石斑鱼肠道原籍嗜冷杆菌(Psychrobacter sp.)SE6作为益生菌的体内外评价

研究了石斑鱼肠道原籍嗜冷杆菌SE6在体外的抑菌特性及对人工胃肠液的耐受特性,在此基础上研究了饲料中添加SE6(108CFU/g)对斜带石斑鱼生长性能和免疫功能的影响。体外试验结果表明:SE6对副溶血弧菌、哈维氏弧菌、梅氏弧菌和金黄色葡萄球菌等常见水产致病菌均有一定的抑制作用。pH为4.0的人工胃液能促进SE6的生长,处理2和4h存活率分别为110.7%和173.0%;pH为3.0的人工胃液处理2h后活菌数为1.59×105 CFU/cm3,存活率为1.36%,但SE6不能耐受pH为2.0的人工胃液。经浓度分别为0.1%,0.3%,0.5%和0.7%的胆盐处理3h后,SE6的存活率分别为89.17%,88.33%,77.17%和12.33%。动物试验结果显示:投喂SE660d后试验组饵料系数(0.95±0.01)显著低于对照组(1.03±0.02)。试验组血清补体C3在试验全期均高于对照组,补体C4含量在投喂SE6 60d时显著上升。血清IgM含量在投喂30d时显著上升。总之,嗜冷杆菌SE6能抑制多种常见病原菌的生长,而且对模拟胃肠道环境具有一定的耐受能力,添加到饲料中能显著提高石斑鱼饵料利用率,增强动物的免疫功能。

条斑紫菜褐斑病病原嗜冷杆菌的生物学特性

2010年2—3月,江苏北部一海区养殖的紫菜出现褐斑病,主要症状为紫菜叶片表面出现大量褐色斑点。紫菜叶片经清洗匀浆后接种于选择性培养基,从2216E培养基及褐藻酸钠固体培养基中分离出大量的优势生长细菌,人工感染试验结果证明分离菌能够使紫菜叶状体出现褐斑并分解藻体。对分离菌进行形态特征、生理生化特性及16S rRNA基因序列的系统发育学分析等鉴定,结果表明该菌为革兰氏染色阴性球杆菌,氧化酶阳性,接触酶阳性,其中,16S rRNA基因序列通过Blast检索,结果表明与嗜冷杆菌属细菌具有99%的同源性。综合分离菌的形态、生理生化特性及16S rRNA基因的系统发育学分析结果表明分离菌为嗜冷杆菌。

血培养检出嗜冷杆菌属亚种Psychrobacter sanguinis一例

嗜冷杆菌属（Psychrobacter）是革兰阴性球杆菌，因嗜冷而得名，属于莫拉菌科，其感染人较为少见。Deschaght等报道，人来源的嗜冷杆菌主要为肺尖嗜冷杆菌（Psychrobacter pulmonis）和粪嗜冷杆菌（Psychrobacter faecalis），2013年法国报道一例输血过程中感染了沙质嗜冷杆菌（Psychrobacter arenosus）病例，但是有关Psychrobacter sanguinis的报道罕见。

活性和热灭活原籍嗜冷杆菌SE6对斜带石斑鱼幼鱼生长性能和免疫功能的影响

为探讨灭活益生菌在海水鱼养殖中的应用前景,研究了饲料中添加活性和热灭活原籍嗜冷杆菌SE6对斜带石斑鱼幼鱼生长性能和血清免疫指标的影响。225尾斜带石斑鱼幼鱼[(14.6±0.2)g]被随机分成3组,每组3个重复。对照组T0投喂基础饲料,实验组T1和T2分别投喂添加1.0×108cfu/g活性和热灭活嗜冷杆菌SE6的基础饲料,饲喂期为60 d。结果表明,实验前期(0～30 d),实验组T1和T2特定生长率和增重率均显著高于对照组(P<0.05),饵料系数均低于对照组,但差异不显著(P>0.05);实验全期(0～60 d),实验组T1和T2特定生长率和增重率均显著高于对照组(P<0.05),实验组饵料系数均下降,其中实验组T1显著低于对照组T0(P<0.05)。实验30 d时,实验组T1和T2血清IgM和补体C3含量均高于对照组,但差异不显著(P>0.05);60 d时,实验组T1的补体C3水平、总超氧化物歧化酶活力和IgM含量均显著高于对照组T0(P<0.05),实验组T2的补体C3水平、T-SOD活力、IgM含量和溶菌酶活力也高于对照组,但差异不显著(P>0.05)。总之,活性和热灭活嗜冷杆菌均可不同程度地促进石斑鱼生长,降低饵料系数,并能提高石斑鱼特异性和非特异性免疫功能。热灭活嗜冷杆菌的应用效果略低于活性菌,但其具有安全性高、质量稳定、生产储藏容易等优势,在海水鱼养殖中的应用值得深入研究。

芳樟醇抑制嗜冷杆菌引起的秘鲁鱿鱼甲醛升高

选用天然芳樟醇作为保鲜剂,抑制由近海生嗜冷杆菌L4引起的秘鲁鱿鱼甲醛升高及品质劣变。结果表明,添加芳樟醇的样品,甲醛、二甲胺和三甲胺含量均显著低于同期接种L4的样品(P<0.05),降低倍数在1.3~12.2倍之间。添加芳樟醇后以上3项指标与空白组无显著差异(P>0.05)。而氧化三甲胺含量高于L4组同期指标的1.1~15.9倍。品质指标显示同样的结果,芳樟醇处理组和空白组的感官品质劣变、菌落总数、硫代巴比妥酸值和pH值显著低于L4组(P<0.05)。近海生嗜冷杆菌L4能够促进鱿鱼中甲醛的产生及其品质的劣变,而芳樟醇能够抑制L4引起的鱿鱼中甲醛的增加,提高鱿鱼贮藏品质和食用安全性。

一株南极嗜冷杆菌产丙酮酸脱氢酶的性质研究及基因克隆

从南极普利兹湾深海沉积物中筛选到一株嗜冷杆菌7195,其16SrDNA序列分析表明该菌株属于嗜冷杆菌属(Psychrobacter),从该菌的全基因组DNA中克隆到编码丙酮酸脱氢酶系E1(PDHcE1)的完整ORF,全长为2817bp,使用DNAMAN 5．1对其全长ORF的PDHcE1基因进行分析,PDHcE1基因编码一个由939AA残基组成、分子量预计为100663Da的PDHcE1蛋白质,与Psychrobacter sp．273-4的PDHcE1有78．53％的相似性。

耐冷嗜酸硫杆菌快速氧化地浸采铀吸附尾液中Fe^(2+)

为解决中温菌在低温吸附尾液中作氧化剂时生长繁殖慢、氧化Fe^(2+)速率低等问题,实验结合新疆某酸法地浸采铀现场生产实际,选取耐冷嗜酸硫杆菌作为氧化剂,以生物陶粒为挂膜载体,在生物反应器内对细菌进行固定化培养,研究了细菌快速氧化吸附尾液中Fe^(2+)规律。实验结果表明,选用的生物陶粒具有高孔隙率、高透水性、高吸附性和高比表面积等特点,对细菌有较好的吸附固着效果,有利于细菌的生长繁殖,提高了细菌氧化Fe^(2+)速率;生物陶粒在pH 1.6~1.7的吸附尾液中具有较强的耐酸性和稳定性;当通气量为20L/h、吸附尾液温度为17~19℃、流量为500L/h时,生物反应器连续氧化Fe^(2+)速率达到0.85g/(L·h);与H2O2作氧化剂相比,可以节约费用约72.6%,为实现细菌作氧化剂的工业化应用提供了有力依据。

耐冷嗜酸硫杆菌的生长特性和固定化培养

为解决氧化亚铁硫杆菌、嗜铁钩端螺旋菌等中温菌在低温和高酸的吸附尾液中作氧化剂时生长繁殖慢、氧化Fe^(2+)速率低等问题,以耐冷嗜酸硫杆菌为研究对象,结合新疆某地浸采铀现场生产实际,对该菌的生长特性、耐酸驯化和固定化培养进行了探索。结果表明,该菌的接种量以10%为宜;当初始Fe^(2+)浓度为0.3~0.5 g/L时,细菌仍能较快氧化Fe^(2+);在5~25℃条件下,耐冷嗜酸硫杆菌氧化Fe^(2+)的速率均高于氧化亚铁硫杆菌,即耐冷嗜酸硫杆菌更适于溶浸液低温环境;耐冷嗜酸硫杆菌耐酸驯化后能在pH=0.31的培养液中保持较好的氧化活性;从生物陶粒表面电镜图片中可以观察出较厚的生物膜,固定化细菌和游离态细菌协同氧化Fe^(2+)的速率是游离态细菌单独氧化的3.4倍。

嗜冷乳糖节杆菌B7对遮阴胁迫下多年生黑麦草幼苗生长和抗氧化防御系统的影响

为探究嗜冷乳糖节杆菌B7(Arthrobacter psychrolactophilus)对遮阴胁迫下多年生黑麦草(Lolium perenne)的缓解效应,在盆栽试验条件下,研究了不同遮阴胁迫(0、20%、40%、60%和80%)下接种嗜冷乳糖节杆菌菌株B7对黑麦草生长和生理特性的影响。遮阴胁迫显著抑制黑麦草的生长(P<0.05),而B7能够有效缓解遮阴胁迫对黑麦草生长的抑制。60%和80%遮阴导致多年生黑麦草细胞膜发生严重的损伤,并且积累较高的活性氧,接种B7有效地缓解了遮阴对黑麦草幼苗造成的氧化损伤。与单独遮阴处理相比,20%、40%、60%和80%遮阴胁迫下接种B7导致H2O2和O·2-含量分别下降5.88%、24.41%、33.60%、40.00%和30.91%、22.94%、25.67%、49.37%。遮阴胁迫在一定程度上提高了超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、过氧化物酶(peroxidase,POD)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate peroxidase,APX)、谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase,GR)活性以及抗坏血酸(ascorbic acid,AsA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量,接种B7进一步提高了上述抗氧化防御体系的活性。研究结果表明,遮阴胁迫下接种B7能够显著提高黑麦草的抗氧化酶活性(P<0.05),增加活性氧的清除能力,减轻遮阴引起的氧化损伤,从而增强黑麦草的耐阴性。

高通量测序分析不同产地带鱼冷藏时微生物群落多样性

研究不同产地带鱼微生物群落的多样性,并探究其在冷藏过程中菌相的变化,利用高通量测序分析对产自江苏南通吕四港黄海海域和浙江舟山港东海海域的带鱼样品进行分析。结果表明:不同产地的新鲜带鱼样品菌群结构有很大差异,在属水平上,江苏南通吕四港带鱼样品中微生物主要以嗜冷菌属、栖热菌属与假交替单胞菌为主,而浙江舟山港带鱼样品中微生物菌属组成丰富,有7种菌属的相对丰度相差不大,均为10%左右;冷藏6~8 d后,两种产地带鱼样品都以嗜冷菌属与Oceanisphaera为优势腐败菌属,两者相对丰度超过89%,对带鱼腐败变质影响显著。两种产地带鱼样品冷藏过程中细菌群落多样性及菌群结构变化,反映了带鱼在冷藏过程中潜在的卫生质量风险,可为后期带鱼冷藏过程质量安全监测及带鱼的防腐保鲜研究提供依据。

大黄鱼腐败菌的低温致腐性及相互作用

以挥发性盐基氮、三甲胺和气味指纹图谱为表征,探讨腐败希瓦氏菌(S.putrefaciens)、静止嗜冷杆菌(P.immobilis)和荧光假单胞菌(P.fluorescens)在低温下对鱼肉的腐败性以及混合菌群在致腐过程中的相互作用.研究结果表明,腐败希瓦氏菌具有较强的产挥发性盐基氮特性,主导腐臭气味;荧光假单胞菌具有类似的腐败趋势,但腐败性较腐败希瓦氏菌弱;静止嗜冷杆菌不具有显著的产挥发性盐基氮等特性,但能产生更为复杂的气味;荧光假单胞菌和静止嗜冷杆菌在腐败初期对腐败希瓦氏菌的腐败趋势有抑制作用.

梅里埃API 20NE生化鉴定系统在布鲁氏菌鉴定中的局限性

目的 对梅里埃API 20NE生化鉴定系统在布鲁氏菌鉴定中出现的错误结果进行总结分析,并探索相应的改正措施,提醒微生物实验室工作人员不能过分依赖生化鉴定结果。方法 对2011年1月-2016年3月陕西省人民医院门诊及住院病人血液、脓液、关节腔积液分离的33株氧化酶阳性、泥沙样、疑似布鲁氏菌的G-细小杆菌,采用梅里埃API 20NE快速生化鉴定板条进行鉴定,对得到的错误结果进行分析,并结合布鲁氏菌的生物学特征进行补充试验,以得到正确的鉴定结果。结果 API 20NE生化鉴定板条,误将上述33株菌,2株鉴定为人苍白杆菌,其余31株均鉴定为苯丙酮酸嗜冷杆菌,且ID值=91.5%,T值=1。对这种看似可信度很高的鉴定结果,结合菌落细小、48 h后产生橘红色色素、菌体为G-泥沙样、快速脲酶试验阳性特征,和病人临床症状、接触史及血清学鉴定也证实,上述33株菌均为布鲁氏菌。结论 API20 NE生化鉴定系统,不适合对布鲁氏菌进行鉴定,对疑似错误的鉴定结果,要结合菌落、菌体特点及其它生物学特征和病人的临床表现、接触史及一些辅助实验来确定细菌,过分依赖生化鉴定,会得出错误结果。另外,商家也应补充和完善该鉴定系统,进一步提高API快速鉴定系统的临床应用价值。

南极微生物混合制剂对黄瓜白粉病的防效及环境生态影响

测定南极芽孢杆菌Bacillussp．107和嗜冷杆菌Psychrobactersp．t3-3混合生物制剂对室内黄瓜白粉病的防治效果；检测生物制剂对意大利蜜蜂的经口毒性；检测生物制剂对孔雀鱼的毒性。结果表明，混合生物制剂对室内黄瓜白粉病的防治效果达到70．19％；蜜蜂毒性经口实验结果为48hLC50=724mga．i．／L，为低毒，孔雀鱼在14d观察期间，未见异常表现，说明混合生物制剂对环境友好。本研究为混合生物制剂的进一步开发和应用提供基础资料及安全性保障。

南极磷虾中产抗菌活性物质菌株的筛选及系统发育分析

分别以金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus ATCC 27661(Sa 27661)和大肠杆菌Escherichia coli ATCC 35218(Ec 35218)为指示菌,以南极磷虾中分离出的59株菌为测试菌,利用牛津杯法进行抗菌活性菌株的初筛及复筛,同时用比浊测定法和牛津杯法对活性菌株的部分特性包括生长曲线、抗菌曲线、最佳温度、最佳p H、最佳盐度进行了测定,以Mega 5邻接法对其16S r RNA基因序列及系统发育地位进行探究。结果发现,初筛获得13株菌对Sa 27661具有抗菌活性,6株菌对Ec 35218具有抗菌活性。复筛得到对Sa 27661和Ec 35218均具有明显抗菌活性的菌株3株,阳性率为5.08%,其编号分别为1A3、A4、1A5。且3株菌分别培养16、20、28 h进入生长对数期,培养36、48、60 h达到稳定期。分别培养56、64、72 h时抗菌活性达到最高,之后基本达到稳定。最佳温度分别为15、20、20℃,最佳p H分别为7、6、6,最佳盐度分别为1%、3%、2%。系统发育分析结果表明,菌株A4、1A5,均属于嗜冷杆菌属Psychrobacter,菌株1A5与已注册的菌株(Psychrobacter sp.OK1)基因序列相似性可达100%。而菌株1A3与不可培养嗜冷杆菌属(Uncultured Psychrobacter)同源性为97%。三株菌均具有较好的耐酸性、耐碱性和耐盐性的能力,同时具有较好的抗菌活性。

裙带菜孢子体溃烂病原鉴定及病因分析

为探究大连市龙王塘和铁山增养殖海域养殖裙带菜Undaria pinnatifida孢子体出现溃烂的原因,利用细菌分离及分子生物学方法,从海域养殖裙带菜溃烂的孢子体中分离纯化得到2株优势菌株(编号分别为LH43和LQ2),通过人工感染试验证实,分离菌株能够使裙带菜孢子体出现溃烂并分解藻体,且与自然发病相似,LH43较LQ2菌株致病性明显。结果表明:通过对两菌株16S rDNA基因序列扩增、测序及比对发现,LH43菌株与北极假交替单胞菌属Pseudoalteromonas arctica细菌的一致性为99%,LQ2菌株与嗜冷杆菌属Psychrobacter aquimaris细菌的一致性为100%;系统发育分析显示,LH43菌株与北极假交替单胞菌聚为一支,LQ2菌株与嗜冷杆菌聚为一支;利用生化试验对两菌株的理化指标进行检测,经比对分别与北极假交替单胞菌和嗜冷杆菌吻合;菌株生长及产酶特性分析显示,LH43和LQ2菌株最适生长温度为5~10℃,两菌株代谢产生的胞外产物褐藻酸裂解酶均在15℃时酶活力最高;药敏试验显示,LH43菌株对庆大霉素、卡那霉素、氟罗沙星及链霉素高度敏感,LQ2菌株对庆大霉素、卡那霉素、青霉素、阿奇霉素高度敏感。研究表明,裙带菜溃烂病的发生是北极假交替单胞菌和嗜冷杆菌在不良环境与菌株产生的褐藻酸裂解酶共同导致。

Preservation efficiency of new cryoprotectant used for Acidithiobacillus ferrooxidans in liquid nitrogen

The efficiency of a new cryoprotectant,GP,for the preservation of Acidithiobacillus ferrooxidans（A.ferrooxidans） strain DC in liquid nitrogen was investigated.The optimal concentration of this new cryoprotectant for the maximal viable cell recovery and the highest ferrous ion oxidation activity was determined.The results show that 30%（volume fraction） GP is optimal for the cryopreservation with 84.4% of cells surviving,completely oxidizing ferrous ions within 120 h,and growing to a final density of 5.8×107 cell/mL after 6 d in the culture.Furthermore,the optimal residual GP concentration for viable cell recovery after culture of thawed cells in 9K medium for 6 d is 0.6%（volume fraction）.At this concentration,strain DC completely oxidizes ferrous ions within 108 h and grows to a final cell density of 6.8×107 mL-1.Thus,GP is a simple,effective cryoprotectant for the preservation of A.ferrooxidans strain DC in liquid nitrogen.

细菌快速氧化新疆地浸采铀吸附尾液中Fe^2+现场扩大试验研究

为了节省酸法浸铀过程中氧化剂用量,以多孔耐酸陶粒作载体固定耐冷嗜酸硫杆菌,在新疆某酸法地浸采铀矿山构建了高7.0 m、内径2.0 m、总容积17.8 m^3的新型高效生物反应器,进行快速氧化地浸采铀吸附尾液中Fe^2+扩大试验研究。研究结果表明,在现场温度为5~24℃、吸附尾液中Fe^2+浓度为200~300 mg/L、通气量为59.0 m^3/h时,生物反应器的最大流量可达28.2 m^3/h,Eh(氧化还原电位)大于570 mV,尾液中Fe^2+在低温环境下可被快速完全氧化。该试验结果为细菌代替氧化剂氧化吸附尾液中Fe^2+的拓展应用提供了借鉴意义。

天山一号冰川产低温β-半乳糖苷酶菌株的筛选及其酶学特性

从天山中国一号冰川沉积层样品中,以蓝白斑法初筛、测低温下的相对酶活复筛,获得产低温β-半乳糖苷酶的菌株.通过两级筛选,获得产低温乳糖酶的菌株24株,其中菌株LW097所产β-半乳糖苷酶在低温下的相对酶活最高.进一步通过形态、生理生化试验及16S rDNA测序分析,将该菌株鉴定为嗜冷杆菌(Cryobacterium sp.).结果显示,该菌株在以4%(m/V)的乳糖为碳源,以胰蛋白胨+酵母浸粉为组合氮源的发酵培养基中,16℃培养84 h产酶酶活最高达2.12±0.09 U/mL.对该菌株所产β-半乳糖苷酶的酶学性质进行分析发现,其最适反应pH为6.0,最适反应温度为30℃,20℃相对酶活为72.4%,4℃时酶活性仍能保持62.7%;该β-半乳糖苷酶的低温稳定性较好,对热处理敏感,60℃处理4 h酶活几乎消失;1 mmol/L Na+和Ca2+对该酶活性基本无抑制作用.本研究表明菌株Cryobacterium sp.LW097所产β-半乳糖苷酶是典型的低温β-半乳糖苷酶,其酶学特性具备在乳品低温加工领域应用的潜力.