嗜盐嗜碱芽孢杆菌NTT76启动子和信号肽序列的克隆及表达

利用启动子信号肽探测型质粒 p GPB14 ,从嗜盐嗜碱芽孢杆菌 NTT76的总基因组中克隆具有启动子和信号肽功能的 DNA片段 .共得到 4 1个转化子 ,其氨苄青霉素抗性水平在 10 0 0～ 12 0 0 0 m g/ L之间 .从 3个不同抗性水平的转化子中提取重组质粒 ,酶切显示 ,外源插入片段在 10 0～ 5 0 0 bp之间 .将重组质粒转化枯草芽孢杆菌 ,也同样使枯草芽孢杆菌具有分泌β-内酰胺酶的功能 .β-内酰胺酶活力测定表明 ,大肠杆菌产生的酶主要积累在周质空间 ,而枯草芽孢杆菌产生的酶主要分泌在胞外 .对外源插入片段进行序列测定发现 ,所有片段中均含有启动子区、核糖体结合位点和信号肽编码区域 .