镧(Ⅲ)对工程菌产嗜热脂肪芽孢杆菌蛋白酶活力的影响

讨论了镧对重组枯草杆菌 (DB10 4 /PPR8)产嗜热脂肪芽孢杆菌蛋白酶活力的影响 ,对其活性按测定碱性蛋白酶活性的一般方法进行了测定 ,实验结果表明 :1.0× 10 -5、1.0× 10 -6、1.0×10 -7mol· L-1L a( )作用显著 ;1.0× 10 -4 mol· L-1L a( )对酶活力影响下明显 ;1.0× 10 -3 mol· L-1L a( )降低了蛋白酶活力 ,但在此浓度下 ,L a( )对该酶不构成致命性威胁 .

嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶的产生条件及酶学性质

对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilis)WF146的产蛋白酶的条件进行了研究,在58℃条件下,WF146在pH值为75的Fd培养基中振荡发酵培养48h后,发酵液中高温蛋白酶产量可达600u/mL以上。对该酶性质的研究表明,酶分子量为34kD,最适作用pH为80,最适作用温度为80℃,具有良好的pH稳定性及热稳定性。Ca2+对该酶的稳定性具有重要影响,PMSF、DFP及IAA能强烈抑制酶活力。

表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌产高温蛋白酶的影响

研究了表面活性剂对嗜热脂肪芽孢杆菌(Bacillusstearothermophilus)WF146产胞外高温蛋白酶的影响。结果表明,表面活性剂Tween80在0.05%～0.1%(体积比)浓度范围内对WF146产酶有一定的促进作用。在培养基中添加0.1%Tween80可使发酵液酶活提高12.7%,Tween20和TritonX100则抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146产酶。另外,TritonX100抑制嗜热脂肪芽孢杆菌WF146生长,而Tween80和Tween20不抑制其生长。

嗜热脂肪芽孢杆菌HY-69耐热金属蛋白酶基因表达产物的纯化及性质研究

利用ＣＭ纤维素离子交换层析法，从宿主细胞枯草芽孢杆菌ＭＩ１１３中纯化了嗜热脂肪芽孢杆菌ＨＹ６９的耐热金属蛋白酶基因的表达产物，达电泳纯。该酶的最适反应温度为７０℃，有着较好的热稳定性和极高的盐酸胍抗性。７０℃的半寿期为４５ｍｉｎ。在３ｍｏｌ／Ｌ的盐酸胍中变性２０ｍｉｎ，仍残余近４０％的酶活。利用凝胶过滤和ＳＤＳＰＡＧＥ，测定其分子量均为２７０００±１０００。通过ＣＤ光谱得知，该酶含有６６％的α螺旋，２８％的β转角，６％的无规则卷曲，无β折叠。利用ＣＤ光谱和荧光光谱研究了该酶在盐酸胍变性过程中的构象变化，推测其主要是通过增加包装效率，减少无规则卷曲来提高酶的稳定性。

嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶分解毛发角蛋白的研究

本文研究了嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白的水解作用。结果表明 ,在体积分数为 2 %的巯基乙醇存在的条件下 ,WF - 1 4 6高温蛋白酶对毛发角蛋白有明显的水解作用。对酶解液氨基酸分析表明 ,酶解液中含有对照液中没有的游离蛋氨酸和亮氨酸 ,且游离氨基酸总量是对照样品的 2 .4倍 ,达 1 5 8mg·L-1 。此外 。

嗜热脂肪土芽孢杆菌CHB1产蛋白酶特性

目的：研究嗜热脂肪土芽孢杆菌CHBl产酶特性。方法：以蛋白酶活力为主要指标，考察温度、pH、接种量、装量等条件对CHB1产蛋白酶的影响。结果：CHB1适宜的产蛋白酶条件为：装量40mLt250mL，pH8．0，接种量5％，温度58℃，转速180r／min，时间36～44h，Tween-80对CHB1产蛋白酶具有抑制作用。结论：优化后蛋白酶产量有较大提高，最高酶活力达48U／mL，是所报道多数嗜热细菌产蛋白酶量的2—12倍。CHB1蛋白酶特性的研究及产蛋白酶量的提高，有利于揭示CHB1在堆肥化中的作用机理，提高堆肥效果。

一株嗜热脂肪芽孢杆菌的筛选及其产酶特性研究

从高温大曲中分离得到了一株产淀粉酶和蛋白酶的嗜热芽孢杆菌ZJY-1,研究了菌株ZJY-1的生长特性和产酶特性,并应用于强化麸曲探究其价值。经鉴定分析,菌株ZJY-1为嗜热脂肪芽孢杆菌(Geobacillus stearothermophilus),其最适生长pH为7.0,有良好嗜热性,最适生长温度为55℃,且在65℃高温下仍生长良好;菌株酶活力检测结果表明,不同发酵时间菌株功能酶活力存在差异,淀粉酶活力最高达到了133.5 U/g±12.5 U/g,蛋白酶活力最高为175.4 U/g±4.8 U/g;通过制备强化麸曲试验表明,ZJY-1麸曲具备分泌蛋白酶和淀粉酶能力,生物量指标可达到5.7×10^(10)±2.8×10^(9) CFU/g。本研究丰富了大曲微生物菌种资源,为高温曲发展方向提供了参考价值。

嗜热芽孢杆菌蛋白酶HS08的分离纯化研究

从高温土壤中分离得到的一株产耐热中性蛋白酶的嗜热芽孢杆菌,该菌分泌的胞外蛋白酶粗酶液经80%饱和度硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析和Superdax75凝胶层析分离纯化后,纯化倍数提高4．36倍,得率为5．3%,经SDS-PAGE电泳测得其分子量为30．6kDa。酶的最适温度与pH实验表明,该酶最适温度为65℃、最适pH为7．5,并且该酶在50℃时表现出1h以上的稳定性。该蛋白酶的活性受到丝氨酸族蛋白酶专一性抑制PMSF和金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,Zn^(2+)能提高酶活性,因此该蛋白酶为Zn^(2+)激活的丝氨酸族蛋白酶。

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08活性中心研究

运用化学修饰方法对一株嗜热芽孢杆菌所产生的耐高温蛋白酶HS08活性中心的结构进行了研究。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,色氨酸和精氨酸对酶活性有重要作用,但并不位于酶的活性中心。Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。

嗜热芽孢杆菌产耐热蛋白酶稳定性的研究

实验室成功地分离保存了一株产蛋白酶的耐热芽孢杆菌.该菌所产的蛋白酶最适pH 7.5,在pH4.0-9.0时较稳定.最适温度为70℃,80℃以下时热稳定性较好,在稳定的pH或温度下能保持1 h以上活性不变.通过添加Ca^2＋,Li^＋,Co^2＋,Mg^2＋等12种金属离子证实该酶为金属激活蛋白酶,其中Li＋提高该酶活性最显著.氧化剂过氧化氢可以提高该酶的活力,表面活性剂如Tween 80和Triton X-100对酶活力影响不大.该蛋白酶对各种常用的商品洗涤剂耐受能力较强,在洗涤工业中具有较好的应用前景.

芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质研究

对芽孢杆菌嗜热蛋白酶的性质进行了研究.该酶的分子量为32kD,最适作用pH为9 0,最适作用温度为85℃,具有良好的pH稳定性(在60℃时,pH稳定范围为6 0～11 0;在80℃时,pH稳定范围为6 0～10 0)和热稳定性(90℃时酶活的半衰期为20min).钙离子和有机溶剂能提高该酶的热稳定性,而EDTA和PMSF则能抑制该酶活性.

嗜热芽孢杆菌高温蛋白酶HS08的化学修饰研究

分离纯化了嗜热芽孢杆菌产生的耐高温蛋白酶HS08,以SDS-PAGE凝胶电泳和Superdax75预装柱凝胶过滤,测定蛋白酶HS08的分子质量为30.6ku,同时研究了酶专一性抑制剂对酶活性的影响。结果表明,蛋白酶HS08的活性被酶活性中心丝氨酸残基专一性抑制剂PMSF以及金属离子螯合剂EDTA强烈抑制,而NBS、WRK、TNBS、Phenylgloxalhydrate等修饰剂对酶活性无明显抑制作用。K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Zn2+等金属离子对酶活性影响实验结果表明,Zn2+可使该酶活性明显提高,Cu2+对该酶活性有抑制作用。因此,该酶属于金属离子激活的丝氨酸族蛋白酶。蛋白酶HS08的酶动力学实验表明,以BSA为底物,PMSF可使蛋白酶HS08最大反应速率Vmax下降50%,而对其米氏常数Km影响不大。

嗜热芽孢杆菌XJT—9503高温中性蛋白酶的研究 Ⅱ.酶的提纯及酶学特性研究

嗜热芽孢杆菌XJT—9503菌的发酵液经硫酸铵和丙酮分级沉淀分离纯化得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的高温中性蛋白酶制品。SDS—PAGE测得酶分子量为3000。当以酪蛋白为底物时，酶反应最适温度为65℃，最适pH为7．在PH6．5—9范围内稳定。在65℃、0、02MpH7．5的磷酸缓冲液中的半衰期为54min。金属离子铜、汞、铝强烈抑制酶活，钙离子，镁离子对酶活有促进作用。

嗜碱芽孢杆菌XE22-4-1碱性弹性蛋白酶发酵条件的研究

从西藏天然碱湖中筛选到一株产碱性弹性蛋白酶 (alkalineelastase)菌株 ,最适生长pH为 1 0 0 ,经鉴定为Bacillussp .,编号XE2 2 4 1。该菌产酶最适碳源为 2 %葡萄糖 ,氮源为0 2 5%酵母粉 ,豆饼粉对发酵产酶有促进作用。 2L发酵罐实验表明 ,溶解氧是影响该菌株产酶的重要因素。通过提高通气量和改变搅拌速度 ,该菌株可在发酵 48h内达到产酶高峰 ,酶活力最高达 2 66u

嗜热脂肪芽孢杆菌β-半乳糖苷酶的性质

利用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析 (DEAE- 2 2 )、Sephadex G- 75凝胶过滤从嗜热脂肪芽孢杆菌胞内提纯得到 β-半乳糖苷酶。研究表明 ,该酶最适表观反应温度和最适 p H分别为 6 0℃和 6 .4。在 50℃该酶具有良好的热稳定性。碱金属和碱土金属盐对酶有激活作用 ,重金属 Zn2 +、Fe3 +、Cu2 +抑制酶的活力。巯基保护剂能明显增强酶的活力 ,而巯基结合试剂强烈抑制酶的活性。该酶对 β- D糖苷键具有高度专一性 ,与糖苷键相连的配基对酶活力也有很大影响。在 55℃ ,酶作用于底物 ONPG和乳糖的米氏常数 Km分别 2 .6 3mmol/L和 4 .93mmol/L,最大反应速度分别为 1.93× 10 -5mmol.min-1.mg-1protein和 6 .54× 10 -5mmol.min-1.mg-1protein。乳糖的水解产物葡萄糖抑制酶活力 ,其抑制常数 2 .4 7mmol/L ,但半乳糖没有这种效应。另外 ,该酶具有转半乳糖苷的活力 ,在水解乳糖过程中 ,生成包括三、四糖的半乳糖低聚糖。

嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因perA在大肠杆菌中的高效表达

利用PCR技术得到嗜热脂肪芽孢杆菌 (Bacillusstearothermophilus)过氧化氢酶基因 perA ,将该基因与表达载体 pKK2 2 3 3连接构建重组质粒pK perA ,转化大肠杆菌过氧化氢酶HPⅠ和HPⅡ双缺突变株UM 2 ,得到重组大肠杆菌UM 2 1.酶活测定结果表明 ,表达产物具有正常的生物学活性 .SDS PAGE电泳结果显示出明显的特异性表达条带 ,单体Mr =86× 10 3 ,与嗜热脂肪芽孢杆菌所产酶相同 .实验表明 ,重组质粒在宿主UM 2中有较好的稳定性 ,在无选择压力条件下传代 6 0次基本保持稳定 ,传代 10 0次重组质粒保留 80 %以上 .摇瓶实验确定重组菌的最佳表达条件为 :IPTG浓度 ,0 .75mmol/L ;诱导时间 3h ;培养基起始 pH 6 .5 ;诱导温度 37℃ ;装液量 5 0mL/ 2 5 0mL .在优化条件下 ,重组菌产生的过氧化氢酶占菌体总蛋白的 8% ,酶活力可达 35U/mL ,是原始菌株BacillusstearothermophilusIAM110 0 1的 11.7倍 .图 2表 1参

瞬时高压对嗜热脂肪芽孢杆菌的杀灭效果

本文研究了不同作用压力和处理次数下瞬时高压(IHP)对嗜热芽孢杆菌的杀灭效果,以及食品基质对IHP杀菌的影响。结果表明:①瞬时高压作用对嗜热芽孢杆菌具有较好的杀灭效果,随着处理压力的提高,嗜热芽孢杆菌的致死率上升;提高进料温度,嗜热芽孢杆菌的致死率略有升高。进料温度10、25、40℃下分别处理一次时,随着处理压力从80MPa上升到120MPa,对嗜热芽孢杆菌的致死率分别从54.13%、53.81%、54.39%上升到74.12%、74.52%、74.96%。②瞬时高压对嗜热芽孢杆菌的致死率随着处理次数的增加而上升,且增加处理次数比提高作用压力的效果要好的多。室温(25℃)下,采用在100、110、120MPa下分别对样品处理3次,100MPa下处理三次的致死率分别为67.6%、74.13%、77.95%,110MPa下分别为71.34%、76.89%、80.74%,120MPa下分别为74.52%、79.58%、82.08%。③食品基质对瞬时高压下的菌体有保护作用,在一定浓度范围内,基质浓度愈高,对菌体保护作用愈强。在菌液中添加消毒豆奶,浓度为0、1.5、3、4.5、6g/100g,进料温度为25℃,工作压力分别为100、110、120MPa进行瞬时高压处理。结果100MPa下对菌体的致死率从67.60%下降到65.73%,110MPa下从71.34%下降到69.12%,120MPa下从74.52%下降到72.36%。

一株喜油嗜热芽孢杆菌G1201产高温蛋白酶的性质研究及异源表达初探

从高温环境中分离出产高温蛋白酶菌株,以脱脂奶粉为唯一碳氮源,通过形态学、生理生化特性和16S rRNA基因序列测定确定菌株种属;硫酸铵沉淀法获得高温蛋白酶的粗酶,并对其进行酶学性质分析;克隆编码高温蛋白酶的基因序列,构建表达载体在大肠杆菌中进行异源表达。结果表明:筛选到1株产高温蛋白酶的菌株G1201,经鉴定为喜油嗜热芽孢杆菌(Geobacillus thermoleovorans),所产高温蛋白酶大小52.5 kD,属丝氨酸蛋白酶家族,最适作用温度和pH分别为70℃和9.0,Ca^(2+)、Mg^(2+)、吐温20和TritonX-100对酶活有促进作用;异源表达结果显示产物以包涵体的形式存在,目的蛋白复性后含量为0.108 mg/mL。该菌株所产高温蛋白酶可耐受饲料、食品加工过程中的高温环境,具有良好的应用潜力。

嗜热脂肪芽孢杆菌对超高压的耐性初探

对嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillusstearothermophilus）Asl．999进行了超高压杀菌实验，探讨压力、时间、基质对灭菌效果的影响，并考察了热处理和抑菌剂对高压杀菌的协同作用效果．

嗜热脂肪芽孢杆菌耐热木糖异构酶的特性

嗜热脂肪芽抱杆菌在木糖或木聚糖诱导下产生木糖异构酶。从破碎细胞中分离到该酶。经硫酸铵沉淀，热处理及SephadexG-200柱层析等步骤获得纯化了19倍的酶制备物。该酶反应的最适pH值为7.5，在pH6．2～8．0范围内稳定，最适反应温度为80℃，低于此温度时酶有很好稳定性。该酶对底物木糖的Km值为6．67mmol／L，Mg2+、Co2+和Mn2+对该酶有激活作用，而Zn2+、Cu2+和Fe2+对酶有抑制作用。酶制备物转化木糖为木酮糖产率为18％。