抗炎一号对活化嗜碱性白血病细胞脱颗粒的影响

目的探讨抗炎一号对抗二硝基苯基化免疫球蛋白IgE（anti-dinitrophenolspecificimmunoglubinE，抗-DNPIgE）与二硝基苯基化牛白蛋白（dinitrophenol-bovineserumalbumin，DNP-BSA）复合物刺激大鼠嗜碱性自血病细胞（RBL-2H3）脱颗粒与白细胞介素4（IL-4）释放的抑制作用，从而阐明其抗过敏机理。方法用RBL．2H3细胞脱颗粒抑制率来评价抗炎一号细胞膜稳定作用，RBL-2H3细胞释放颗粒中的β-氨基己糖苷酶（β-hexosaminidase）与白细胞介素4（IL-4）分别用PNAG（p-硝基苯基-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷，β-nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide）底物反应比色法与ELISA方法检测。结果抗炎一号能抑制RBL-2H3细胞释放13．氨基己糖苷酶与IL．4，药物浓度为8μg/ml时即具有42．47％的脱颗粒抑制作用泸〈0．01），浓度增至80gg／ml、800μg／ml、8000μg／ml时，抑制率分别为52．40％、68．26％、72．15％，对IL-4释放抑制作用分别为13．87％、23．27％、31．95％、39．99％。抗炎一号B．氨基己糖苷酶释放最大抑制率为地塞米松最大抑制率的84．48％，抑制IL-4作用与地塞米松相当。结论抗炎一号具有肥大细胞膜稳定作用，故可干预I型变态反应。

幼儿急性嗜碱性粒细胞白血病1例

嗜碱性粒细胞白血病（basophilic cell leukemia,ABL）是一种罕见的造血系统恶性肿瘤,约占急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）的1%。国内外可见少量成人病例报道,但幼儿病例极少见。现报道我院诊治的1例幼儿ABL。1病历资料患儿男,1岁8月,主因间断发热、乏力1月,发热、乏力加重伴咳嗽4 d,于2016年7月2日收住我院。

以面部荨麻疹为首发症状的嗜碱性粒细胞白血病1例

病例女,14岁,因面部荨麻疹伴潮红7 d来我院就诊。查体：中度贫血貌,面部散在椭圆形暗红色丘疹,米粒大小,丘疹的中央可见小疱,伴潮红。四肢、胸背等处未查见此类丘疹。浅表淋巴结无肿大,胸骨无压痛。腹软,肝脾肋下未触及。血象：白细胞11.5×109/L,嗜酸性粒细胞0.03,嗜碱性粒细胞0.37,红细胞4.46×1012/L,血红蛋白90 g/L,

慢粒急变嗜碱性粒细胞白血病伴罕见染色体畸变一例并文献复习

目的报道1例CML急变嗜碱性粒细胞白血病罕见染色体异常并分析其急变的分子遗传学机制。方法采用常规方法检查CML患者外周血和骨髓细胞,应用G-显带技术分析骨髓细胞核型。结果患者具CML急变嗜碱性粒细胞白血病典型的外周血和骨髓象特征,Ph(+),伴有8号染色体三体和四体、19号染色体三体、20号染色体三体、22号染色体三体、i(17q)等附加染色体畸变。结论8、9、17及22号染色体畸变致BCR/ABL、p53、C-myc和p16等基因的异常表达可能是CML急变的分子遗传学基础。

剔除目标成分的丹参注射液对大鼠嗜碱性粒细胞白血病细胞和大鼠过敏反应的影响

目的 探讨剔除目标成分后的丹参注射液对大鼠嗜碱性粒细胞白血病(RBL-2H3)细胞和大鼠过敏反应的影响。方法 选取RBL-2H3细胞,分别以25、50、100μg/ml的丹参和剔除目标成分后的丹参注射液处理24小时后,比较各组细胞脱颗粒、β-氨基己糖苷酶含量、组胺含量及蛋白(p-p38、p-cJNU、p-Syk)表达。将雄性SD大鼠随机分为丹参注射液组、剔除目标成分后注射液组、正常组和阳性对照组(天花粉蛋白)各8只,按照临床等倍剂量分别腹腔注射丹参注射液组、剔除目标成分后注射液组、生理盐水及天花粉蛋白。比较各组大鼠血清被动阿瑟斯反应、肺组织病理结构、组胺含量和总IgE浓度。结果 在RBL-2H3细胞中,丹参和剔除目标成分后的丹参注射液干预组RBL-2H3细胞的脱颗粒率、β-氨基己糖苷酶释放率、组胺含量和p-p38、p-cJNU和p-Syk蛋白的表达显著高于阴性对照组;相同浓度的丹参和剔除目标成分后的丹参注射液干预下,剔除目标成分后的丹参注射液组细胞中的这些指标显著低于丹参组,差异有统计学意义(P<0.05)。在SD大鼠中,丹参和剔除目标成分后的丹参注射液干预组SD大鼠被动阿瑟斯反应、肺组织病理损伤、SD大鼠血清和肺组织中组胺含量和总IgE浓度显著高于正常组;剔除目标成分后的丹参注射组显低于丹参注射组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 相较于丹参注射液,剔除目标成分后的丹参注射液可减弱RBL-2H3细胞和大鼠过敏反应。

小儿复方鸡内金咀嚼片对KM小鼠全身过敏反应、大鼠腹腔肥大细胞和RBL-2H3细胞类过敏反应诱发结果

目的观察小儿复方鸡内金咀嚼片对KM小鼠全身过敏反应、分离自SD大鼠腹腔液肥大细胞(RPMC)和Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3类过敏反应的诱发结果。方法①取48只KM小鼠,随机均分为甲、乙、丙、丁组:甲组小鼠用小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液灌胃,0.25 g生药/kg,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次灌胃;乙组小鼠用小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液灌胃,0.025 g生药/kg,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次灌胃;丙组小鼠用1 mg卵清蛋白静脉注射,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次静脉注射;丁组小鼠用0.1 mL/10 g生理盐水静脉注射,隔天1次,连用3次,分别间隔9、16天时再次静脉注射,观察各组小鼠主动全身过敏反应情况。②另取10只SD大鼠,分离大鼠腹腔原代RPMC细胞,分为5组:空白对照、C48/80组、高中低剂量组,高中低剂量组细胞分别加入32、16、8 mg/mL的小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液,C48/80组及空白对照组分别加入0.04 mg/mL的组胺释放剂和肥大细胞脱颗粒剂C48/80、缓冲液,测算各组细胞组胺、β-氨基己糖苷酶释放率及促进率。③取对数生长期RBL-2H3细胞,分为空白对照、C48/80组、高中低剂量组,高中低剂量组细胞分别加入32、16、8mg/mL的小儿复方鸡内金咀嚼片混悬液,C48/80组及空白对照组分别加入0.04 mg/mL的C48/80、缓冲液,测算各组细胞组胺、β-氨基己糖苷酶释放率及促进率。结果第14、21天时甲乙丁组小鼠均未出现过敏反应,过敏反应阴性;丙组小鼠出现呼吸困难、死亡,过敏反应强阳性。RPMC细胞C48/80组组胺释放率72.6%(致敏阳性),高中低剂量组的组胺释放促进率均低于64.23%(不具有致敏作用);C48/80组β-氨基己糖苷酶释放促进率为110.53%,(致敏阳性),高中低剂量组的β-氨基己糖苷酶释放促进率均低于80.31%(不具有致敏作用)。RBL-2H3细胞C48/80组的组胺释放率促进率81.6%,高中低剂量组的组胺释放促进率均低于64.23%;C48/80组β-氨基己糖苷酶释放促进率为120.93%(致敏阳性),高中低剂量组β-氨基己糖苷酶释放促进率均低于80.31%(不具有致敏作用)。结论小儿复方鸡内金咀嚼片不诱发KM小鼠全身过敏反应,同时也不导致分离自SD大鼠腹腔原代肥大细胞及Wistar大鼠嗜碱性白血病细胞株RBL-2H3细胞的类过敏反应。

急性嗜碱性粒细胞白血病一例并文献复习

目的探讨急性嗜碱性粒细胞白血病（ABL）的诊断、治疗及预后。方法回顾性分析1例72岁确诊为ABL的1q染色体异常的老年女性患者临床资料并进行相关文献复习。结果该患者经骨髓象、甲苯胺蓝染色、免疫分型、染色体等检查诊断为ABL，经化疗联合抗组胺药物治疗后效果不佳。结论诊断ABL主要依据于骨髓及外周血嗜碱性粒细胞明显增多、无Ph染色体异常、骨髓甲苯胺蓝染色阳性等特点；ABL尚无满意的治疗方法，通常采用化疗联合抗组胺药物治疗，但治疗效果差、死亡率高、预后不佳。

川椒方含药血清对RBL-2H3细胞IL-4、TNF-α的影响

目的探讨川椒方治疗变态反应性结膜炎可能的作用机制。方法实验分为空白组、模型组、阴性对照组、阳性对照组(酪氨酸激酶抑制剂,PP2)、川椒方治疗高、中、低剂量组共7组,观察川椒方含药血清对大鼠嗜碱性白血病细胞(rat basophilic leukemia,RBL-2H3)白介素4(IL-4)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响。川椒方高、中、低剂量含药血清组按筛选所得浓度和作用时间每孔分别给予含药血清40μL;PP2组于加抗原前30 min给予终浓度为1μM的PP2 40μL;阴性对照组于加抗原前2h给予10%空白血清40μL,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞上清液中IL-4、TNF-α的分泌量,Real-Time PCR检测IL-4、TNF-α mRNA的表达。结果与空白组相比,模型组和阴性对照组肥大细胞脱颗粒明显(P<0.01);RBL-2H3细胞分泌IL-4和TNF-α增多(P<0.01);IL-4和TNF-α mRNA表达增高(P<0.01)。与模型组和阴性对照组比较,川椒方各浓度组和PP2组肥大细胞脱颗粒现象明显抑制(P<0.01);RBL-2H3细胞分泌IL-4和TNF-α减少(P<0.01);IL-4和TNF-α mRNA表达下降(P<0.01),且川椒方抑制肥大细胞脱颗粒作用与浓度呈正相关。结论稳定肥大细胞,抑制其脱颗粒,减少炎症因子释放可能是川椒方治疗变应性结膜炎的作用机制。

嗜碱性粒细胞白血病的诊断与治疗进展

嗜碱性粒细胞增多常见于慢性髓细胞白血病（CML）加速期或急变期，其变化可作为CML的预后评价指标。嗜碱性粒细胞白血病（BL）是以嗜碱性粒细胞异常增多为主要临床表现的独立白血病类型。临床在排除其他血液系统疾病后，依据骨髓检查及外周血检查结果将嗜碱性粒细胞异常增多引起的BL分为急性BL和慢性BL。因BL发病率较低，目前尚无明确的诊断标准。随着检测技术和诊疗水平的不断提高，基于形态学、免疫学、细胞及分子遗传学（MICM）的诊断模式，可使越来越多单独发病的BL被识别和发现。笔者拟就目前国内外发现的BL的诊断和治疗进展进行综述。

慢性嗜碱性粒细胞白血病一例并文献复习

目的探讨慢性嗜碱性粒细胞白血病患者临床病理特征、免疫表型特征和治疗方案。方法应用细胞学、病理学、细胞免疫分型、细胞及分子遗传学诊断慢性嗜碱性粒细胞白血病患者1例，许进行相关文献复习。结果患者以四肢散在红色皮疹为主要临床表现，骨髓细胞学和骨髓病理检查提示成熟嗜碱性粒细胞增多，细胞免疫分型显示CD11b、CD13、CD38、CD123、CD15高表达，遗传学发现46，XX，t（4；5）（q22；q35），符合慢性嗜碱性粒细胞白血病临床病理及免疫表型特征。结论慢性嗜碱粒细胞白血病足一类罕见的白血病类型，具有独特的临床病理和免疫表型特征，诊断时注意与肥大细胞增多症相鉴别，同时重点完善分子遗传学检查以指导治疗。

食物致敏性评价表达人IgE高亲和力受体αβγ的大鼠嗜碱性白血病粒细胞2H3细胞株的建立及鉴定

目的建立稳定表达人IgE高亲和力受体alpha、beta和gamma链(human high affinity receptor containing alpha, beta and gamma chain,hFcεRIαβγ)的大鼠嗜碱性白血病粒细胞(rat basophil leukemia,RBL)-2H3细胞株。方法将包装好的载有hFcεRIαβγ慢病毒感染目的细胞RBL-2H3细胞,实时PCR检测细胞hFcεRIαβγ的表达水平,流式细胞仪分选hFcεRIα表达阳性细胞,并检测分选后细胞hFcεRIα的表达水平。结果成功构建重组慢病毒表达载体GV348-hFcεRIαβγ和慢病毒颗粒;慢病毒能够有效感染RBL-2H3细胞,hFcεRIαβγ在RBL-2H3细胞中成功表达,hFcεRIα在RBL-2H3细胞蛋白水平成功表达。结论初步构建了hFcεRIαβγ/RBL-2H3细胞,相较于RBL-2H3细胞,该细胞表达hFcεRIα,可与人血清IgE特异性结合,能够更好地应用于食品致敏性评价体系中。

RBL-2H3细胞脱颗粒模型研究

RBL-2H3细胞是体外研究变态反应的常用细胞,为了建立RBL-2H3细胞脱颗粒检测模型,以C48/80作为阳性药物,分析比较了细胞形态观测法、台盼蓝染色法、β-氨基己糖苷酶释放率及钙离子质量浓度检测等细胞脱颗粒检测方法.通过对C48/80作用质量浓度及时间的摸索,建立C48/80刺激RBL-2H3细胞脱颗粒的最佳药物作用条件.结果表明,β-氨基己糖苷酶释放率与细胞脱颗粒程度存在显著量-效关系,且操作简单、结果稳定.C48/80工作质量浓度为60μg/mL,最佳作用时间40 min.在此基础上,优化了DNPIgE/DNP-BSA诱导细胞脱颗粒体系,0.4μg/mL DNP-IgE致敏RBL-2H3细胞过夜,10μg/mL DNP-BSA诱导细胞,细胞脱颗粒程度最严重.同时发现,不同释放介质对DNP-BSA诱导细胞脱颗粒有显著影响.该结果可为变态反应相关研究提供实验基础.

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶-活性氧氧化应激信号通路在过敏反应中的作用及抗氧化剂干预实验研究

目的:探讨烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(Noxs)-活性氧(ROS)氧化应激通路在过敏反应中的作用,并考察抗氧化剂对过敏反应的影响。方法:体外建立肥大细胞脱颗粒模型,将细胞分为空白组、阳性对照组[培养基中含有Compound48/80 (C48/80) 100μmol/L]和抗氧化剂组[培养基中含有C48/80 100μmol/L+二苯基氯化碘盐(DPI) 5μmol/L]。利用酶联免疫吸附试剂盒检测各组细胞胞内β氨基己糖苷酶(β-Hex)、组胺、超氧化物歧化酶(SOD)、脂质过氧化物(LPO)及炎症介质白细胞介素-4(IL-4)和IL-6水平。利用荧光染色及流式细胞仪检测胞内活性氧(ROS)水平。采用Western blot检测三组细胞中烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶1、2、3、4(Nox1、Nox2、Nox3、Nox4)蛋白表达情况。结果:C48/80诱导大鼠原代嗜碱性白血病细胞(RBL-2H3)释放β-Hex、组胺及炎症介质IL-4、IL-6,RBL-2H3细胞脱颗粒过程中胞内的SOD含量呈下降趋势,而LPO及ROS浓度升高。利用DPI处理脱颗粒的RBL-2H3细胞后,可以抑制胞内ROS水平,同时升高胞内SOD含量,降低LPO浓度,并且抑制了β-Hex、组胺、IL-4及IL-6的释放。当肥大细胞脱颗粒时,Nox1-4的蛋白表达均呈上升趋势,抗氧化剂DPI可以抑制这一反应。结论:阻断Noxs-ROS信号通路可以抑制过敏反应,抗氧化剂的应用为抗过敏提供了新的治疗思路。

热毒宁注射液速发型过敏反应机制研究

目的探讨热毒宁注射液诱导的速发型过敏反应的特点,并初步探究其致敏机制。方法以大鼠嗜碱性细胞白血病细胞(RBL-2H3)作为热毒宁注射液诱发速发型过敏反应的评价模型。采用中性红染色法观察致敏时细胞脱颗粒的形态变化,测定β-氨基己糖苷酶(β-hex)的释放率来反映细胞的脱颗粒程度,MTT法评价致敏时的细胞活力;ELISA法测定白介素-4(IL-4)含量的变化,Fluo-3 AM Ca^(2+)荧光探针探究Ca^(2+)荧光强度的变化。结果热毒宁注射液可以引起RBL-2H3脱颗粒,剂量依赖性地增加细胞内β-hex以及IL-4的释放率,但是对细胞活力并没有影响;同时,热毒宁注射液作用于RBL-2H3后,Fluo-3 AM Ca^(2+)荧光探针的荧光强度先增加后减弱,细胞内Ca^(2+)浓度呈现先增加后减少的趋势。结论热毒宁注射液通过调节细胞内Ca^(2+)的浓度引起RBL-2H3脱颗粒,诱导β-hex以及IL-4等相关炎性介质的产生,从而引发速发型过敏反应。

RBL-2H3细胞在药理学研究上的应用

目的根据大鼠嗜碱性白血病细胞(basophilic leukemia cell line 2H3,RBL-2H3)的生物活性特征和体外培养的特点,对近年来RBL-2H3细胞在药理学研究上的应用进行综述。方法通过对国内外文献的整理,分析和归纳,较为全面的描述RBL-2H3细胞在药理学研究上的应用。结果和结论RBL-2H3细胞广泛用于研究FcεRI结构,以及受体配体反应介导的信号途径及其分子机制的研究,并且作为体外筛选抗过敏药物细胞模型。此外,RBL-2H3细胞也可用于细胞分泌的生化途径、特定基因功能的研究。RBL-2H3细胞膜富含受体,离子通道等,为其在仪器分析上的应用提供了有利条件。

羟基红花黄色素A对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒的影响

目的:研究羟基红花黄色素A(HYSA)对抗原诱导大鼠嗜碱性细胞白血病细胞株(Rat basophilic leukemiacell line,RBL-2H3)细胞脱颗粒的影响。方法:采用MTT法检测HYSA对RBL-2H3细胞增殖活性的影响;每孔加入抗DNP-IgE单抗(0.25μg/ml)与二硝基苯基人血清白蛋白(30ng/ml)以复制抗原诱导细胞脱颗粒模型,研究HYSA对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒的抑制作用;采用Westernblot法检测HYSA对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)蛋白表达的影响。结果:3～300μmol/L的HYSA对RBL-2H3细胞的增殖无明显影响;300μmol/LHYSA能显著降低RBL-2H3细胞脱颗粒程度以及抑制MAPK蛋白的表达。结论:HYSA对抗原诱导RBL-2H3细胞活化脱颗粒的炎症反应具有一定的抑制作用,且其作用可能与抑制MAPK蛋白表达有关。

食物致敏性评价RBL-2H3细胞模型的研究

目的研究大鼠嗜碱性白血病粒细胞(ra basophil leukemia cells,RBL-2H3细胞)用于食物致敏性评价的可行性。方法实验组和对照组动物血清按照不同倍数稀释,包括1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256和1:512,将稀释后的血清分别与RBL-2H3细胞孵育4 h,然后用MEM完全培养基重新培养24 h。最后,向细胞分别加入含有10μg/ml和100μg/ml OVA的MEM溶液,孵育45 min,测定上清液中β-氨基己糖苷酶含量和细胞内总的β-氨基己糖苷酶含量,计算β-氨基己糖苷酶释放率。结果对比不同的蛋白刺激浓度发现:100μg/ml OVA刺激后,稀释比例为1:4、1:8、1:16和1:32时,实验组和对照组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01);10μg/ml OVA刺激后,稀释比例仅1:4、1:8和1:16时,实验组和对照组差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。对比不同的血清稀释倍数发现,1:4倍稀释时实验组β-氨基己糖苷酶释放率显著高于稀释比例1:256实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论初步建立了RBL-2H3细胞致敏模型,以期用于食物致敏性评价中。