嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能

Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用，参与电子传递和基因调节等过程．以嗜热菌HB8基因组为模板，通过PCR扩增获得Fe—S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因．将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上，构建重组质粒,CS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1．重组质粒转化E．coli BL21（DE3）菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化．研究证明，sufS具有脱硫酶活性，而SufE的存在可增强其活性．体外重组实验表明，在60℃孵育SufS和SufE1．0～2．5h，其复合体脱硫酶活性约是单体sufS的2倍，但两者相互作用时间短暂．若通过交联剂Mts—Aft-Biotin使SufS与sufE共价连接，此时SufsE酶活性是SufS的6倍左右，并可持续72h．