比差异显著(P<0.01);6.共培养产生的NETs,其DNA既来源于核DNA,也来源于线粒体DNA。结论感染多房棘球蚴后,可以诱导NETs形成。

中性粒细胞胞外诱捕网通过CCDC25促进骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用研究

目的探究中性粒细胞胞外捕获网(neutrophil extracellular traps,NETs)在骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭中的作用及其相关机制。方法纳入骨肉瘤患者和健康受试者各20例,通过ELISA检测血清中PAD4和H3cit水平。提取两组人群外周血中性粒细胞,比较NETs形成差异。将NETs与骨肉瘤细胞MG63共孵育,期间加入DNA降解酶DNaseⅠ,分为对照组、NETs组和NETs+DNaseⅠ组。通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。将si-NC和si-CCDC25转染至MG63,加入NETs共孵育,分为si-NC组和si-CCDC25组,通过蛋白质印迹检测CCDC25蛋白表达水平,CCK8检测细胞增殖水平,Transwell检测细胞迁移和侵袭水平。结果与健康受试者比较,骨肉瘤患者血清中PAD4和H3cit水平升高(P<0.05),NETs形成能力增强。与对照组比较,NETs组CCDC25蛋白表达升高,细胞增殖、迁移和侵袭水平升高(P<0.05)。与NETs组比较,NETs+DNaseⅠ组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CCDC25组CCDC25蛋白表达降低,细胞增殖、迁移和侵袭水平降低(P<0.05)。结论NETs通过释放的DNA激活骨肉瘤细胞CCDC25表达,从而促进肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭。

基于中性粒细胞胞外诱捕网探讨白及修复溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜屏障的作用及机制

目的基于中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)探讨白及对溃疡性结肠炎(UC)大鼠肠黏膜屏障的修复作用及机制。方法将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.3 g·kg^(-1))及白及低、中、高剂量组(0.3、0.6、1.2 g·kg^(-1)),每组8只。采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)-乙醇灌肠法复制UC大鼠模型,造模成功后按照设定剂量灌胃给药,每日1次,连续灌胃给药21 d。在给药干预的第1、11、21天进行疾病活动指数(DAI)评分;采用HE染色法观察大鼠结肠组织病理变化;ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)含量;Western Blot法及免疫组化法检测大鼠结肠组织中NETs相关蛋白髓过氧化物酶(MPO)、中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)、血管内皮生长因子(VEGF)以及紧密连接(TJs)相关蛋白封闭蛋白2(CLDN2)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)的表达水平。结果与正常组比较,模型组大鼠DAI明显升高(P<0.05);结肠组织黏膜层出现大面积变性坏死且肠腺结构消失,大量炎性细胞浸润,累及黏膜下层、肌层和浆膜层,病理评分明显升高(P<0.05);血清TNF-α、IL-1β水平明显升高(P<0.05);结肠组织中MPO、NE、VEGF、CLDN2蛋白表达明显升高(P<0.05),ZO-1蛋白表达明显降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组大鼠的DAI均明显降低(P<0.05);柳氮磺胺吡啶组和白及中、高剂量组大鼠结肠肠腺结构完整清晰,黏膜未见明显变性及坏死,可见少量炎性细胞浸润,病理评分明显降低(P<0.05);血清TNF-α、IL-1β水平明显降低(P<0.05);结肠组织中MPO、NE、VEGF、CLDN2蛋白表达明显降低(P<0.05),ZO-1表达明显升高(P<0.05)。结论白及可能通过调控NETs激活及TJs相关蛋白表达,降低血清炎症因子水平,从而修复肠道黏膜屏障,发挥治疗UC的作用。

中性粒细胞胞外诱捕网在缺血性脑卒中中的研究进展

缺血性脑卒中的发病率和病死率均较高,严重威胁高龄人群的身体健康。中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是由中性粒细胞分泌的一种胞外网状结构,在急性脑卒中的病理过程中发挥重要作用。NETs通过与中性粒细胞和血小板相互作用促进凝血级联反应,增强血小板的聚集作用和促凝活性,促进血小板黏附和血栓形成;NETs还可促进纤维蛋白变性和结构改变,提高血栓的稳定性和刚性,导致取栓抵抗;此外,NETs可与中性粒细胞共同介导炎症,破坏血管生成和血脑屏障,从而加重脑卒中后神经损伤。因此,NETs可作为缺血性脑卒中的潜在治疗靶点,抑制NETs的形成或促进NETs的降解可有效改善患者预后。

中性粒细胞胞外诱捕网调控口腔鳞状细胞癌的发展及预后的相关研究

目的 探究中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps, NETs)在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma, OSCC)中的表达及作用。方法 通过免疫检测技术对OSCC组织中NETs的表达情况进行了确认,随后对不同NETs表达水平患者的临床病理特征及预后进行了分析。通过密度梯度离心法分离健康人外周血中性粒细胞并使用佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA)诱导NETs生成,将其与OSCC细胞共培养后,通过CCK-8细胞增殖实验检测OSCC细胞增殖能力的变化,通过Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测OSCC细胞迁移能力的变化;通过蛋白免疫印迹实验(Western blotting, WB)检测NETs对OSCC上皮间充质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)过程的调控。结果 NETs在OSCC中的表达水平高于正常组织(P<0.001),NETs高表达患者较NETs低表达患者预后更差(P<0.05),NETs表达水平与OSCC患者的临床分级、浸润和复发程度相关(P<0.05)。NETs可促进Cal27和HN6细胞的增殖和迁移能力(P<0.05),抑制了上皮标志物的蛋白表达,并促进了间充质标志物的蛋白表达(P<0.05),这些作用可被NETs抑制剂DNaseⅠ逆转。结论 NETs在OSCC中高表达,其可通过影响上皮间充质转化促进OSCC细胞的增殖和迁移,并影响OSCC患者预后。

中性粒细胞胞外诱捕网在脓毒症病理生理及临床应用中的研究进展

脓毒症是危害性极强的临床综合征,其复杂的病理生理机制及随之而来的治疗难题一直是人们的困扰。中性粒细胞胞外诱捕网(neutrophil extracellular traps,NETs)是中性粒细胞在激发状态下产生的一种以核DNA、组蛋白为主要支架并包含多种酶及炎性因子的物质集合体。这些丰富的炎性物质与脓毒症发生发展的多种炎症反应途径有千丝万缕的联系,也成为脓毒症研究的重要突破方向。近年来,特别是新冠肺炎流行以来,NETs在脓毒症时的产生机制及临床应用的研究如雨后春笋,相关机制及途径逐渐明晰,治疗脓毒症的新方向不断涌现。该文针对NETs的形成过程及其在不同刺激下的变异,在脓毒症发生发展中可能发挥的作用及其潜在的临床应用价值,以及针对NETs及其组分的脓毒症治疗新思路进行综述。