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嗜热厌氧乙醇菌JW200转化条件的研究 被引量:5
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作者 彭惠 傅百灵 +1 位作者 毛忠贵 邵蔚蓝 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第11期59-61,共3页
嗜热厌氧乙醇菌遗传转化系统的缺少,制约了对该菌理论基础和应用领域的进一步研究。利用聚乙二醇(PEG6000)转化和电转化技术,国际上首次实现了嗜热厌氧乙醇菌JW200外源基因的导入。PEG转化效率很低,因此选择对电转化条件进行优化,转化... 嗜热厌氧乙醇菌遗传转化系统的缺少,制约了对该菌理论基础和应用领域的进一步研究。利用聚乙二醇(PEG6000)转化和电转化技术,国际上首次实现了嗜热厌氧乙醇菌JW200外源基因的导入。PEG转化效率很低,因此选择对电转化条件进行优化,转化效率从4±3.2个转化子/μg质粒DNA提高到50±7.4个转化子/μg质粒DNA。实验表明获得较高的转化效率的必要条件是在细胞密度为OD6600.2时添加甘氨酸与蔗糖后,继续培养2h以及细胞在电击前的收集与洗涤保持低温。实验为利用基因工程手段改造嗜热厌氧乙醇菌,从分子水平研究胞内乙醇代谢途径奠定了基础。 展开更多
关键词 转化 电转化 条件优化 嗜热厌氧乙醇菌
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嗜热厌氧乙醇菌JW200中乙醛脱氢酶的纯化 被引量:5
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作者 彭惠 毛忠贵 +1 位作者 武国干 邵蔚蓝 《南京师大学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期78-81,共4页
研究了嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中乙醇代谢途径的关键酶之一乙酰CoA依赖型的乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH,EC 1.2.1.10)的纯化.结果表明,经DEAE Sepha-rose Fast Flow阴离子交换层析、两次... 研究了嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus)JW200中乙醇代谢途径的关键酶之一乙酰CoA依赖型的乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH,EC 1.2.1.10)的纯化.结果表明,经DEAE Sepha-rose Fast Flow阴离子交换层析、两次为30%与80%硫酸铵盐析和相应盐浓度的Butyl-HIC疏水层析、TOYOPE-ARL HW-55F分子筛层析等提纯步骤,可得到电泳纯的ALDH,其提纯倍数为910倍,得率为7%.由SDS-PAGE和梯度PAGE测得全酶由4个亚基组成,全酶相对分子质量为360 000,亚基相对分子质量为100 000. 展开更多
关键词 乙醛脱氢酶 嗜热厌氧乙醇菌 纯化
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嗜热厌氧乙醇菌在纤维素酒精生产中的作用 被引量:3
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作者 方治国 欧阳志云 《环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期752-758,共7页
以热纤维梭菌(Clostridium thermocellum LQRI)和嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus X514和Thermoanaerobacter pseudoethanolicus 39E)为对象,以不同浓度纤维素Avicel为底物,研究嗜热厌氧乙醇菌加入LQRI纯培养体系后对纤... 以热纤维梭菌(Clostridium thermocellum LQRI)和嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacter ethanolicus X514和Thermoanaerobacter pseudoethanolicus 39E)为对象,以不同浓度纤维素Avicel为底物,研究嗜热厌氧乙醇菌加入LQRI纯培养体系后对纤维素酒精浓度和终产物分布的影响.结果表明,加入X514或39E后培养液中乳酸盐浓度急剧上升,后者乳酸盐浓度明显高于前者(**p<0.01,差异显著),其最高值分别约为15.5mmol·L-1和13.8mmol·L-1,而乙酸盐浓度的变化特征与对照没有显著差异,总体呈下降趋势;对照和加入39E后培养液中还原性糖浓度一直呈上升趋势,其最高值分别约为2837.5μg·mL-1和2254.1μg·mL-1,而加入X514后培养液中还原性糖浓度急剧下降,其最低值约为466.7μg·mL-1;加入X514或39E后,培养液的酒精浓度就明显高于对照(**p<0.01),此后加入X514的处理培养液酒精浓度呈急剧上升趋势,其增加幅度明显高于加入39E的处理,其最高值分别约为64.1mmol·L-1和20.0mmol·L-1.此外,分别以1%和2%Avicel为底物进行试验,其实验结果和趋势基本相同,进一步证实了在LQRI纯培养体系中加入X514或39E后会促进体系的发酵作用.X514不仅可以利用六碳糖,而且还可以发酵五碳糖生产酒精,提高体系酒精的生产能力. 展开更多
关键词 纤维梭 嗜热厌氧乙醇菌 酒精生产能力 终产物分布
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嗜热厌氧乙醇杆菌组氨酸融合双活性乙醇脱氢酶的克隆、表达和酶学性质 被引量:1
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作者 蒋宇 邵蔚蓝 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期15-19,共5页
乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从T.ethanolicusJW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组... 乙醛脱氢酶和乙醇脱氢酶是嗜热厌氧乙醇菌Thermoanaerobacter ethanolicus乙醇代谢途径中的关键酶。根据高同源性的NADP(H)依赖型Ⅱ型乙醇脱氢酶(S-ADH)的序列设计引物,从T.ethanolicusJW200基因组中PCR扩增出编码S-ADH的基因,插入带组氨酸标签的pET-20(b),测序获得基因大小为1 059 bp,并在大肠杆菌JM109(DE3)中表达。表达产物经Ni亲和柱提纯达电泳纯。带组氨酸标签的重组NADP(H)依赖型乙醇脱氢酶具乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶双活性,能将乙酰辅酶A转化成乙醇.带组氨酸标签的重组酶酶学性质为乙醛脱氢酶活性最适值为pH 8.4,最适温度70℃;乙醇脱氢酶活性正、逆反应分别最适pH 8.0,最适T 55℃;最适pH8.9,最适为T 60℃。以乙酰辅酶A(Aceyl-CoA)为底物,该酶的Km为3.32 mmol/L,Vmax为12.5μmol/(min.mg)。T.ethanolicusJW200中双活性S-ADH的首次发现,建立了该菌乙醇代谢途径中从乙酰辅酶A到的乙醇的另一条通路。 展开更多
关键词 嗜热厌氧乙醇菌 双活性 乙醛脱氢酶 乙醇脱氢酶
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热纤维梭菌不同菌株的纤维素降解和酒精生产能力 被引量:1
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作者 方治国 欧阳志云 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第8期1926-1931,共6页
以高温厌氧细菌热纤维梭菌(Clostridium thermocellum LQRI和VPI菌株)和嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacterethanolicus X514和39E菌株)为对象,以不同浓度纤维素为底物,分析了热纤维梭菌不同菌株的纤维素降解和酒精生产能力.结果表明,... 以高温厌氧细菌热纤维梭菌(Clostridium thermocellum LQRI和VPI菌株)和嗜热厌氧乙醇菌(Thermoanaerobacterethanolicus X514和39E菌株)为对象,以不同浓度纤维素为底物,分析了热纤维梭菌不同菌株的纤维素降解和酒精生产能力.结果表明,在热纤维梭菌纯培养体系中,LQRI对纤维素的降解能力明显高于VPI,前者约为后者的1.2倍,但两者的酒精生产能力没有显著差异,LQRI在1%纤维素条件下酒精终浓度约为12 mmol/L,VPI约为10 mmol/L.随着底物纤维素浓度的增加(1%、2%、5%),两者对纤维素降解和酒精生产能力均呈明显下降趋势.在热纤维梭菌和嗜热厌氧乙醇菌混合培养体系中,LQRI对纤维素的降解能力明显高于VPI,前者约为后者的1.28~1.58倍.随着底物浓度的增加,两者的纤维素降解率均逐渐下降,但热纤维梭菌对纤维素降解的绝对数值还受到其它混合培养菌种的影响.此外,LQRI+Thermoanaerobacter混合培养体系的酒精生产能力明显高于VPI+Thermoanaerobacter,前者约为后者的1.27~1.77倍.随着底物浓度的增加,混合培养体系酒精生产能力没有明显下降趋势. 展开更多
关键词 纤维素酒精 纤维梭 嗜热厌氧乙醇菌 纤维素降解 酒精生产能力
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Research on the Nature of Thermophilic Anaerobic Ethanol Producer Thermo anaerobacter sp DF3 in Petroleum Reservoirs
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作者 兰贵红 邢钰 +5 位作者 曹毅 乔代蓉 邹长军 邓宇 张辉 尹小波 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2012年第1期53-56,共4页
[Objective] The aim was to study the physiological and biochemical char- acteristics of Thermoanaerobacter sp DF3 in petroleum reservoirs and optimize the culture plan of producing ethanol from xylose. [Method] DF3, a... [Objective] The aim was to study the physiological and biochemical char- acteristics of Thermoanaerobacter sp DF3 in petroleum reservoirs and optimize the culture plan of producing ethanol from xylose. [Method] DF3, an anaerobic bacillus producing ethanol, was isolated from produced liquid from oil layer of Dagang oil field with anaerobic isolation technique. The phylogenetic position was analyzed by physiological and biochemical identification and phylogeny of 16S rDNA sequence. The metabolites were analyzed by gas chromatograph. [Result] The strain DF3 was a strict anaerobic thermophilic bacterium, which was straight in rod shape,and gram negative. Besides, it was 0.42 μmx(1.60-5.20) iJm in length. The strains can be soli- tary,in pairs or string and apical spore usually produced. Its growth temperature was 45-78 and 65 ℃ was the optimum. Many substances could be used as carbon sources, including glucose, xylose, fructose, ribose, mannose, arabinose, sucrose, galactose, lactose, cellobiose, melizitose, raffinose-, and starch. The similarity between strain DF3 and T. pseudoethanolicus achieved 99.7%. The main product of glucose and xylose fermentation was ethanol. After the culture plan was optimized,the final concentration of ethanol was 2.0 g/L. [Conclusion] It was proved through experiments that the strain DF3 was one of the strains with higher activity to produce ethanol at present and it could produce 2.0 g/L ethanol from xylose metabolization at 65 ℃. It has been demonstrated that DF3 is one of the known strains with high-production to produce ethanol,for example, 2.0 g/L ethano at 65℃. Presently, all the high-yield ethanol can be produced from metabolic xylose strains of metabolic xylose were isolat- ed by foreign countries, therefore, isolation of strain DF3 has provided an excellent original strain for studying ethanol production from lignocellulose in China. 展开更多
关键词 Thermophilic anaerobe XYLOSE ETHANOL
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