嗜乳脂蛋白第三亚家族成员一基因的研究现状及进展

嗜乳脂蛋白(BTN)基因是一组主要的组织相容性复合体相关基因,嗜乳脂蛋白第三亚家族成员一(BTN3A1)是BTN家族7个成员之一,在多种疾病的病理生理、发生发展过程中具有重要作用,可以通过调节T细胞的免疫功能抑制抗肿瘤的发生发展。目前对BTN3A1与肿瘤的主要研究集中在血液系统疾病,但已有研究表明,其与部分实体肿瘤有一定联系。本文旨在总结BTN3A1在各种疾病中的作用,并作一综述。

BTN3A2在肿瘤中作用的研究进展

嗜乳脂蛋白亚家族3成员A2(lactophilin subfamily 3 member A2,BTN3A2)是一种与免疫系统相关的跨膜蛋白,其在B细胞、单核细胞和树突状细胞等免疫细胞中均有表达。近年来BTN3A2在肿瘤中的研究主要集中在三阴性乳腺癌、胰导管腺癌、卵巢上皮癌、肺腺癌、胃腺癌,其在多种肿瘤组织中呈差异表达。在干扰素-γ(interferonγ,IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factorα,TNF-α)等促炎性细胞因子影响下表达可增加。BTN3A2通过调节T细胞介导的转录调节因子(T-box transcription factor,T-bet)、信号转导和转录激活因子(signal transducer and activator of transcription,STAT)1、IFN-γ、激活/或抑制核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、白介素-2(interleukin2,IL-2)/STAT3等信号通路增加肿瘤微环境中CD8^(+)、CD4^(+)T细胞和树突状细胞,通过诱导γδT细胞活化为Vγ9Vδ2 T细胞,从而可达到抗肿瘤作用。进一步的分析发现hsa-miR-17-5p可能是BTN3A2的miRNA靶点,这可为肿瘤的免疫治疗提供新思路。

miR-216b-5p靶向调控BTN3A2促进胶质瘤细胞LN-229的迁移及侵袭能力

大量证据表明microRNA(miRNA)通过靶向调控靶基因的表达从而在肿瘤侵袭与转移中发挥重要作用。然而关于microRNA-216b-5p (miR-216b-5p)通过靶向嗜乳脂蛋白第3亚家族膜蛋白A2(butyrophilin subfamily 3 member A2,BTN3A2)促进胶质瘤侵袭与转移的机制尚不明确。本研究通过GSE15824与GSE4290差异表达分析筛选出同时在2个芯片中表达上调的BTN3A2(P<0.05)。生存曲线结果显示,高表达BTN3A2病人总生存期明显下降(P<0.001)。表达量分析结果显示,BTN3A2表达随WHO分级升高而升高(P<0.05),同时1p/19q未联合缺失与IDH突变型病人BTN3A2表达升高(P<0.001)。基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)结果显示,BTN3A2与众多癌症相关通路有关(P<0.05);Western印迹结果显示,BTN3A2在7例胶质瘤组织和胶质瘤细胞系U87、U251和LN-229中表达上调,过表达miR-216b-5p(miR-216b-5p mimics)后BTN3A2蛋白表达水平降低;Transwell结果显示,转染BTN3A2干扰质粒(si-BTN3A2)和miR-216b-5p mimics后可以抑制LN-229细胞体外迁移与侵袭能力(P<0.05);在线预测网站证实,miR-216b-5p为BTN3A2潜在靶基因;生存曲线结果显示,与低表达miR-216b-5p病人相比,高表达病人生存率明显上调(P=0.025);荧光定量RT-PCR结果显示,miR-216b-5p在胶质瘤U87、U251和LN-229细胞中表达下降(P<0.05);双荧光素酶结果显示,BTN3A2存在与miR-216b-5p的结合靶点(P<0.05);综上所述,BTN3A2可能通过结合miR-216b-5p促进胶质瘤细胞LN-229的迁移以及侵袭。

耳穴揿针治疗对剖宫产初产妇泌乳功能及TDP-43/Btn1A1/XDH通路的影响

目的:观察耳穴揿针治疗对剖宫产初产妇母乳喂养及泌乳功能的影响,并从乳脂分泌相关基因角度探讨其作用机制。方法:将100例剖宫产初产妇随机分为观察组(50例,脱落3例)和对照组(50例,剔除2例)。对照组予产科常规护理;观察组在对照组基础上,给予耳穴揿针治疗1次,穴取内分泌、胸、胸椎、神门、交感等,取一侧耳穴,共持续3 d。比较两组初产妇治疗后泌乳启动时间、产后72 h泌乳充足率、产后42 d纯母乳喂养率、母乳喂养评分;实时荧光定量PCR法、Western blot法检测两组初产妇治疗后乳汁反式激活应答DNA结合蛋白(TDP-43)、嗜乳脂蛋白亚家族1成员A1(Btn1A1)、黄嘌呤脱氢酶(XDH)的mRNA及蛋白表达。结果:治疗后,观察组泌乳启动时间早于对照组(P<0.01),母乳喂养评分高于对照组(P<0.01);观察组产后72 h泌乳充足率为63.8%(30/47),高于对照组的41.7%(20/48,P<0.05);观察组产后42 d纯母乳喂养率为72.3%(34/47),高于对照组的47.9%(23/48,P<0.05)。观察组乳汁TDP-43、Btn1A1 mRNA及蛋白表达高于对照组(P<0.01);两组乳汁XDH mRNA及蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在常规护理基础上,加用耳穴揿针治疗可以提前启动剖宫产初产妇泌乳,提高产后泌乳充足率及产后纯母乳喂养率,其作用机制可能与上调TDP-43、Btn1A1表达有关。

SiRNA干扰BTN3A3对脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的探讨采用siRNA干扰嗜乳脂蛋白亚家族成员A3(BTN3A3)对脑胶质瘤细胞凋亡的影响。方法实验采用胶质瘤细胞株(HS683、U251)以及原代胶质瘤细胞,均设立阴性对照组(NC组)以及转染不同序列siRNA的Si-1组(转染1序列)和Si-2组(转染2序列)。应用蛋白质免疫印迹方法分析不同胶质瘤细胞株、小胶质细胞株(HMC3)中BTN3A3的表达情况。通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流术细胞术分析各细胞株中细胞凋亡的变化情况。分离培养手术切除的脑胶质瘤组织,获得原代胶质瘤细胞后,采用蛋白质免疫印迹方法分析原代细胞中BTN3A3的表达水平;通过转染siRNA敲减BTN3A3后,采用流式细胞术分析原代细胞的细胞凋亡变化情况。结果 BTN3A3在HS683(1.12±0.03)和U87-MG细胞(1.08±0.05)中的表达水平显著高于HMC3细胞(0.66±0.02)(均P<0.01)。U251细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.11±0.01、0.12±0.01,均低于NC组(0.21±0.01)(均P<0.01);HS683细胞Si-1组、Si-2组BTN3A3的表达水平分别为0.77±0.03、0.78±0.04,均低于NC组(1.01±0.03)(均P<0.01)。敲减BTN3A3后,与NC组相比,HS683细胞的早期凋亡比率(NC组:31.6%,Si-1组:53.7%,Si-2组:63.3%)、U251细胞的晚期凋亡比率(NC组:10.4%,Si-1组:18.9%,Si-2组:26.5%)升高。BTN3A3在原代胶质瘤细胞中的表达水平高于HMC3细胞(分别为0.75±0.07和0.55±0.06,P<0.05)。采用siRNA敲减后,原代胶质瘤细胞中BTN3A3的表达水平降低(NC组:0.90±0.01,Si-1组:0.44±0.01,Si-2组:0.49±0.02,Si-1组和Si-2组与NC组相比,均P<0.01),晚期细胞凋亡比率升高(NC组:12.3%,Si-1组:22.6%,Si-2组:18.2%)。结论采用siRNA干扰BTN3A3可促进胶质瘤细胞株、原代胶质瘤细胞的凋亡。

麦洼牦牛XDH和BTN1A1基因哺乳期表达分析

为了鉴定牦牛乳脂肪滴形成和分泌相关的黄嘌呤脱氢酶(XDH)、嗜乳脂蛋白亚家族成员1(BTN1A1)基因全泌乳期的表达状况,产犊前15天和产犊后第1,15,30,60,120,240天采集5头麦洼牦牛乳腺组织样品,运用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术分析XDH、BTN1A1基因全泌乳期表达变化以及它们与牦牛泌乳的关系。结果表明:牦牛乳腺BTN1A1基因在泌乳的第30天和第120天有2个表达峰,最大峰值出现在产犊后的第30天;XDH基因在泌乳的第30天出现峰值。XDH、BTN1A1基因在产犊后30～120 d的表达水平与产犊前15天相比差异显著或极显著(P<0.05或P<0.01),说明XDH、BTN1A1基因在牦牛产犊后30～120 d维持较高水平并稳定表达。

BTN3A3单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备BTN3A3单克隆抗体并鉴定。方法用含小鼠Ig G2a Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-m Fc作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合获得杂交瘤细胞。用含人Ig G1 Fc标签的BTN3A3重组蛋白BTN3A3-h Fc作为检测原,筛选分泌BTN3A3单抗的杂交瘤细胞株。利用Western印迹法和间接免疫荧光对上述单抗进行鉴定。结果共获得7株可稳定分泌BTN3A3单抗的杂交瘤细胞株。ELISA、Western印迹法和间接免疫荧光结果显示上述抗体可特异性地识别BTN3A3。结论获得可应用于ELISA、Western印迹法及免疫荧光的BTN3A3单抗,为BTN3A3的功能性研究奠定了基础。