北京市农村人群及家畜嗜吞噬无形体和查菲埃立克体感染状况调查

目的调查北京市农村人群及家畜新发查菲埃立克体和嗜吞噬无形体感染状况。方法按地理位置选择北京市西北（延庆）、东北（密云）及东南（通州）地区3个植被率较高的旅游县（区）。按在册户籍随机以家庭为单位，调查并采集562人及90只山羊、71头牛和2只家犬血液标本，按WHO推荐间接免疫荧光方法（mIFA）检测血清IgG抗体。动物血球提取DNA扩增无形体16SrRNA基因并测序分析。结果人群查菲埃立克体和嗜吞噬无形体抗体阳性率分别为16．5％和14．0％；山羊和牛嗜吞噬无形体抗体阳性率分别为2．3％和0；2只家犬未检测到相应抗体。山羊、牛无形体16SrRNA扩增阳性率分别为48．9％和23．9％。16SrRNA序列（228bp）分析显示，3类优势流行株无明显地理分布特征。结论北京市农村人群存在查菲埃立克体和嗜吞噬无形体感染，调查地区家畜存在无形体感染。

嗜吞噬无形体Msp2蛋白与宿主互作靶蛋白筛选及生物信息分析

目的:筛选与嗜吞噬无形体Msp2蛋白互作的THP-1细胞靶蛋白,有助于理解病原体侵袭宿主的分子机理。方法:PCR获得无形体msp2基因克隆到pGBKT7载体上构建诱饵质粒并转化酵母菌株Y2HGold,营养缺陷培养基及蓝白斑实验验证诱饵质粒是否有自激活、毒性;抽提THP-1总RNA,经反转录、Long-distance PCR、同源重组等构建到pGADT7-Rec载体上并转化酵母菌株Y187,鉴定cDNA文库质量;酵母双杂交筛选与无形体Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,生物信息学分析蛋白互作可能导致的信号通路变化。结果:成功构建诱饵质粒;cDNA文库容量达4×106克隆,插入片段大小100-3000 bp,且无污染;酵母双杂交获得宿主靶蛋白7个,分别是NADH脱氢酶(泛醌)1α亚体13(NDUFA13)、锌指蛋白36, C3H样2(ZFP36L2)、核糖体蛋白11(RPL11)、前胸腺素α(PTMA)、C19orf10、组织蛋白酶G(CTSG)、核糖体蛋白S25(RPS25);生物信息学分析,互作的宿主靶蛋白主要参与细胞增殖、细胞凋亡、溶酶体成熟及其它一些信号通路等生物学过程。结论:应用酵母双杂交系统初步筛选出与嗜吞噬细胞无形体表面蛋白Msp2互作的宿主细胞靶蛋白,并利用生物信息学初步分析了其参与的生物学过程,为进一步研究病原菌胞内生存分子机制奠定了基础。

荧光定量PCR检测嗜吞噬细胞无形体

目的采用新型TaqMan—MGB探针建立检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR）方法。方法依据gltA基因序列设计嗜吞噬细胞无形体特异引物和探针，以克隆的嗜吞噬细胞无形体gltA基因片段作DNA模板。在荧光定量PCR检测仪（ABI 7900HT）上建立实时荧光定量检测方法。结果建立的定量标准曲线的循环闻值（Ct）与模板拷贝数呈良好的线性关系（r=0．996）；与套式PCR相比较，荧光定量PCR检测的灵敏度是其100倍。用荧光定量PCR检测其它相关立克次体和细菌DNA样本，检出结果几乎为0；对荧光定量PCR检测重复性进行分析，变异系数（CV）批内和批间误差在0-2．1％之间，证明该荧光定量PCR具有种特异性和良好的重复性。用荧光定量PCR检测体疑染嗜吞噬细胞无形体的10份蜱和30份小鼠脾脏标本，结果与套式PCR检测结果有密切相关性，但是定量PCR检测敏感性和准确率均高于套式PCR。结论本研究建立的检测嗜吞噬细胞无形体的实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性，特别适合检出样本中微量嗜吞噬细胞无形体。

湖北省随州市羊携带嗜吞噬细胞无形体的调查

目的调查湖北省随州市羊携带嗜吞噬细胞无形体的状况。方法运用聚合酶链反应方法对湖北随州市采集的羊血标本进行嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因片段进行扩增和序列分析,将扩增序列与GenBank相应基因序列进行同源性比较和进化分析。结果共检测羊血标本29份,阳性标本25份,嗜吞噬细胞无形体阳性感染率为86.2%;所检出的嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因(1 442 bp)与GenBank中收录的部分嗜吞噬细胞无形体16s rRNA基因序列的同源性高达97.1%～99.8%,进化分析显示与嗜吞噬细胞无形体同在一个分支上。结论湖北随州地区山羊存在嗜吞噬细胞无形体的感染。

湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体的调查

目的调查湖北省长角血蜱是否携带嗜吞噬细胞无形体。方法运用聚合酶链反应方法对湖北随州地区采集的蜱标本进行嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因片段进行扩增和序列分析,将扩增序列与GenBank注册的基因序列进行比较。结果共检测游离蜱72只,蜱种鉴定均为长角血蜱,嗜吞噬细胞无形体最小感染率为4.22%;所检出的嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因与我国已在GenBank注册的24个相对应序列同源性100%。结论湖北省长角血蜱携带嗜吞噬细胞无形体。

浙江磐安地区啮齿动物嗜吞噬细胞无形体感染研究

目的调查浙江省磐安地区啮齿动物无形体属嗜吞噬细胞无形体的自然感染状况,了解其分子生物学特性。方法在浙江省磐安地区低山田地里捕获多种啮齿动物230只(黄胸鼠、社鼠、褐家鼠、小林姬鼠、黄毛鼠、青毛鼠、大林姬鼠、白腹巨鼠、针毛鼠、黑线姬鼠和松鼠);解剖取肝脾;提取DNA,用巢式PCR扩增无形体属16SrRNA片段;PCR产物测序,并进行Blast同源性比较,最后采用MEGA4.0软件与GenBank登录的其它无形体属种株进行系统发生分析。结果 230只啮齿动物中,1只黄胸鼠、1只褐家鼠和2只白腹巨鼠肝脾标本检出无形体属16SrRNA片段,磐安地区野鼠无形体属立克次体的自然感染率为1.7%。3份阳性标本PCR产物测序,序列比对分析表明,从褐家鼠同时检出分别与嗜吞噬细胞无形体和浙江无形体株ZJ05/2009完全一致的序列,黄胸鼠和1只白腹巨鼠的序列与浙江无形体株ZJ05/2009完全一致。结论浙江省磐安地区野鼠检出致病性无形体属核酸,存在无形体属不同种株的复合感染感染。提示可能存在无形体病自然疫源地,需要进一步密切关注致病性无形体的人群感染情况。

北京东北部山区人群嗜吞噬细胞无形体血清流行病学调查

目的了解北京东北部山区人群嗜吞噬细胞无形体的感染状况,为制定相应的防控策略提供依据。方法在北京密云与怀柔区采集人群血清,采用间接免疫荧光法检测嗜吞噬细胞无形体IgG抗体,进行血清流行病学调查。结果 801份血清中嗜吞噬细胞无形体IgG抗体阳性者106份,阳性率13.23%,其中密云区为13.48%,怀柔区为12.70%,差异无统计学意义(P>0.05)。结论北京密云与怀柔区正常人群中均有嗜吞噬细胞无形体感染的存在,应加强人粒细胞无形体病的监测和防控工作。

嗜吞噬细胞无形体的分子检测技术研究进展

嗜吞噬细胞无形体(AP)主要引起人类经蜱叮咬传播的人粒细胞无形体病(HGA)。快速、准确的针对HGA的检测技术能够有效地控制其爆发,减少死亡病例。目前AP感染的诊断方法有临床诊断、血清学诊断、形态学诊断、分子生物学诊断等。其中AP分子检测技术特异性高、操作简便,快速,是目前对AP感染诊断的常用方法。针对AP分子检测主要方法包括巢式PCR(nested PCR)、实时定量荧光PCR(real time PCR)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。三类分子检测技术各有优缺点,应根据具体情况选用适当的检测手段,提高AP感染的早期诊断准确率。

牡丹江镜泊湖区蜱中伯氏疏螺旋体与嗜吞噬细胞无形体感染的研究

目的了解牡丹江镜泊湖区伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无形体的感染情况。方法运用聚合酶链方法(PCR)对牡丹江镜泊湖区采集的蜱标本,进行伯氏疏螺旋体5S^23S基因间隔区基因片段与嗜吞噬细胞无形体柠檬酸盐合成酶基因(glt A)片段的检测。结果 2013年5月,在牡丹江镜泊湖北湖区附近共采集嗜群血蜱和全沟硬蜱643只,其中嗜群血蜱573只,占89.11%;全沟硬蜱70只,占10.89%。嗜群血蜱和全沟硬蜱伯氏疏螺旋体感染率分别为0.17%和15.71%,嗜吞噬细胞无形体感染率分别为0和2.86%;全沟硬蜱中伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无形体的复合感染率为1.43%。结论牡丹江镜泊湖区采集的蜱中检测到伯氏疏螺旋体和嗜吞噬细胞无形体的感染,并在全沟硬蜱中检测到复合感染情况,但复合感染的感染率较低。

新疆地区人嗜吞噬细胞无形体病的人群血清流行病学调查

为了解人嗜吞噬细胞无形体病在新疆地区的流行状况，本研究采集和硕、石河子、博乐三地区居民与农林牧工作者血液样本，利用间接免疫荧光法对嗜吞噬细胞无形体特异性IgG滴度水平进行检测，对结果进行统计学分析。共检测血清442份，平均阳性率43．7％（193／442），其中和硕、石河子与博乐地区依次为42．6％（55／129），35．2％（63／179）和56．0％（75／134）。不同地区、不同职业、居住工作所在的生态地理环境中的人群抗体阳性率存在差异（X^2=13．524，P=0．001；X^2=49．129，P=0．000；X^2=14．397，P=0．001），而年龄、性别与民族因素与阳性率差异无关（X^2=8．023，P=0．236，X2=0．778，P=0．378，X^2=6．869，P=0．076）。综上所述，新疆上述三地区中农林牧工人感染嗜吞噬细胞无形体的情况较为普遍。

3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白原核表达及免疫原性差异性研究

目的研究分析3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白的免疫原性。方法利用原核表达PCR扩增了嗜吞噬细胞无形体Webster株,斯洛文尼亚1 567株,美国96HE58株ankA基因部分序列,构建pET-30a-AnkA表达载体,转化至大肠杆菌BL21中,以IPTG诱导高效表达融合蛋白,经飞行质谱鉴定氨基酸序列,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。Western blot分析3株菌AnkA重组蛋白与免疫小鼠血清抗体相互间的免疫反应以及交叉反应性。同时检测3株菌AnkA重组蛋白与我国无形体病人血清抗体反应性。结果表达的重组蛋白主要以可溶性形式存在,小鼠免疫获得高效价抗AnkA IgG抗体,3株菌重组蛋白免疫抗体间存在免疫交叉。3株菌重组蛋白与我国无形体病人血清抗体存在免疫反应。结论成功原核表达并纯化了3株嗜吞噬细胞无形体AnkA蛋白,重组蛋白与我国无形体病人阳性血清存在免疫反应。3株嗜吞噬细胞无形体AnkA重组蛋白与免疫小鼠多克隆抗体间存在交叉反应。

嗜吞噬细胞无形体的致病机制的研究进展

嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum,APH)是重要人兽共患病——人粒细胞无形体病(HGA)的病原体。APH专性侵染哺乳动物中性粒细胞,入侵后在细胞内形成包涵体逃逸溶酶体酶的杀伤,APH同时破坏宿主细胞的凋亡和自噬,并抑制宿主细胞的氧化反应等杀菌活性。APH通过一系列毒力分子表达影响宿主细胞,使其在宿主细胞内有效生存和繁殖,最终导致机体感染的发生。

嗜吞噬细胞无形体msp4蛋白的生物信息学分析及表达鉴定

分析预测嗜吞噬细胞无形体msp4蛋白的抗原性,对嗜吞噬细胞无形体的msp4蛋白采用生物信息学对其进行分析二级结构,亲水性,疏水性,B细胞线性表位;根据分析的优势抗原表位区,进行基因合成并亚克隆至p ET32a表达载体,在大肠埃希菌中获得重组蛋白。生物信息学分析结果显示msp4蛋白由283个氨基酸组成,分子量为29.8 ku,理论等电点为6.05,不稳定系数为32.79,总平均疏水性为0.063;二级结构预测msp4蛋白主要以无规卷曲、延伸链、α-螺旋为主;B细胞表位预测msp4蛋白有14个线性表位;根据分析的结果选取msp4蛋白亲水性高的膜外区的28-158位序列克隆至p ET32a进行原核表达,在34 ku出有目的蛋白的表达。成功对嗜吞噬细胞无形体的msp4蛋白原核表达及纯化,为无形体病血清学检测方法的建立奠定了物质基础。

嗜吞噬细胞无形体ZJ-msp4基因的生物信息学分析

为了利用生物信息学预测嗜吞噬细胞无形体ZJ-msp4蛋白的优势抗原表位,给寻找无形体病诊断和预防的候选抗原表位提供参考,试验参照Gen Bank中的msp4基因序列(登录号为EU008082.1)进行生物信息学分析。结果表明:ZJ-msp4蛋白的分子质量为30.1 ku,理论等电点为5.71,该蛋白的不稳定系数为29.13,组成较多的氨基酸有丝氨酸(Ser,13.8%)、甘氨酸(Gly,9.2%)、丙氨酸(Ala,8.9%)等;二级结构预测ZJ-msp4蛋白主要以无规卷曲、延伸链、α螺旋为主,TMHMM2.0预测该蛋白的第7~29位氨基酸可能为跨膜区,该跨膜区可能为信号肽序列;Signal P 4.1预测在msp4蛋白的N端第1~29位氨基酸序列为信号肽序列,该分析结果与TMHMM2.0分析结果一致;B细胞表位预测该msp4蛋白有11个线性表位,其中以28~38位、64~77位、87~101位、134~143位、245~264位是ZJ-msp4蛋白的优势抗原表位区段,可以作为诊断无形体病的候选表位。

嗜吞噬细胞无形体对宿主细胞影响研究进展

嗜吞噬细胞无形体是一种革兰阴性菌,专性细胞内寄生,可经蜱传播。主要侵染宿主的髓系细胞和非髓系细胞,引起动物蜱传热病和人粒细胞无形体病。论文总结了近年来与嗜吞噬细胞无形体入侵宿主细胞相关的蛋白质,如主要表面蛋白MSP2、外膜蛋白OmpA、嗜吞噬细胞无形体表面蛋白AipA等的研究成果,以及该病原菌进入宿主细胞后引起的宿主细胞的变化,如激活一系列蛋白激酶、抑制氧化反应和炎症反应、干扰自噬作用等影响及其可能的机制。关于嗜吞噬细胞无形体,还有很多领域的问题亟待研究解决,国内外许多学者致力于研究该病原菌与宿主细胞的互作,以期找出嗜吞噬细胞无形体如何影响宿主细胞的信号传导和相关基因的表达,从而逃避宿主免疫系统并在其中正常生存的机制。

嗜吞噬细胞无形体研究进展

本文重点阐述了嗜吞噬细胞无形体Anaplasmaphagocytophilum的病原学、生态学方面的研究进展：简要介绍了人群中嗜吞噬细胞无形体感染流行的特征、主要临床特点和治疗要点；概括了嗜吞噬细胞无形体感染的预防控制手段；分析了嗜吞噬细胞无形体相关研究存在的一些不足及其今后的研究方向。

牛东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体的流行病特征及诊断方法研究进展

牛东方泰勒虫是由泰勒科泰勒属的东方泰勒虫寄生于牛体内的一种血液原虫;嗜吞噬细胞无形体是一种革兰阴性菌,专性细胞内寄生,主要侵染宿主的髓系细胞和非髓系细胞,引起人粒细胞无形体病。论文总结近年来对牛东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体分子流行病的研究,如致病特征和诊断方法的研究成果,并对文献进行分析,关于牛东方泰勒虫与嗜吞噬细胞无形体的分子流行病的研究,还有很多领域的问题亟待研究解决,由于前期研究提示不同地域来源的病原体具有不同的遗传进化背景,可能具有不同的致病特征和诊断方法,我们需要进一步研究各地牛东方泰勒虫和嗜吞噬细胞无形体的流行病特征和适宜的诊断方法的进展。

甘肃、湖南和广东三省蜱体内嗜吞噬细胞无形体与伯氏疏螺旋体共感染研究(英文)

目的嗜吞噬细胞无形体和伯氏疏螺旋体是由媒介蜱传播的引起人粒细胞无形体病和莱姆病的病原。目前,对两种病原在蜱体内共感染流行情况的研究相对较少。方法以甘肃、湖南和广东三个省采集到3个蜱种、共543份样品为研究对象,检测嗜吞噬细胞无形体和伯氏疏螺旋体在蜱体内的感染情况。结果嗜吞噬细胞无形体和伯氏疏螺旋体在不同地区采集到的蜱体内的感染率不同,分别为3.2%～20.0%和2.3%～19.3%。在检测的样品中,共发现有7份样品中同时感染嗜吞噬细胞无形体和伯氏疏螺旋体。青海血蜱、血红扇头蜱和微小牛蜱中均检测到这两种病原。结论青海血蜱、血红扇头蜱和微小牛蜱均能够携带嗜吞噬细胞无形体和伯氏疏螺旋体,可能为这两种病原在自然界的持续存在和循环提供了条件。此研究结果丰富了人粒细胞无形体病和莱姆病的流行病学信息,有利于提高这两种病的防控策略。

嗜吞噬细胞无形体病分子生物学诊断方法的研究进展

嗜吞噬细胞无形体主要侵染宿主成熟或未成熟的髓系白细胞,是蜱传疾病的病原体。主要感染放牧牛群,舍饲牛群较少发,并有明显的季节性。对全球的养牛业经济造成严重的影响。本文就当前常用的嗜吞噬细胞无形体分子检测方法作一综述。

嗜吞噬细胞无形体致病机理的研究进展

嗜吞噬细胞无形体是一种侵染中性粒细胞专性细胞内寄生的革兰阴性菌,其所致疾病为人粒细胞无形体病(HGA),是一种经蜱传播的人兽共患病。它感染中性粒细胞后可诱发机体产生炎症免疫反应,最终导致免疫抑制及潜在疾病引起的各种继发感染和器官衰竭,甚至危及生命。近年来该病原体日益受到人们的关注和重视。就嗜吞噬细胞无形体致病机理研究的进展进行了综述。