超高压对嗜热链球菌噬菌体灭活效果的研究

为研究超高压（HHP）对嗜热链球菌噬菌体的灭活效果，以3株嗜热链球菌噬菌体为对象，在不同压力、处理时间及初始菌数条件下进行超高压处理，并与传统热处理进行比较；通过观察处理前、后噬菌体结构的变化，探明超高压灭活机理。试验结果表明，压力400MPa下无明显灭活效果；压力600MPa处理10～20min，可将3株噬菌体全部杀灭。噬菌体ALQl3．2和DTl随初始菌数的下降，灭活效果逐渐增强；Abc2则无显著性差异。72qC、15S的传统热处理对噬菌体无明显灭活作用，而时间延长至5min，可将大部分噬菌体杀灭。3株噬菌体的耐压性与耐热性无相关性，其中ALQl3．2最耐压，DTl最耐热。电镜结果显示超高压处理前、后噬菌体的结构发生多种变化。

保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌融合子,采用单亲灭活及正交分析方法,研究了保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体制备及融合条件。结果表明:保加利亚乳杆菌原生质体制备的最适条件是以磷酸盐缓冲液和甘露醇制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,1.0 mg/m L的溶菌酶36℃处理30 min,原生质体的形成率为(89.02±2.31)%,再生率为(4.62±0.22)%。嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体制备的最适条件是以Tris-HCl和蔗糖制作的高渗溶液为原生质体稳定剂,0.1 mg/m L的溶菌酶42℃处理30 min,原生质体的形成率为(99.15±0.23)%,再生率为(5.79±0.17)%。单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株原生质体融合的最适条件为聚乙二醇6000(质量浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)40℃促融2 min,融合率可达(1.85±0.12)×10-6。所得融合子各项性能优良,适合于酸奶生产。

嗜热链球菌抗噬菌体菌株的富集培养

研究了在乳清培养基中添加不同营养物质对嗜热链球菌抗噬菌体菌株生长的影响,进一步采用正交实验优化筛选了其乳清发酵培养基。结果表明:在乳清培养基中添加番茄汁、乳清蛋白水解物可显著促进嗜热链球菌抗噬菌体菌株的生长,利用L934正交实验筛选出培养基的最佳配比为:乳清500 m L/L,酵母膏2.5 g/L,抗坏血酸0.5 g/L,酪蛋白胨10.0 g/L,葡萄糖10.0 g/L,番茄汁60 m L/L,乳清蛋白水解物4.0 g/L;实验菌株在此培养基中经培养条件优化,活菌数可达8.6×1010m L-1,较对照乳清培养基的活菌数提高71.67倍。

单亲灭活保加利亚乳杆菌与嗜热链球菌抗噬菌体菌株融合子的选育

为获得具有抗噬菌体功能且发酵性能优良的乳酸菌酸奶生产菌株,将生产用保加利亚乳杆菌制备原生质体后高温灭活,灭活后的原生质体与嗜热链球菌抗噬菌体菌株的原生质体通过PEG6000诱导进行融合,并对融合子性能进行研究。结果从20株融合子中挑选出3株具有噬菌体抗性且发酵性能优良的乳酸菌融合子。融合条件为:以PEG6000(浓度为400 g/L,添加0.01 mol/L Ca Cl2、0.02 mol/L Mg Cl2)为促融剂,40℃融合2 min。此条件下,融合率可达1.85×10-6。获得的融合子在凝乳、产酸、产粘性物质、产香气成分及抗噬菌体方面性能优越,适合于酸奶生产。