植物病原真菌嗜水小核菌中dsRNA5和dsRNA8的克隆与序列分析

为探究水稻嗜水小核菌中发现的病毒与真菌的相互作用以及明确其是否可用于病原真菌的生物防治,采用修改的单引物拉增法(M-SPAT)对嗜水小核菌[HZ11]菌丝体和病毒粒子(VPL)中分离的10条双链RNA(dsRNA)片段的RNA5和RNA8进行克隆,并对这些克隆产物进行测序和分析。结果表明,dsRNA5的长度为2038 bp,编码RNA依赖RNA聚合酶(RdRp);dsRNA8的长度为1809 bp,编码外壳蛋白(CP);系统进化分析表明,dsRNA5蛋白和dsRNA8蛋白分别与双分病毒科α病毒属的RdRps和CP高度相近,这两条ds RNA的5'-非翻译区(UTR)包含保守序列5'-GAA(G)T-3'、5'-TTTTCTA(/CG)CCTC(/A)GATAT(A)AAATA(CG)GAA-3'和5'-AAACG(A)AA(G)TC(A)TTACCTCT-3';3'-UTR包含保守序列5'-AAAAAAAA-3',5'-AAAAAG(A)AAAAAAAAAAAAC(A)4A-3'和5'-AAA-3'。表明ds RNA5和dsRNA8属于一种新的α病毒的基因组,推定的新病毒被暂命名为嗜水小核菌病毒3(ShV3);嗜水小核菌分离物dsRNA5和dsRNA8分别对应于ShV3的dsRNA1和dsRNA2。

广西水稻上嗜水小核菌的鉴定及系统发育研究

从类似纹枯病的水稻病株上分离到一种在菌核形态上与纹枯病菌（Rhizoctonia solani）有明显差异的真菌,致病性测定结果表明该菌能侵染水稻、玉米和大豆。对该菌的显微形态、生物学特性以及核糖体DNA-ITS序列进行研究,结果表明该菌为嗜水小核菌（Sclerotium hydrophilum Sacc.）。病菌在30℃、pH为6-9条件下生长表现最佳,属硫胺素自养型菌;营养菌丝与立枯丝核菌相似,菌核球形或椭圆形,数量极多,其平均大小仅为386.4μm×420.7μm;该菌的核糖体DNA-ITS序列与GenBank中唯一一个嗜水小核菌（登录号为DQ875597）的同源性为99.5%,并且与大多数丝核菌（Rhizoctonia spp.）也有一定的同源性,病菌的28S rDNA-RFLP分析结果进一步说明了该菌在系统发育上与丝核菌类真菌具有较高的同源性。通过比较该菌和几种与水稻纹枯病相关丝核菌核糖体DNA-ITS序列的差异,设计了一对特异性引物PS-1和PS-2,能专一地从被该菌侵染的水稻感病组织中扩增出一段约550bp的DNA。