利用实时定量PCR研究不同蛋白质饲料对嗜淀粉瘤胃杆菌生长参数的影响

本试验主要研究不同蛋白质饲料对嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)生长的影响。选用4只装有瘤胃瘘管的徐淮白山羊羯羊,分别饲喂以羽毛粉、玉米蛋白粉、豆粕和鱼粉为蛋白质补充料的4组日粮,进行4×4拉丁方设计的试验,并采用实时定量PCR(RT-PCR)技术对嗜淀粉瘤胃杆菌进行定量分析。结果表明,豆粕组瘤胃氨氮浓度最高,并显著高于其他3组(P<0.05);细菌总数在组间差异不显著(P>0.05);嗜淀粉瘤胃杆菌的密度及其数量在细菌总数中的比例均以豆粕组最高,且组间差异显著(P<0.05)。总之,豆粕饲料适宜于嗜淀粉瘤胃杆菌的生长,RT-PCR技术适用于瘤胃微生物的定量研究。

山羊瘤胃嗜淀粉瘤胃杆菌16S rDNA序列体外扩增鉴定

以嗜淀粉瘤胃杆菌(Ruminobacter amylophilus)为目的菌种,依其16SrDNA序列(Y15992)设计特异引物,进行PCR扩增,并测序后进行同源性分析。结果表明,特异性引物成功扩增出的嗜淀粉瘤胃杆菌DNA的特异性片段,与基因库中原序列具有较高的同源性(96.9%)。说明利用这种方法可以对山羊瘤胃微生物进行鉴定和分析。

嗜淀粉瘤胃杆菌细胞膜联新支链淀粉酶的鉴定(英文)

位于厌氧菌嗜淀粉瘤胃杆菌细胞膜上的一种膜联淀粉酶不能被高盐溶液提取,但能够被4%TritonX 100溶液提取.当其酶保存在4%Triton溶液中,其酶活性比保存在0.01%Triton溶液中稳定.当用支链为底物时,其酶催化的最终产物是藩糖,所以此种膜联淀粉酶应该是新支链淀粉酶.

体外培养条件下氨基酸对瘤胃蛋白质降解菌生长限制性的影响

本试验旨在研究体外培养条件下氨基酸对瘤胃蛋白质降解菌[嗜淀粉瘤胃杆菌(R.amylophilus)、溶纤维丁酸弧菌(B.fibrisolvens)和栖瘤胃普雷沃氏菌(P.ruminicola)]生长限制性的影响。以4头安装永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊为瘤胃液供体,采用人工模拟山羊瘤胃发酵装置进行培养。通过特定氨基酸缺省的方法,设定5个组:全量氨基酸组、蛋氨酸缺省组、赖氨酸缺省组、支链氨基酸缺省组以及芳香族氨基酸缺省组。结果表明:特定氨基酸缺省对嗜淀粉瘤胃杆菌、溶纤维丁酸弧菌和栖瘤胃普雷沃氏菌的生长限制性作用有所差异。特定氨基酸的缺省对嗜淀粉瘤胃杆菌、溶纤维丁酸弧菌和栖瘤胃普雷沃氏菌的生长限制性作用(相对于全量氨基酸组)排序分别为芳香族氨基酸>赖氨酸>支链氨基酸>蛋氨酸;赖氨酸>芳香族氨基酸>支链氨基酸>蛋氨酸;支链氨基酸>芳香族氨基酸>蛋氨酸>赖氨酸。由此得出,在体外培养条件下,氨基酸缺省将影响瘤胃蛋白质降解菌的生长。

氨基酸模式对体外培养瘤胃主要蛋白质降解菌的影响

本研究以4头装有永久性瘤胃瘘管的徐淮山羊为试验动物,利用体外培养法研究了不同氨基酸模式对瘤胃内主要蛋白质降解菌的影响。研究结果表明不同氨基酸模式对不同菌种的作用有所差异:试验组C的氨基酸组成(Lys16.2%、Met5.4%、Thr12.5%、His5.0%、Arg10.2%、Try4.2%、Leu14.7%、Ile10.6%、Phe10.7%、Val10.5%)对嗜淀粉瘤胃杆菌和栖瘤胃普雷沃氏菌的促进生长效应最高;而试验组B的氨基酸组成(Lys16.0%、Met5.4%、Thr11.9%、His4.5%、Arg10.2%、Try3.5%、Leu15.5%、Ile11.1%、Phe10.5%、Val11.5%)对溶纤维丁酸弧菌的促进生长效应最高。

建立实时荧光定量PCR方法监测运输应激对肉牛3种瘤胃细菌的影响

旨在建立一种有效的定量方法监测肉牛在运输前后瘤胃内3种主要细菌的变化,本试验选用8头体质量相近的健康夏南牛,在运输前、运输中6h、运输后1、3、7、15d时间段采集瘤胃液。分别以黄化瘤胃球菌、嗜淀粉瘤胃杆菌、脂解厌氧弧杆菌的16SrRNA序列设计引物,运用Real-time PCR技术研究运输应激对肉牛以上3种瘤胃微生物的影响。结果显示,与运输前相比,黄化瘤胃球菌在运输中6h、运后1d浓度显著升高(P<0.05)。嗜淀粉瘤胃杆菌在运后3d浓度升高到运输前的13.86倍,随后逐渐降低,15d时为运输前8.42倍。脂解厌氧弧杆菌在运输后3d数量出现极显著的降低(P<0.05),在7、15d逐渐恢复。结果表明,运输应激对黄化瘤胃球菌影响不大;脂解厌氧弧杆菌在运输应激后出现显著的降低,运输后半月内逐渐恢复正常水平。嗜淀粉瘤胃杆菌则呈现明显的上升趋势。采用Real-time PCR方法对瘤胃细菌进行定量可以快速有效的反映出运输应激对菌的数量变化趋势。