利用巴西蘑菇菌糠制备嗜热霉菌菌剂

为了将巴西蘑菇菌糠作为嗜热霉菌菌剂的主要培养基质,比较了8株嗜热霉菌在巴西蘑菇菌糠培养基上的生长情况。结果表明,M2,M22,M28菌株在巴西蘑菇菌糠培养基上的羧甲基纤维素酶（CMC）酶活、过氧化物磷化酶（MnP）酶活较高,有效活菌数较多。培养基的初始水分含量和pH值对这3株嗜热霉菌菌剂的CMC酶活、MnP酶活和有效活菌数有较大的影响。通过比较小麦麸皮、小米粉和玉米粉3种辅料及其不同添加比例对3株嗜热霉菌的影响,确定了小麦麸皮为最适辅料。M2菌株在pH值为7、初始水分含量为24%、添加5%小麦麸皮的菌糠培养基上,M22菌株在pH值为9、初始水分含量为24%、添加10%～15%小麦麸皮的菌糠培养基上,M28菌株在pH值为9、初始水分含量为32%、添加10%小麦麸皮的菌糠培养基上的CMC酶活和MnP酶活最高,有效活菌数目最多,培养时间最短。最后,通过正交试验确定了M2,M22,M28菌株进行组合培养的最适培养条件为：pH值9,初始水分含量24%,小麦麸皮添加量15%,培养时间5 d。

探讨不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原诱导大棚肺动物模型

目的探讨不同剂量嗜热吸水链霉菌抗原是否能引起豚鼠大棚肺,及制作大棚肺动物模型的方法及最适宜的嗜热吸水链霉菌抗原剂量。方法 40只成年豚鼠随机分为A、B、C、D组,每组10只。B、C、D组为模型组,分别予嗜热吸水链霉菌抗原制剂1.0 mg(0.2 ml)1、.5 mg(0.3 ml)2、.0 mg(0.4 ml)3种剂量鼻内滴注;A组为对照组,予0.9%无菌生理盐水0.3 ml鼻内滴注。每周连续滴注3 d,连续滴注12周。结果 B组于第2周末,C、D组均于第1周末出现明显肺泡炎改变;B组于第4周末、C组于第3周末、D组于第2周末可见肉芽肿形成;C组在12周末可观察到肺成纤维细胞数目增多,B组无明显纤维化改变,D组豚鼠多在第3周因肺部感染死亡。模型组CT影像上均可见弥漫性磨玻璃影,后可见双肺多发性、边缘模糊的斑片状及微小结节状影,多呈小叶中心型。模型组肺组织均可见嗜热吸水链球菌生长。结论嗜热吸水链霉菌抗原可以在豚鼠引起典型大棚肺病变。1.5 mg(0.3ml)可作为构建嗜热吸水链霉菌抗原诱导的大棚肺动物模型的标准剂量。

雾化吸入和鼻内滴注嗜热吸水链霉菌诱导豚鼠大棚肺模型的比较

目的探讨雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂能否诱导豚鼠大棚肺模型及比较雾化法和鼻滴法二者的差异。方法成年豚鼠40只,体重300～400g,雌性,随机分为模型组(雾化组A1、鼻滴组B1)和对照组(雾化组A2、鼻滴组B2),每组20只。A1组:嗜热吸水链霉菌抗原制剂5mL日1次雾化吸入,15min/次,连续12周;B1组:0.3mL抗原制剂鼻内滴注,连续3次/周,连续12周;A2组:0.9%无菌生理盐水5mL日1次雾化,15min/次,连续12周;B2组:0.9%无菌生理盐水0.3mL鼻滴,连续3次/周,连续12周。结果①影像学改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见双肺弥漫性磨玻璃影;第3周末,可见双肺微小结节影;第12周末,可见明显的纤维条索影。B1组:第1周末,可见双肺磨玻璃样改变;第2周末,可见双肺多发斑片状影;第3周末,可见双肺散在小结节影;第12周末,可见纤维条索影。对照(A2、B2)组无异常。②病理改变:A1组:第1周末未见异常;第2周末,可见肺泡炎改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。B1组:第1周末,可见肺泡炎改变;第2周末,可见渗出性改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第12周末,可见纤维化改变。对照(A2、B2)组无异常。③肺组织研磨后培养,A1、B1组均可见嗜热吸水链霉菌生长。结论雾化吸入嗜热吸水链霉菌抗原制剂可诱导豚鼠大棚肺模型;雾化法致豚鼠大棚肺肺泡炎改变迟于鼻滴法1周出现。

采用嗜热吸水链霉菌单一抗原ST-omlA诱导小鼠大棚肺模型

目的探讨纯化的嗜热吸水链霉菌单一表面抗原能否诱导C57BL/6小鼠大棚肺模型。方法 C57BL/6小鼠20只,8周龄,雌性,体质量25～30 g,完全随机分为模型组和对照组,每组10只。模型组:纯化的嗜热吸水链霉菌表面抗原ST-omlA 0.2 mL(1 mg/mL)鼻内滴注,连续3 d/周,连续滴注4周;对照组:0.9%无菌生理盐水0.2 mL鼻内滴注,连续3 d/周,连续滴注4周。结果①组织病理学改变:模型组第2周末,可见肺泡炎改变;第3周末,可见肉芽肿改变;第4周末,可见纤维化改变。对照组无异常。②免疫组织化学染色结果:模型组ST-omlA滴注后的第4周末,Ⅰ型胶原蛋白及血管内皮生长因子表达明显增多,呈阳性;对照组Ⅰ型胶原蛋白及血管内皮生长因子表达呈阴性。结论纯化的嗜热吸水链霉菌表面抗原ST-omlA抗原制剂可以诱导C57BL/6小鼠大棚肺模型。

嗜热链霉菌的一个新种和一个新亚种

在研究太原地区棉籽壳的微生物区系中,从棉籽壳发酵料中经50℃培养分离到5株嗜热链霉菌,经鉴定为嗜热链霉菌的一个新种和一个新亚种:热深蓝紫链霉菌(Streptomycesthermoatrocyaneoviolaceus)、热深蓝紫链霉菌太原亚种(Streptomyces thermoatrocyaneoviola-ceus subsp.taiyuanensis).

嗜热吸水链霉菌抗原诱导大棚肺动物模型

目的探讨嗜热吸水链霉菌抗原对豚鼠是否能引起大棚肺及制作大棚肺动物模型的方法。方法成年豚鼠32只,体重300~400 g,雌雄各半。随机分为模型组A、B、C组,对照组D组,每组8只。模型组予嗜热吸水链霉菌抗原制剂1.5 mg（0.3 ml）、对照组予0.9%无菌生理盐水0.3 ml鼻内滴注,每周连续滴注3天。A组滴注1周,B组连续滴注3周,C、D组连续滴注12周。结果 1.病理改变：A组出现肺泡炎改变;B组可见非坏死性肉芽肿形成;C组可观察到肺成纤维细胞数目增多。2.影像学改变：A组可见双肺大片磨玻璃样改变;B组可见双肺多发性片状略高密度影;C组可见肺内小结节影及肺气肿征象。3.肺组织研磨培养后A、B、C组均可见嗜热吸水链球菌生长。结论嗜热吸水链霉菌抗原可以引起豚鼠典型大棚肺病变,结合病理和影像学变化证实,所建模型具有大棚肺的主要特征。

嗜热吸水链霉菌抗体检测的临床意义

自１９３２年Ｃａｍｐｂｅｌ首次报告５例“农民肺”以来，国内外学者对嗜热放线菌与呼吸道感染的关系进行了广泛的研究。我校于１９８２年在洪湖县１例农民肺死亡者家的铺草中分离出嗜热吸水链霉菌Ｈ９－４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｔｈｅｒｍｏｈｙｄｒｏｓｃｏｐｉｃ...

嗜热链霉菌过氧化氢酶的纯化及性质研究

嗜热链霉菌(Thermostreptomyces sp.)T485的除去菌体的培养液,经硫酸铵盐析,Sepha-dex G-100、DEAE-Sephadex A-50及羟基磷灰石等柱层柝,得到了凝胶电泳均一的过氧化氢酶,纯化了954倍,得率为7%。用浓度梯度 PAGE 测定分子量为152000,SDS-PAGE 测定亚基分子量为57000,凝胶薄层等电点聚焦测定等电点为4.25。过氧化氢酶的反应最适温度为60℃,最适 pH 为7.0;对 H_2O_2的 K_m 为50mmol.L^(-1),V_(max)值为6.0 mmol·min^(-1)·mg^(-1)。NaN_3和 Hg^(2+)对酶活力有强烈抑制作用,Ca^(2+)对酶活力有激活作用。测定了波长200—500nm 的吸收光谱,在405nm 处有明显的吸收峰。根据受 NaN_3抑制和吸收光谱性质,推测它为含血红素酶。此外还测定了过氧化氢酶的氨基酸组成。

普洱茶渥堆发酵中嗜热真菌的分离和鉴定

应用传统的普洱熟茶渥堆方法进行发酵,研究分析普洱茶渥堆发酵过程中嗜热微生物的种类,应用测序技术对分离的微生物进行了鉴定。每天取样,进行微生物的分离、纯化及鉴定,并对分离出来的几种嗜热霉菌在不同温度、不同pH条件下培养,观察其生长情况。对普洱茶发酵过程中的微生物进行全面分析,运用分子生物学方法对分离的微生物进行鉴定。发现了普洱茶渥堆发酵过程中起重要作用的嗜热微生物,为揭示普洱茶高温发酵的机理奠定了基础。

嗜热链霉菌突变株M1033-9产葡萄糖异构酶的研究 Ⅰ。菌种分离、诱变及产酶条件

自1965年以来,我国对产气杆菌、乳酸菌、攻瑰暗黄链霉菌、玫瑰红链霉菌及游动放线菌葡萄糖异构酶(EC5.3.1.5)的生产条件、诱变育种和固定化作了很多研究,用戊二醛交联游动放线菌细胞制成的固定化酶已批量生产。嗜热菌有许多优点,如高温培养周期短、杂菌污染少、节省冷却水。

嗜热链霉菌变株M1033-9葡萄糖异构酶的研究——Ⅱ.酶的性能与工业应用

嗜热链霉菌变株(Streptomyces diastaticus No.7 mutant strain)M1033-9菌的胞外葡萄糖异构酶作用最适温度为80—85℃,最适 pH 为8—9,pH 大于7.8时有较强的热稳定性,Co^(2+)和 Mg^(2+)对酶有激活作用,Co^(2+)对酶的热稳定性有保护作用。5000L 发酵罐经板框过滤的清发酵液含胞外酶885u/ml,占总酶活94%,可直接作酶源吸附于大孔阴离子交换树脂上制成固定化葡萄糖异构酶(酶活13000u/g(干))工艺简便。年产2000吨42型果葡糖浆规模下每公斤干固定化酶可生产果葡糖浆4.59吨。M1033-9是产胞外葡萄糖异构酶的优良菌种。

嗜热毁丝霉菌多糖裂解单加氧酶基因的克隆及生物信息学分析

多糖裂解单加氧酶(LPMO)是近来发现的一类裂解结晶多糖(如纤维素和几丁质)的氧化酶,它通过单加氧的形式断裂多糖底物之间的糖苷键。为研究LPMO的功能和结构特性,采用基因工程技术从嗜热毁丝霉菌中克隆出LPMO基因(MtLPMO9F)并构建重组表达载体和重组表达菌株,采用生物信息学在线工具和软件分析MtLPMO9F基因编码的蛋白质MtLPMO9F的理化性质、亲/疏水性、信号肽、结构域及空间结构等。结果表明:成功构建了MtLPMO9F真核表达载体及毕赤酵母表达菌株。生物信息学分析结果表明,MtLPMO9F的预测分子量约35.19kDa,理论等电点为5.13,有4个潜在的N-糖基化位点和16个O-糖基化位点。系统进化分析显示MtLPMO9F与嗜热子囊菌(Thermoascus aurantiacus)的同家族酶TaLPMO9A有亲缘关系,序列相似性为43%。

一株产生葡萄糖异构酶的嗜热放线菌的研究

本文对产生胞外葡萄糖异构酶的一株嗜热放线菌进行研究。根据它形态和生理特征,可以初步鉴定为不吸水键霉菌嗜热亚种(Streptomycetes ahygroscopicus subsp.thermophilus Yan,Zhang et al.)并对通过紫外线诱变得到的变异株M1033所产生葡萄糖异构酶的某些性质进行了初步探讨。该菌的胞外酶占80%左右,发酵条件粗放,发酵温度为41±1℃,酶的热稳定性温度是70℃。最适pH和温度分别为7.7—8.8和70～80℃。Zn^(2+)、Mn^(2+)、Cu^(2+)、Fe^(2+)和Ba^(2+)等金属离子对它的酶活力虽有抑制作用,但Co^(2+)和Mg^(2+)二种金属离子却有明显的激活作用。

耐热过氧化氢酶产生菌的筛选和发酵条件的研究

从59株嗜热放线菌中筛选出一株产胞外过氧化氢酶活力较高的嗜热链霉菌(Thermo-streptomyces sp.)T485。其产酶的适宜条件为培养温度50℃,培养基 pH6—8,碳源麦芽糖,氮源酵母膏,250ml 三角瓶装30—50ml 培养基,振荡培养48h,产酶可达140u/ml。

嗜热吸水链霉菌cDNA文库构建及其抗原相关基因的表达

目的构建嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行表达序列标签（EST）测序，从中筛选具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达。方法利用RNA转录5’末端转换技术构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的eDNA文库，将平板内克隆进行编号，取前1020个克隆提取质粒，进行EST测序。用生物信息学方法分析EST测序结果并预测基因功能，从中筛选出可能引起人体免疫反应的毒力因子。将这些目的基因亚克隆人pET-28a载体，将重组子转化大肠杆菌BL21，用异丙基-β．D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导相应蛋白的表达。结果成功构建了较高质量的嗜热吸水链霉菌eDNA文库，得到有义序列978个，获得单-基因347个，其中2段基因分别与胸膜肺炎放线菌外膜蛋白、转铁蛋白B的同源性为51％和42％，其开放阅读框长度分别为1554bp和726bp，分别编码517和241个氨基酸。将2段基因亚克隆入原核表达载体中，IPTG诱导表达产物的相对分子质量分别为63000和30000。结论所构建的嗜热吸水链霉菌eDNA文库符合构建基因文库的质量要求，文库中的EST数据将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选。

致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库的构建及体外表达

目的构建致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行EST测序,通过生物信息学软件分析EST序列同源性及生物学功能,筛选重组阳性基因克隆进行体外表达。方法利用SMART方法构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库,随机挑选重组阳性克隆进行EST测序。挑选有关目的基因连接入pET-28a载体并转化大肠埃希菌BL2(DE3),IPTG诱导体外表达。结果该文库的重组率为96.3%,是一个较高质量的文库。从文库中随即挑选的1 020个重组阳性的克隆,获得978个有义序列,平均长度为495bp,含有347个单一基因,同源性比较发现部分序列与猪胸膜肺炎放线菌外膜蛋白(omla),转铁蛋白B(TbpB)具有较高的同源性,分别为51%和42%。将重组阳性的基因克隆至载体中,IPTG诱导得到表达产物的相对分子质量分别为63×103和30×103。结论所构建的致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库包含全部EST序列,可能包含嗜热吸水链霉菌相关疾病巨大部分毒力分子,这些数据的积累将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选,同时为研究农民肺的发病机制奠定基础,如果能准确筛选出相关毒力基因,将为农民肺血清学诊断以及特异性疫苗的研发奠定基础。

诱变选育木聚糖酶高产菌及其发酵条件优化

采用微波辐照对木聚糖酶产生菌疏棉状嗜热霉菌(Thermomyces lanuginosus)CICC2691进行诱变选育,考察不同微波功率和辐照时间对菌株致死率和正突变率的影响,得到最佳的诱变条件:微波辐照功率为500W,辐照时间为60s。在最佳诱变条件下得到一株高产木聚糖酶且能稳定遗传的菌株W5-133,其所产木聚糖酶酶活较出发菌株提高了66.8%。以菌株W5-133为研究对象,经单因素试验和响应面分析法对其发酵产酶条件进行了优化,得到最优发酵产酶条件:葡萄糖质量浓度为2.35g/L,发酵温度为56.0℃,发酵时间为99.5h,初始pH值为5.8,该条件下的木聚糖酶酶活为186.81U/mL,比优化前提高了24.4%。

高产蛋白酶和纤维素酶放线菌的筛选、鉴定及酶活测定

从含废弃物土壤中分离筛选出一株同时产蛋白酶和纤维素酶的放线菌,并对其产酶活力进行测定,采用形态学和分子生物学对筛选菌株进行菌种鉴定。结果表明,筛选出的高产蛋白酶和纤维素酶的菌株GT-B-S001为嗜热一氧化碳链霉菌,该菌株产蛋白酶活力为161.3U/毫升、产纤维素酶活力为135.5U/亳升。GT-B-S001有较强的产蛋白酶和纤维素酶的能力,具有较好的应用前景。