北海竹林盐场极端嗜盐真菌的多样性及其抑菌活性研究

为探讨北海竹林盐场极端嗜盐真菌的物种多样性及其抑菌活性,采用高盐培养基分离盐场饱和盐度采样点的可培养真菌,并基于ITS基因序列进行菌株鉴定;使用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)、表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis,SE)、无乳链球菌(Streptococcus agalactiae,SA)和海豚链球菌(Strepstococcus iniae,SI)作为指示菌,利用96孔板法评价真菌发酵提取物的抑菌活性。本研究分离得到可培养极端嗜盐真菌16株,鉴定为6科6属12种,其中枝孢菌属(Cladosporium,3种)、黑孢霉属(Nigrospora,3种)和镰刀菌属(Fusarium,3种)是优势属。菌株F.incarnatum GXIMD00527和F.chlamydosporum GXIMD00541的发酵产物对4种指示菌有较强的抑菌活性[90%Minimal Inhibitory Concentration(MIC90)<6.25μg/mL],Alternaria alternata GXIMD00532、Cladosporium cladosporioides GXIMD00533和Curvularia hawaiiensis GXIMD00538的发酵产物对MRSA有抑菌活性(MIC90≤25μg/mL)。本研究丰富了广西嗜盐海洋真菌的物种多样性,为北部湾海洋微生物资源的开发利用奠定了基础。

一株极端嗜盐真菌的筛选及初步研究

利用含10%Na Cl的查氏培养基从晒干海鱼上分离到一株极端嗜盐真菌.为了对真菌进行理化鉴定,对分离菌株MF1和购买的标准菌株Phialosimplex salinarum DSM 27530在不同培养基上的培养特征、显微形态特征、耐盐性和在15%Na Cl的条件下的碳源利用能力进行分析检测,发现分离菌株生长盐度范围为0%33%,最适生长盐度为15%,并能够在15%Na Cl的条件下利用淀粉、脂肪、木质素、脱脂奶粉或纤维素为唯一碳源生长,说明该菌株在该条件下产生了相应的酶系.随后,对分离菌株和标准菌株的8个位点基因序列进行克隆与测序,最后进行多基因联合系统发育分析,确定分离菌株MF1属于Phialosimplex.由于分离菌株具有极高的盐度耐受能力和在高盐环境下产生丰富酶系的特性,因此该菌株在耐盐机理和工业应用上具有潜在的研究和应用价值.

嗜盐真菌Aspergillus montevidensis生物特性研究

【目的】从形态学角度对分离自陕北花马盐湖的嗜盐真菌Aspergillus montevidensis生物特性进行了初步探究,为下一步耐盐基因的筛选及新型耐盐农作物的获得提供理论依据。【方法】将嗜盐真菌A.montevidensis分别接种于不同碳源(淀粉、纤维素、麦芽糖、蔗糖、葡萄糖)、不同氮源(硝酸铵、氯化铵、酵母粉、蛋白胨、硝酸钾)以及不同碳氮比培养基中培养,研究高盐环境中不同碳源、不同氮源以及不同碳氮比对嗜盐真菌A.montevidensis生长速率、菌丝体干质量、菌落形态以及显微形态特征的影响。【结果】嗜盐真菌A.montevidensis在盐浓度为1.5 mol/L,以蔗糖为碳源、蛋白胨为氮源的培养基上生长较快且生长状况最好,在此条件下生长速率可达0.63 cm/d,菌丝体干质量达3.05 g/L。最佳碳氮比为10∶1。【结论】嗜盐真菌A.montevidensis的耐盐受不同碳氮源的影响。

嗜盐真菌多样性及其抗肿瘤活性研究

为探讨海盐田中的嗜盐真菌类型及其抗肿瘤作用,采用稀释涂布法和平板划线法分离海盐田中的可培养真菌,并基于ITS基因序列分析鉴定菌株,通过FGFR2过表达和未过表达的肿瘤细胞增殖抑制活性以及酶联免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)评价真菌的抗肿瘤作用。本研究分离得到11种嗜盐真菌,隶属于3科4属。真菌Epicoccum sorghinum(编号GXIMD02001)的提取物对FGFR2过表达的乳腺癌细胞MDA-MB-231-(S252W)增殖有较强的抑制作用,其半抑制浓度IC50为11.02 μg/mL,而对FGFR2未过表达乳腺癌细胞MDA-MB-231几乎没有抑制活性,该提取物在1 mg/mL浓度下对FGFR2蛋白激酶活性抑制率为91.5%;两株真菌(编号GXIMD02004和GXIMD02009)对FGFR2表达乳腺癌细胞MDA-MB-231和MDA-MB-231(S252W)增殖抑制的IC50为11.94-16.41 μg/mL;5株真菌的IC50为219.2-449.7 μg/mL。嗜盐真菌(编号GXIMD02001)是首次报道具有靶向FGFR2抗肿瘤作用的海洋真菌,部分嗜盐真菌具有较好抗肿瘤作用,本研究为北部湾海洋微生物来源的抗肿瘤药物开发利用提供科学依据。

嗜盐真菌YH-1菌株培养条件的初步研究

为明确YH-1菌株的培养条件,利用平板培养法对该菌株的部分培养条件进行了初步研究。结果表明,在黑麦培养基或PDA培养基(pH5～7)上、6%～8%NaCl、无机盐组合(2.0%MgSO4+0.6%K2HPO4+0.5%KNO3+2.0%Na2SO4)、蔗糖为碳源的条件下25～27℃培养7d,YH-1菌株的生长速率最大(12.8 mm/d)、产孢量也最高(63.12×105个/cm2),为进一步利用该菌株筛选抗真菌、抗肿瘤活性物质提供了一定的参考依据。

碱蓬根系嗜盐耐盐真菌的分离与鉴定

为分析耐盐植物碱蓬根系真菌的组成和耐盐程度,采用常规植物组织真菌分离方法对盐碱地中生长健康的碱蓬根系进行真菌分离,将分离得到的真菌在不同Na Cl浓度培养基上进行培养,检测菌株的嗜盐耐盐性,并对分离得到的嗜盐耐盐真菌进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。结果显示:分离得到耐盐真菌40株,分别属于镰刀菌属(Fusarium sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、腐霉属(Pythium sp.)等,其中,棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是没有被报道过的耐盐真菌;分离得到嗜盐真菌3株,都属于聚多曲霉(Aspergillus sydowii)。结果表明,耐盐植物碱蓬中嗜盐耐盐真菌多样性丰富。

一株产纤维素酶嗜盐真菌的分离、鉴定及发酵条件优化

纤维素酶是生物燃料产业的关键酶系。本文通过刚果红染色法从腌制一年的诺邓火腿上分离到一株具有纤维素酶活性的嗜盐真菌YFCC2018SY。以形态学结合分子系统学手段对其进行鉴定,用胞外酶活测定法探索其产酶规律,并通过响应面法优化其产酶条件。结果表明该菌株属于球孢枝孢菌,且能分泌滤纸酶、内切酶和β‐葡萄糖苷酶3种嗜盐纤维素酶。响应面分析得到最优发酵条件为:NaCl含量88.58g/L、装瓶量51.21mL、起始pH 7.72。通过优化,纤维素酶活力由113.3U/mL提高到302.8U/mL,提高了167%。上述结果可以为嗜盐纤维素酶开发利用提供参考。

盐蒿内生耐(嗜)盐真菌的分离及鉴定

采用含盐浓度不同的培养基分离陕北花马盐湖盐蒿(Artemisia halodendron)的内生耐(嗜)盐真菌并研究其物种多样性。从盐蒿组织中共分离得到1 215株内生耐(嗜)盐真菌,基于形态学和ITS系统发育分析表明,上述菌株属于6个属,包括小球腔霉属(Leptosphaeria)、青霉属(Penicillium)、木霉属(Trichoderma)、曲霉属(Aspergillus)、链格孢属(Alternaria)和镰孢属(Fusarium)。以小球腔霉属(Leptosphaeria)为优势属,其次为链格孢属,其分离频率分别为78.8%和2.28%;共计9个代表种如产黄青霉(Penicillium chrysogenum)、Aspergillus westerdijkiae、极细链格孢(Alternaria tenuissima)和长梗木霉(Trichoderma longibrachiatum)等。研究表明,陕北花马盐湖盐蒿中蕴藏着丰富的耐(嗜)盐真菌物种资源。

陕北花马盐湖1株产纤维素酶真菌的鉴定及产酶条件研究

[目的] 对从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选出的1株产纤维素酶菌株进行鉴定,研究该菌株的产酶条件,为嗜盐纤维素酶资源的利用提供理论依据。[方法] 利用刚果红培养基从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选产纤维素酶菌株,并对其进行形态学和ITS序列鉴定,在单因素试验基础上,采用L9（34）正交试验,优化该产酶菌株的最佳培养基配方和最佳发酵条件,并研究该产酶菌株的NaCl耐受性。[结果] 从陕北花马盐湖嗜盐真菌中筛选出1株高产纤维素酶菌株6MA1,根据形态学和ITS序列系统发育分析,将该菌鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。菌株产纤维素酶的最佳培养基配方是,玉米芯粉22.0g/L,蛋白胨6.0g/L,NaCl 4.0g/L,MgSO4·7H2O 0.55g/L,K2HPO40.5g/L;最佳发酵条件是,发酵温度28℃,发酵时间6d,起始pH 6.0,种子液接种量18%（体积分数）,在此条件下菌株6MA1的CMCase活力为47.8U/mL。此外,该菌株在含0~15.0%（体积分数）NaCl的培养基中仍具有产纤维素酶活力。[结论] 从陕北花马盐湖筛选出1株产纤维素酶菌株6MA1,并得到了该菌株产酶的最佳条件。

两株盐生海芦笋内生真菌的分离与鉴定

对分离自江苏盐城大丰港盐碱地野生海芦笋的两株嗜盐内生真菌进行分离鉴定,提取基因组DNA后分别对18S rDNA和rDNA ITS1-5.8S-ITS4区域进行PCR扩增,基因测序并进行同源性分析,构建进化树并进行系统发育分析,结合形态学观察,将该两株菌分别鉴定为维管束茎点霉(Phoma tracheiphila)与镰刀菌属(Fusarium sp.)。

灌东盐场耐盐真菌的分离与初步鉴定

用不同浓度NaCl的马丁氏培养基富集培养,从灌东盐场的结晶池中分离得到2株耐盐霉菌,标记为A、B。经过初步鉴定发现,A菌株菌落形态比较大,直径约8mm,质地疏松,呈绒毛状,成熟菌落呈现蓝绿色,表面粗糙,边缘不整齐,生长的NaCl浓度范围为10～300g/L,最适盐浓度为100g/L,生长的温度范围为22～45℃,最适温度为28℃。B菌株菌落形态比较小,直径约3mm,质地疏松,呈绒毛状,成熟菌落呈现棕色,表面粗糙,边缘不整齐,其生长的NaCl浓度范围为20～30g/L,最适盐浓度为150g/L,B菌株生长的温度范围为22～45℃,最适温度为30℃。A菌株菌体与青霉菌体相似,B菌株菌体是具有分枝的菌丝体,与曲霉体相似。

产自Cladosporium sp. F39的嗜酸耐盐纤维素酶及其酶学性质研究

极端环境来源纤维素酶在造纸、纺织和纤维素乙醇生产等工业领域有巨大的运用潜力,因而备受关注。本研究以小麦秸秆为唯一碳源,从青海茶卡盐湖土壤中分离到一株具有降解纤维素功能的真菌菌株,命名为F39,通过形态学和ITS rRNA分子生物学鉴定,菌株F39被鉴定为Cladosporium sp. (GenBank登录号:ON318388)。用小麦秸秆发酵培养基进行诱导,发现该菌株所产纤维素酶的最适pH为5.0,最适温度为50℃,最适盐度为0.2 g/mL,在最适温度和pH条件下测得活性为0.237 U/mL;在pH 4.0~6.0或35℃~65℃或盐浓度低于2.5 g/mL时保持60%以上活性。在大多数金属离子件下活性表现稳定。金属离子Mn2+能激其强烈活性。酶抑制剂DTT和SDS低浓度存在的条件下活性表现强促进作用。菌株在小麦渣发酵培养基中发酵培养312 h后的上清纤维素酶活力(底物为羧甲基纤维素钠(CMC-Na))最高,为0.223 U/mL。以上结果表明该菌株所产纤维素酶有嗜酸、耐盐和耐热的特点,在饲料加工、生物乙醇生产等行业具有良好的运用潜力。