好氧堆肥高温期的嗜热真菌和嗜热放线菌群落结构

使用传统的培养方法和PCR-DGGE技术对好氧堆肥高温期的嗜热真菌和嗜热放线菌群落结构进行了研究.分别采用园林垃圾和餐厨垃圾作为堆肥原料,进行了20d好氧堆肥,高温期(≥50℃)持续了10d和8d.分别对2堆体高温期样品进行稀释平板混菌培养,真菌总数和放线菌总数均分别呈"降低-升高"和"升高-降低-升高"的趋势.同时提取微生物总DNA,分别使用真菌引物对(GC-NS7 /NS8)和放线菌引物对(F243 /GC-R513)从总DNA中成功扩增得到目标产物,对目标产物进行DGGE分离.传统培养法和DGGE图谱结果显示,不同堆体高温期的嗜热真菌和嗜热放线菌均表现出相似的变化规律,嗜热真菌优势菌比嗜热放线菌明显,但菌群总数比嗜热放线菌少.聚类分析结果表明,堆肥高温期嗜热真菌和嗜热放线菌分别以升温时56℃和58℃为界,分成2个明显的变化阶段,每阶段内部聚类关系较近,阶段间关系较远.温度对高温期真菌和放线菌具有明显的筛选作用.

嗜热真菌耐热木聚糖酶对面包品质的改善

研究了纯化的耐热木聚糖酶对面包品质及老化的影响 ,探讨了耐热木聚糖酶影响面包发酵及烘烤过程的作用机理。适量添加木聚糖酶的面包体积显著增加且面包芯的组织结构优良 ,同时老化变缓 ;本试验条件下 ,添加纯酶 1.5mg/kg为最适酶添加量 ,体积增加 4 3% ,硬度减小 4 4% 。

嗜热真菌耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusCBS2 88 5 4 M1 8耐热木聚糖酶的产酶条件和酶谱分析结果表明 :玉米芯水不溶木聚糖相对于其它来源木聚糖为最佳碳源 ,而酵母提取物和蛋白胨作为复合氮源时效果最好。培养基最适初始pH值为 7 0 ,最适培养温度为 5 0℃。在最适条件下发酵所产木聚糖酶活力最高达 1 ,83 4u mL。另外 ,SDS PAGE和酶谱分析 (变性和非变性状态下 )结果都表明该菌只产生一种分子量约为 2 6kD的G 1

嗜热真菌 Thermomyces lanuginosus热稳定a—淀粉酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus在液体培养基中于50℃静止培养14d,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl-Toyopearl疏水层析、SephacrylS-300分子筛层析和FPLC MonoQ离子交换层析,得到了凝胶电泳均一的淀粉酶。纯酶与淀粉反应不同时间后,用碘色反应法和DNS法测定淀粉和还原糖量,结果显示淀粉量在开始时迅速下降,但还原糖的量却增加很慢;产物经TLC层析分析为麦芽糖和少量葡萄糖。由此说明它为α-淀粉酶。用SDS-PAGE和Sephacryl S-300分子筛层析测定分子量为56000,不具亚基。酶反应最适温度和pH分别为65℃和4.5～5.0。在pH4.6条件下,酶在50℃是稳定的;60℃保温1h,仍保留94％的原酶活性;酶在70℃的半衰期为10min。钙离子对酶有激活作用。酶对糖原和糊精有一定的水解能力。

嗜热真菌耐热木聚糖酶的活性中心

应用NBS ,WRK ,DTNB ,PMSF ,Phenylgloxalhydrate,DEPC等化学修饰剂对嗜热真菌所产的耐热木聚糖酶进行了化学修饰。分别作用于色氨酸残基和谷氨酸 (或天冬氨酸 )残基的NBS和WRK可使耐热木聚糖酶活性显著降低 ,而其他几种修饰剂无明显作用。木聚糖对NBS的修饰有抑制作用 ,3 0mg·mL-1的桦木木聚糖底物可完全阻止NBS对耐热木聚糖酶的修饰作用 ,但木聚糖底物不能阻止WRK对耐热木聚糖酶的失活作用。实验结果表明 ,色氨酸残基和谷氨酸 (或天冬氨酸 )残基位于酶的活性中心 ,且色氨酸残基位于酶的底物结合中心 ,而谷氨酸(或天冬氨酸 )残基可能位于酶的催化中心。

嗜热真菌DSM10635生产耐热木聚糖酶的小试研究

应用嗜热真茵Thermomyces Lanuginosus DSM10635,采用固体发酵的方法探索耐热木聚糖酶的优化生产条件。在研究玉米芯,玉米皮,玉米秆,麸皮,松树屑,桦树屑等不同底物,在不同温度、玉米芯颗粒大小以及料水比条件下培养比较酶产量后,发现该嗜热真菌产耐热木聚糖酶的最佳底物为玉米芯或玉米皮,最佳培养温度为50℃～55℃,在加水量为1份玉米芯:2.8份水,玉米芯的颗粒直径大约为1mm时产酶量最高。实验结果显示,嗜热真菌DSM10635在优化后的培养条件下木聚糖酶产量可达到12525.80IU/g玉米芯。

浓香型大曲中的嗜热真菌

试验通过分子生物学方法对浓香型大曲中真菌区系进行了研究。构建了真菌18S rRNA基因文库,并从文库中随机挑选85个阳性克隆子进行限制性片段长度多态性(RFLP)和测序比对分析,结果发现,克隆子编号D71、D46、D47的序列结果分别与Thermoascus crustaceus、Thermomyces lanuginosus和Talaromyces byssochlamydoides的相似度达到99%,该结果表明浓香型大曲中存在很多以前未报道的嗜热真菌。

嗜热真菌的生物转化功能与经济价值

嗜热真菌是经济微生物中极为重要的一个类群,许多兼性嗜热真菌可在常温和一般高温条件下生存,它们在有机物质的生物转化和物质循环中起着重要的作用。对嗜热真菌在蘑菇培养料的制备、废物的堆肥化处理、酒曲制作等几种常见生产过程中的生物转化作用和机理进行分析,探讨嗜热真菌在人类生产活动中的作用及经济价值。

嗜热真菌木聚糖酶1YNA的表达和定点突变

为了进一步提高嗜热真菌(Thermomyces lanuginosus DSM10635)本已较耐热的木聚糖酶1YNA的热稳定性。利用重叠延伸PCR技术从嗜热真菌基因组DNA中扩增获得了木聚糖酶1YNA的基因xyl,将其插入到大肠杆菌表达载体pET-22b(+)中,构建了重组表达质粒pET-22b(+)-xyl。该质粒转化到表达宿主大肠杆菌BL21(DE3)后获得了能成功表达的工程菌。工程菌表达木聚糖酶1YNA的最适温度为65℃,最适pH值为6.0。其在75℃,pH值为6.5的条件下失活处理30min后还残存有30%的酶活,与嗜热真菌生产的木聚糖酶特性相近。在对该木聚糖酶的N端氨基酸序列进行定点突变后发现,T4A、T4G、T4R均对该木聚糖酶的热稳定性无显著影响,其中T4G突变体的耐热性有变弱的趋势。

四个嗜热真菌中国新记录种

报道四个嗜热真菌中国新记录种:嗜热子囊菌光孢变种Thermoascus aurantiacus var.levisporus;埃默森篮状菌Talaromyces emersonii;杜邦青霉Penicillium dupontii及丝衣霉状拟青霉Paecilomyces byssochlamydioides,对其进行了描述和讨论。研究标本保存在山东农业大学植物病理学标本室(HSAUP)。

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus A_(236)热稳定葡萄糖淀粉酶的纯化及其特性

嗜热真菌ThermomyceslanuginosusA_236在液体培养基中50℃下静止培养14天，粗提酶液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Toyopearl离子交换层析、Butyl－Toyopearl疏水层析、SephacrylS100凝胶过滤和FPLCMonoQ离子交换层析，得到了凝胶电泳均质的葡萄糖淀粉酶。酶促反应产物经TLC分析为葡萄糖，证明纯化的酶为葡萄糖淀粉酶（EC3．2．1．3）。SDS－PAGE测定其分子量为72，000，不具亚基，PI为4．0，富含Val和Leu。酶反应最适温度和pH分别为70℃和5．0。在pH5．0条件下，酶在60℃保温1h，仍具有原酶活性。酶活性在70℃和80℃的半衰期分别为20min和6min。Ca2+对酶有激活作用，Fe3+、Al3+、Hg2+等金属离子对酶活力有一定的抑制作用。纯酶碳水化合物含量为12．4％。纯酶可水解可溶性淀粉、直链淀粉、支链淀粉、糊精、糖原、麦芽三糖和麦芽糖，其中可溶性淀粉为最适底物。

降解纤维素嗜热真菌的筛选与分子鉴定

为获得有强降解纤维素能力的嗜热真菌,以羧甲基纤维素钠培养基为基础培养基,从温泉中初筛获得23株透明水解圈较大的降解纤维素的嗜热真菌.经过液体发酵复筛得到12株降解能力较强的优良菌株.通过18S rDNA序列分析,对之中的7株嗜热真菌进行分子鉴定,结果表明,7株嗜热真菌分别属于曲霉属、枝孢霉属和毛孢酵母属.

嗜热真菌的分类研究概况

1嗜热真菌的概念作为环境中基本的、限制性的物理因素之一,温度对生物在地球表面的生存及分布起着非常重要的、甚至是决定性的作用。真菌象其它微生物种群一样,在其数千万年的进化历程中,对不同的温度范围有 了各自的适应，大体可分为嗜冷真菌、嗜温真菌和嗜热真菌。嗜热真菌thermophilic fungi是一类最低生长温度为20℃或20℃以上，最高生长温度为50＂C或50℃以上的特殊真菌类群；

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus热稳定蛋白酶的纯化及特性

嗜热真菌Thermomyceslanuginosus在液体培养基中于 5 0℃振荡培养 1周后 ,培养液经硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Phenythl-Sepharose疏水层析 ,得到了凝胶电泳均一的蛋白酶。用SDS -PAGE测定分子量为 5 5kD ,该酶的最适反应温度为 70℃ ,最适作用pH值为 6 .0。该酶具有很好的耐热性 ,在pH值 6 .0 5 0℃条件下酶是稳定的 ;6 0℃保温 1h ,仍保留 92 %的原酶活性 ;90℃时酶活半衰期为 6min。抑制剂试验证明 。

嗜热真菌Thermomyces lanuginosus TP-1的培养及其产木聚糖酶性质研究

从高温酒曲中分离获得1株丝状真菌,暂定为梳棉状嗜热丝孢菌。该菌适宜高温条件生长,木聚糖酶活力也是高温下较高,酶的最适温度为55℃,最适pH为5～7,金属离子对酶活有一定的影响,用GPC方法测定木聚糖酶的分子质量为6500u。

嗜热真菌的分类研究—半知菌

根据嗜热真菌生境特点,从采集的600多份标本中分离鉴定到嗜热真菌15种,其中分离获得半知菌8种。对8种半知菌的形态特征进行了系统综合描述。

嗜热真菌FL12产耐热木聚糖酶条件优化

自土样中筛选得到一株高产耐热木聚糖酶嗜热真菌FL12,通过单因素实验及Box-Behnkendesign响应面分析,确定该菌株液体发酵产耐热木聚糖酶最佳条件:碳源玉米芯粉(浓度为4.9%),氮源牛肉蛋白胨(1.0%),培养基初始pH6.45,装液量60mL,培养温度50℃,转速200r/min。在此条件下菌株FL12发酵7d产酶量达2284.06U/mL。结果显示该菌株发酵粗酶液最适温度75℃,85℃时相对酶活为62.94%,对高温耐受性较好。

中国嗜热真菌三个新记录种

透明嗜热腐殖霉菌 图1,2 Humicola hyalothermophila Moubasher,Mazen ＆ Abdel-Hafez,Transactions of the British Mycological Society,72：509,1979.Fig.1,2 在不同温度的PDA培养基上培养5d,19℃下无生长现象;45℃生长迅速;50℃生长较为缓慢。

两嗜热真菌中国新记录种

在对山东、陕西及云南的标本研究中鉴定出两个嗜热真菌中国新记录种 ,即亚拉巴马枝顶孢 ,米黑根毛霉 ,对其进行了描述和讨论。亚拉巴马枝顶孢的主要特征是其深色菌丝、瓶梗产孢及顶生分生孢子 ;米黑根毛霉的主要特征是产生带假根孢囊梗 ,单孢子培养产生大量接合孢子。研究标本保存在山东农业大学植物病理学标本室(HSAUP)。

嗜热真菌对蘑菇促生机制的研究

嗜热真菌是蘑菇堆肥二次发酵后培养阶段的主要微生物类群。它们在堆肥中的数量及活性与蘑菇的产量有很大的相关性。本文综述了近年来，国外以嗜热色串孢（Ｓｃｙｔａｌｉｄｉｕｍｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｍ）为典型种，研究其对蘑菇菌丝促生作用的生物机制的主要成果，国外主要研究了嗜热色串孢在堆肥中的分布、数量，生长动力学特性以及呼吸机制等，同时发现嗜热色串孢的呼吸作用形成适宜的ＣＯ２浓度可使得蘑菇菌丝尽早占料，获取生态优势，本文还介绍了国内有关嗜热真菌的研究及应用。