磁分离技术和纳米金比色法用于嗜碱性粒细胞活化试验研究

嗜碱性粒细胞活化试验是一种安全、高效的诊断过敏疾病技术,成为临床体外诊断过敏疾病的主要方法之一。目前,嗜碱性粒细胞活化试验主要是利用流式细胞术对细胞进行检测,这种方法通常存在检测时间长、操作繁琐和成本高等缺点。针对这些问题,本研究开发了一种表面修饰HLA-DR抗体的磁珠分离体系,将其与过敏患者的外周血共孵育5 min后,利用磁性分离技术,筛选出表面含有HLA-DR标记物的细胞。测试结果表明,筛选后的嗜碱性粒细胞在全血中的细胞占比从0.2%提升到11.5%,嗜碱性粒细胞活化试验检测灵敏性得到了有效提高。进一步地,本研究构建了CD63适配体修饰的金纳米粒子检测体系,利用CD63适配体特异性识别活化后的嗜碱性粒细胞表面的CD63抗体,使金纳米粒子在嗜碱性粒细胞表面聚集,溶液颜色由红色转变为蓝紫色,实现对激活的嗜碱性粒细胞可视化比色检测,为临床开展嗜碱性粒细胞活化试验提供了新的方法。

人嗜碱性粒细胞胞膜蛋白在过敏诊断中的研究进展

嗜碱性粒细胞是外周血白细胞中丰度最低的粒细胞亚群。近年来,嗜碱性粒细胞作为过敏反应的经典效应细胞引起了人们的极大关注。嗜碱性粒细胞受特异性过敏原刺激后可释放多种炎性介质和细胞因子,同时伴随多种胞膜蛋白的表达变化。尽管目前嗜碱性粒细胞活化的标志分子尤其是CD63和CD203c广泛应用于临床诊断和实验室研究,然而嗜碱性粒细胞在静息和活化状态下的最佳标志分子仍有争议。本文对已知的嗜碱性粒细胞在不同状态下胞膜所表达的分子做一总结,希望能为以后开展嗜碱性粒细胞的相关研究提供新的方向。

流式细胞术分析户尘螨致敏的嗜碱性粒细胞活化试验及其临床意义

目的建立流式细胞术(FCM)分析嗜碱性粒细胞活化试验(BAT)的方法并评估其在过敏性疾病诊断中的意义。方法以CD63/CD203c/CD45抗体组合,建立用FCM分析户尘螨致敏的嗜碱性粒细胞脱颗粒的方法。以皮肤点刺试验(SPT)作为金标准方法,将FCM检测活化嗜碱性粒细胞与荧光酶联免疫吸附试验(FELISA)测定特异性IgE(sIgE)结果作比较,分析其临床应用价值。结果以CD45和CD203c联合设门,可以得到纯的嗜碱性粒细胞;CD63是活化嗜碱性粒细胞的最佳标志;Spearman相关系数显示,sIgE的Unicap分级与活化嗜碱性粒细胞呈中度相关;FCM检测活化嗜碱性粒细胞与FELISA测定sIgE结果在户尘螨过敏性疾病诊断中的差异无统计学意义(P>0.05),但前者的敏感度、符合率、阳性预测值以及阳性似然比各项指标都优于后者。结论通过FCM分析CD63的表达来确定活化嗜碱性粒细胞是诊断速发型超敏反应的一种有效、安全的体外检测方法。

流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病诊断中的应用

流式细胞术是20世纪70年代发展起来的一种快速的细胞定量分析和分选的新技术,具有测量速度快、高灵敏度、高精确度、多参数分析、高纯度分选的特点。过敏性疾病为威胁人类生命健康的疾病之一,但其诊断通常依赖病史以及适当的确证试验,但这些确证实验尚缺乏有力确证依据。过敏反应发生时,嗜碱性粒细胞表面分子可发生相应变化,通过对其表面标志物的检测,可达到对过敏性疾病进行鉴别诊断的目的。本文就流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验的几种设门筛选嗜碱性粒细胞思路加以介绍,并对流式细胞术在过敏性疾病诊断中的应用价值做一综述,从而为流式细胞术在过敏性疾病诊断领域中广阔的应用前景提供一有力的理论支持。

蜉蝣过敏原皮肤点刺试验、鼻黏膜激发试验与嗜碱性粒细胞激发实验的对比

目的观察蜉蝣过敏原嗜碱性粒细胞激发实验与皮肤点刺试验、鼻黏膜激发试验阳性结果是否相符,为过敏性鼻炎的诊断提供参考。方法统计过敏性鼻炎患者皮肤点刺试验中蜉蝣过敏原阳性率;随机选择30例蜉蝣过敏原皮肤点刺试验阳性患者和30例阴性者鼻黏膜激发试验;选择另外30例蜉蝣过敏原皮肤点刺阳性血液和30例皮肤点刺阴性血液嗜碱性粒细胞激发实验。结果 2078例过敏性鼻炎患者皮肤点刺试验中,蜉蝣过敏原阳性1337例,阳性率为64.34%;30例皮肤点刺试验阳性患者进行鼻黏膜激发试验,均出现阳性反应(100.00%),30例阴性患者未出现阳性反应;30例皮肤点刺试验阳性患者进行嗜碱性粒细胞激发实验,阳性26例(86.67%)。结论蜉蝣过敏原嗜碱性粒细胞激发实验与皮肤点刺试验、鼻黏膜激发试验的结果相符。

嗜碱性粒细胞活化机制的研究进展

嗜碱性粒细胞已被认知130余年,特别是近年来随着动物敲除模型的建立、高纯度细胞分选技术的应用,以及单克隆抗体技术的发展,对其表型和功能认识更加的深入和全面,发现嗜碱性粒细胞不仅参与过敏反应,而且在固有性免疫及免疫调节方面也发挥了重要作用。

类风湿性关节炎患者嗜碱性粒细胞活化机制研究

目的:探讨类风湿性关节炎患者外周血嗜碱性粒细胞的活化情况及其机制。方法:流式检测正常人对照组和RA患者组外周嗜碱性粒细胞活化标记物CD203c的表达及IL-4阳性的比例;用电化学发光法检测血清IgE水平;负选正常人嗜碱性粒细胞,以anti-IgE刺激为阳性对照,置含或不含IgE的微环境中,流式检测CD203c的表达及IL-4阳性的比例。结果:较正常人对照组,RA患者嗜碱性粒细胞高表达CD203c和IL-4(均P<0.05);RA患者血清IgE水平显著高于正常人对照组(P<0.05);RA患者血清和其血清中纯化的IgE可使负选的正常人来源的嗜碱性粒细胞活化,上调CD203c表达及IL-4阳性比例。结论:RA患者嗜碱性粒活化与发病相关,且主要由IgE介导,靶向嗜碱性粒细胞及其活化通路有望为RA的防治提供新的策略。

嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病应用中的研究进展

21世纪以来,过敏性疾病的发病率逐年增高,严重威胁着人类的生命健康。然而临床中针对这一类疾病目前没有安全高效的检测方法。本文通过梳理过敏性疾病及嗜碱性粒细胞活化试验的相关文献资料,认为该试验是一种安全高效的辅助诊断过敏性疾病的方法,其理论依据是嗜碱性粒细胞的表面标志物会随着过敏反应的发生而变化。基于这一理论依据,传统的嗜碱性粒细胞活化试验是利用流式细胞术对细胞进行检测,进而体外辅助诊断过敏性疾病。近年来基于微流体技术的新型嗜碱性粒细胞活化试验逐步兴起。流式细胞术是一种对细胞进行快速定量分析和筛选的方法。微流体技术是一种高精度处理小体积流体的技术,具有成本低、操作简便且所需样本及试剂量少的优点。本文就嗜碱性粒细胞的相关概念、分别基于流式细胞术及微流体技术的嗜碱性粒细胞活化试验及其在临床过敏性疾病中的应用价值做一综述,以期为嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病诊断领域的应用提供理论支持。

嗜碱性粒细胞活化试验的临床应用

嗜碱性粒细胞是参与IgE介导的Ⅰ型超敏反应及2型炎症反应的重要效应细胞之一。嗜碱性粒细胞活化试验模拟体内Ⅰ型超敏反应的过程,利用流式细胞术检测过敏原刺激后嗜碱性粒细胞表面特异性标志物的表达水平,以反映嗜碱性粒细胞的活化程度及状态。嗜碱性粒细胞活化试验作为一种过敏原体外试验,具有安全性好、特异性高等优点,在临床上可用于食物或药物过敏、气道过敏性疾病、膜翅目昆虫毒液过敏和严重过敏反应等的辅助诊断,以及不同过敏原特异性免疫治疗的疗效监测。嗜碱性粒细胞活化试验相关过敏原试剂、操作流程及解读方法尚需进一步标准化,以促进该方法的推广应用。

嗜碱性粒细胞活化试验在变态反应性疾病诊断中的应用

变态反应性疾病是影响人类生命健康和生活质量的疾病之一。随着流式细胞术的发展,嗜碱性粒细胞活化试验(basophil activation test,BAT)成为临床中诊断变态反应性疾病的一种新型方法,建立标准化的BAT方法对不同研究结果的比较和验证非常重要。本文就BAT的技术细节以及在临床诊断和监测不同变态反应性疾病中的应用进行综述。

小鼠外周血嗜碱性粒细胞活化后的CD200R表达

目的探讨流式细胞术鉴定小鼠外周血嗜碱性粒细胞方法,并分析其活化后表面分子CD200R的表达。方法分离BALB/c小鼠外周血,以抗-IgE-FITC和抗-CD4-PE/cy7与抗-CD45R B220-PE/cy7双色免疫荧光染色结合流式细胞术分析,鉴定小鼠外周血嗜碱性粒细胞;正常以及卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠外周血,抗-IgE刺激后抗-IgE-FITC、抗-CD4-PE/cy7、抗-CD45R B220-PE/cy7和抗-CD200R-PE三色免疫荧光染色结合流式细胞术检测CD200R的表达。结果小鼠外周血中嗜碱性粒细胞的数量占白细胞总数为0.7%,抗-IgE刺激后嗜碱性粒细胞中CD200R+表达率由3.62%升至31.6%(P<0.01)。OVA致敏小鼠外周血,经O-VA体外刺激后嗜碱性粒细胞CD200R+表达率由13.43%升至23.5%(P<0.05)。结论 IgE+CD4-CD45R-双色荧光标记可以鉴定小鼠嗜碱性粒细胞;CD200R可以作为小鼠嗜碱性粒细胞重要的表面活化分子。

软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况研究

目的探讨软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者的嗜碱性粒细胞活化情况。方法选取83例软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者纳入观察组,另选取同时期83例健康体检者纳入对照组。比较2组嗜碱性粒细胞活化指标(CD63、CD203c及CD45)荧光强度,并比较观察组内不同过敏原类型、过敏原种数及UniCAP分级者的检测结果,采用Spearman秩相关分析探讨嗜碱性粒细胞活化指标荧光强度与UniCAP分级的关系。结果观察组的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c及CD45的荧光强度为(32.26±2.23)、(50.31±5.61)及(36.36±5.03),分别高于对照组的(6.15±1.20)、(18.28±2.63)及(7.02±1.36),差异有统计学意义(P<0.05)。观察组内不同过敏原类型及不同过敏原种数患者的检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05);UniCAP分级5~6级者的嗜碱性粒细胞CD63、CD203c、CD45的荧光强度为(38.16±3.15)、(66.73±6.96)、(50.86±6.59),分别高于UniCAP分级3~4级者的(29.37±2.31)、(51.13±5.78)、(39.10±5.13)和UniCAP分级1~2级者的(18.68±1.76)、(29.36±3.79)、(22.32±1.93),且UniCAP分级3~4级者高于UniCAP分级1~2级者,差异均有统计学意义(P<0.05);Spearman秩相关分析显示,嗜碱性粒细胞活化指标CD63、CD203c、CD45均与UniCAP分级呈正相关(P<0.05)。结论软叶针葵花粉和鱼尾葵花粉致敏患者嗜碱性粒细胞活化情况突出,且活化指标CD63、CD203c、CD45表达程度与UniCAP分级密切相关,具有较高的检测价值。

过敏性休克大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的表达

目的通过流式细胞仪分析CD63的表达来确定嗜碱性粒细胞活化情况,探讨其在过敏性休克诊断中的应用价值。方法16只大鼠随机分为对照组和实验组,采用卵蛋白注射建立过敏性休克大鼠动物模型,以CD63、CD45、CD203c抗体组合,应用流式细胞仪检测大鼠血嗜碱性粒细胞CD63的活化情况,并采用免疫荧光法对大鼠肺组织CD63进行免疫荧光染色。结果 (1)以CD45和CD203c联合设门,可以得到纯的嗜碱性粒细胞。(2)实验组CD63的表达率为(17.34±2.04)%,对照组CD63的表达率为(1.52±0.35)%,差异具有统计学意义(P<0.01)。(3)与对照组相比,实验组大鼠肺组织中嗜碱性粒细胞CD63的表达增多。结论流式细胞仪检测CD63的表达有望作为过敏反应体内试验的补充,具有较好的临床应用价值。

嗜碱性粒细胞在过敏性疾病中研究进展及临床应用展望

Th2免疫应答是过敏性疾病发病最重要的免疫学机制。嗜碱性粒细胞(Ba)在过敏性炎症中起着始动者、效应者和调节者作用。在过敏性炎症的始动阶段,Ba可能通过独立或与树突状细胞(DCs)间通过协同作用完成抗原递呈作用而启动Th2免疫应答。Ba还表现出增强记忆性Th2、Th17免疫应答的免疫学效应,提示其在记忆性免疫应答中起着重要作用。临床研究发现嗜碱性粒细胞活化试验(basophil activation test,BAT)在过敏性疾病诊断中具有独特优势,且在监测评估特异性免疫治疗和生物制剂治疗疗效中具有作为生物学标记的潜在价值。

活动性系统性红斑狼疮患者外周血嗜碱性粒细胞CD62L、BAFF和CD40L表达变化及意义

目的探讨活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血嗜碱性粒细胞淋巴归巢受体(CD62L)、B淋巴细胞活化刺激因子(BAFF和CD40L)表达变化及意义。方法选取SLE患者57例,根据SLEDAI评分将SLE患者分为活动组(SLEDAI评分≥10分)29例和非活动组(SLEDAI评分<10分)28例,选取同期20例查体健康者作为对照组,应用流式细胞术检测SLE患者和正常人外周血CD62L、BAFF和CD40L表达,并采用Spearman法分析其与血清Anti-ds DNA水平的相关性。结果活动组与非活动组外周血CD62L表达水平均高于对照组(P均<0.05),且活动组高于非活动组(P<0.05)。活动组外周血BAFF和CD40L表达水平均高于对照组和非活动组(P均<0.05);而非活动组与对照组BAFF和CD40L表达差异无统计学意义(P均>0.05)。SLE患者外周血嗜碱性粒细胞CD62L和CD40L表达与血清Anti-ds DNA抗体水平均呈正相关(r分别为0.34、0.36,P均<0.05);而外周血嗜碱性粒细胞BAFF表达与血清Anti-ds DNA抗体水平无关(r=0.26,P=0.14)。结论活动性SLE患者外周血CD62L、BAFF和CD40L表达升高,嗜碱性粒细胞可能通过CD62L介导向次级淋巴器官迁移,通过BAFF和CD40L活化自身反应性B淋巴细胞而产生多种自身抗体,进而参与SLE的发病。

血小板活化因子与实验性肾损伤

70年代初,Benveniste等发现,IgE敏感的嗜碱性粒细胞能释放一种激活血小板的物质。

嗜碱性粒细胞活化试验在儿童食物过敏中的诊断价值

目前儿童食物过敏的诊断程序包括病史、皮肤点刺试验、血清特异性免疫球蛋白E（sIgE）抗体检测、食物激发试验等。其中皮肤点刺试验和sIgE抗体检测为初筛试验，其诊断敏感性高而特异性低；双盲安慰剂对照食物激发试验为诊断的金标准，但可能引发全身过敏反应，临床上应用较少。嗜碱性粒细胞活化试验作为一种体外变应原诊断试验，因其特异性高、安全等因素在儿童食物过敏诊断中有重价值。此外，嗜碱性粒细胞活化试验还可用于评价儿童食物过敏的严重程度及免疫治疗监测等。

嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病的临床应用进展

由于城市化和全球化的持续发展、人类生活方式改变、环境污染严重,近年来,全球过敏性疾病发病率增长迅速,患病率已高达22％,主要包括过敏性鼻炎、过敏性哮喘和变应性皮炎等,严重影响了人们尤其是儿童的生活质量和健康. 临床上对于过敏性疾病的常见诊断方法主要包括病史收集和实验室检测.病史收集易受主观因素影响,存在不确定性.实验室检测方法包括体内激发试验和体外血清特异性免疫球蛋白E（specific Immunoglobulin E,sIgE）检测。

药物过敏的实验室检查

药物过敏约占整个药物不良反应的5%～10%,是敏感个体对药物本身或者辅料产生的免疫学反应,是由免疫学机制介导的超敏反应。大多数药物过敏是由速发型或迟发型超敏反应引发。药物过敏的诊断主要包括在体诊断、体外诊断和药物激发试验。其中,药物点刺/皮内试验是临床上最常用的检测方法;药物特异性IgE检测是最常见的速发型药物过敏反应体外诊断方法;药物斑贴试验是诊断迟发型药物过敏反应的诊断方法;一些新的体外诊断方法包括嗜碱性粒细胞活化实验、药物特异性淋巴细胞增殖/活化试验、ELISA方法 /流式细胞技术/ELISpot方法检测药物诱导的相关细胞因子也显示出较高的特异性,但仍需大样本深入研究。药物过敏实验室诊断方法的敏感性并非100%,必要时仍需要药物激发试验。

流式细胞术分析嗜碱性粒细胞活化试验在过敏性疾病中的应用

过敏性疾病是影响人们健康和生活质量的常见疾病。随着流式细胞术的发展,嗜碱性粒细胞活化试验(basophil activation test,BAT)作为一种体外激活试验,已成为诊断血清特异性免疫球蛋白E(specific immunoglobulin E,sIgE)介导的过敏性疾病的一种新型方法。将BAT标准化,并将其应用于临床实践及过敏机制的探索这一过程非常重要。该文就BAT的主要原理及其在过敏性疾病诊治方面的应用进行综述。