嗜热噬菌体TSP4的一种非通读转录现象

转录是生物体基本的生命现象,原核生物的转录普遍存在"通读"的现象,多个ORF(Open Reading Frame)共同转录形成一条多顺反子mRNA.在转录时,当一次转录终止后,转录复合物解体,RNA聚合酶需要再次识别模板DNA上的启动子区并与之结合形成转录复合物才能启动下一次转录.然而,在研究嗜热噬菌体TSP4基因组中间隔仅8个残基的两个ORF(ORF47和ORF46)的转录时发现,这两个ORF的转录并没有得到一条与这两个ORF对应的mRNA,而是分别转录出两个独立的mRNA.对这一段DNA序列的基因克隆表达结果表明,仅有ORF47表达出蛋白.可见RNA聚合酶对这两个ORF的转录不是通读,而是被它们之间的长度仅为8 bp间隔序列所中断并独立转录成两个mRNA.嗜热噬菌体TSP4的独特非通读转录现象是否与其基因组小、结构紧凑以及调控机制相对简单有关,值得进一步研究.

腾冲热海嗜热噬菌体的分离及特征研究

从腾冲热海温泉中分离嗜热噬菌体,并初步分析其特征。采用双层平板法分离纯化嗜热噬菌体,对分离得到的噬菌体进行电镜形态观察和生理生化分析。结果从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体为长杆状;其感染宿主菌NJ2形成清晰的噬菌斑,最适感染温度为55℃,最适感染pH值为7.5。该噬菌体对氯仿不敏感;但其对非离子去垢剂SDS和对蛋白酶K敏感。将这株噬菌体命名为嗜热芽孢杆菌杆状噬菌体TBRP3(Thermophilic bacillus rod-shaped phage 3)。

嗜热芽孢杆菌噬菌体的分离及特征研究

目的:从腾冲热海温泉中分离嗜热芽孢杆菌噬菌体,并初步分析其特征。方法:采用双层平板法分离纯化嗜热芽孢杆菌噬菌体,对分离得到的噬菌体进行电镜形态观察,按照感染复数(MOI)分别为0.01、0.1、1.0、10和100加入噬菌体纯培养液和宿主菌,55℃、160 r/min培养8 h后测定噬菌体滴度,并进行噬菌体的热稳定性和pH稳定性分析。结果:从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体为二十面体型;其感染宿主菌NHH4形成清晰的噬菌斑,最适MOI为1.0,最适感染温度为55℃,最适感染pH值为7.5。将这株噬菌体命名为TBIP1。结论:从腾冲热海温泉中分离得到的噬菌体TBIP1为典型的二十面体型,当MOI为1.0时,TBIP1感染其宿主菌产生的子代噬菌体滴度最高。

嗜热链球菌抗噬菌体菌株的富集培养

研究了在乳清培养基中添加不同营养物质对嗜热链球菌抗噬菌体菌株生长的影响,进一步采用正交实验优化筛选了其乳清发酵培养基。结果表明:在乳清培养基中添加番茄汁、乳清蛋白水解物可显著促进嗜热链球菌抗噬菌体菌株的生长,利用L934正交实验筛选出培养基的最佳配比为:乳清500 m L/L,酵母膏2.5 g/L,抗坏血酸0.5 g/L,酪蛋白胨10.0 g/L,葡萄糖10.0 g/L,番茄汁60 m L/L,乳清蛋白水解物4.0 g/L;实验菌株在此培养基中经培养条件优化,活菌数可达8.6×1010m L-1,较对照乳清培养基的活菌数提高71.67倍。

保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌融合子,采用单亲灭活及正交分析方法,研究了保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合条件。结果表明:保加利亚乳杆菌原生质体制备的最适条件是以磷酸盐缓冲液和甘露醇制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,1.0 mg/m L的溶菌酶36℃处理30 min,原生质体的形成率为(89.02±2.31)%,再生率为(4.62±0.22)%。嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体制备的最适条件是以Tris-HCl和蔗糖制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,0.1 mg/m L的溶菌酶42℃处理30 min,原生质体的形成率为(99.15±0.23)%,再生率为(5.79±0.17)%。单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体融合的最适条件为聚乙二醇6000(质量浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)40℃促融2 min,融合率可达(1.85±0.12)×10-6。所得融合子各项性能优良,适合于酸奶生产。

单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株融合子的选育

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌酸奶生产菌株,将生产用保加利亚乳杆菌制备原生质体后高温灭活,灭活后的原生质体与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体通过PEG6000诱导进行融合,并对融合子性能进行研究。结果从20株融合子中挑选出3株具有噬菌体抗性且发酵性能优良的乳酸菌融合子。融合条件为:以PEG6000(浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)为促融剂,40℃融合2 min。此条件下,融合率可达1.85×10-6。获得的融合子在凝乳、产酸、产粘性物质、产香气成分及抗噬菌体方面性能优越,适合于酸奶生产。

超高压对嗜热链球菌噬菌体灭活效果的研究

为研究超高压（HHP）对嗜热链球菌噬菌体的灭活效果，以3株嗜热链球菌噬菌体为对象，在不同压力、处理时间及初始菌数条件下进行超高压处理，并与传统热处理进行比较；通过观察处理前、后噬菌体结构的变化，探明超高压灭活机理。试验结果表明，压力400MPa下无明显灭活效果；压力600MPa处理10～20min，可将3株噬菌体全部杀灭。噬菌体ALQl3．2和DTl随初始菌数的下降，灭活效果逐渐增强；Abc2则无显著性差异。72qC、15S的传统热处理对噬菌体无明显灭活作用，而时间延长至5min，可将大部分噬菌体杀灭。3株噬菌体的耐压性与耐热性无相关性，其中ALQl3．2最耐压，DTl最耐热。电镜结果显示超高压处理前、后噬菌体的结构发生多种变化。

腾冲热海一株栖热菌裂解性噬菌体的分离及其特征

【目的】Thermus(栖热菌)属是嗜热细菌中比较古老的类群,本研究探索从腾冲热海热泉分离栖热菌噬菌体,并初步分析其特征。【方法】采用"双层平板法"从云南腾冲热海碱性热泉中分离纯化栖热菌噬菌体;对噬菌体及其宿主进行电镜形态观察,并进行噬菌体基因组限制性酶切片段多态性分析、噬菌体生理特征及蛋白组成分析。【结果】从腾冲热海热泉分离获得1株裂解性噬菌体,其宿主菌TC10通过16S rRNA基因序列分析鉴定为Thermus属菌株。此噬菌体为长尾型,头部直径67nm,尾管长837nm、宽10nm,最适感染温度为65℃-70℃,最适感染pH值为7.6,对氯仿不敏感,其形态与分离自俄罗斯勘察加半岛热泉的栖热菌噬菌体P23-45和P74-26有一定的差异,蛋白组成差异显著,为一株新的栖热菌噬菌体,命名为TTSP10(Tengchong Thermus Siphoviridae Bacteriophage)。