嗜碱耐盐奇异变形杆菌病原学实验研究

为了解嗜碱耐盐性奇异变形杆菌的生物学特征及致病力 ,用生化试验、ELISA、动物试验等方法进行病原学鉴定及毒力试验。该奇异变形杆菌除能在pH1 0和 10 %Nacl的培养基上生长外 ,其余生理生化特征无特殊表现。内毒素检出率为 10 0 % ,2株检出ST ;对小白鼠的致病力很强 ,能产生耐热性溶血素 ,80 %以上菌株产生超广谱 β -内酰胺酶 ,3重以上耐药株发生率 10 0 %。本组奇异变形杆菌具有嗜碱耐盐性 ,其生物学特征与变形杆菌标准菌株无特殊区别 。

嗜碱耐盐奇异变形杆菌的分离与鉴定及致病性研究

奇异变形杆菌(P.mirablis,以下简称Pm)是引起人类感染性腹泻和食物中毒的常见病原菌[1-3].近几年国内有关Pm引起的食物中毒报告有所增多.

嗜碱耐盐性奇异变形杆菌引起食物中毒的病原学实验研究

对 18株嗜碱耐盐性奇异变形杆菌引起的食物中毒进行了病原学鉴定。结果 :奇异变形杆菌除能在 p H10 .0和10 % Na Cl胨水中生长外 ,其余生理生化特征无特殊表现。此类菌株内毒素检出率为 10 0 .0 0 % (18/ 18) ,还有 2株检出 ST;具有较强的溶血能力 ,对小白鼠的致病力很强 ,对多种抗菌素耐药 ,7重以上耐药株发生率 10 0 %。证实本菌为很强的致病菌。

重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中的表达和酶学性质研究

用LB培养基培养转化重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因的工程菌BL21(DE3),提取粗酶液,然后利用SDS-PAGE电泳考察重组ALDH的表达量和分子量;测定其活性;并对表达产物的最适pH、最适温度、金属离子的影响和Km值进行研究。结果表明,工程菌BL21(DE3)表达的ALDH量明显高于对照菌,亚基分子量约为56 kDa;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了24倍;最适反应温度为20～40℃,最适pH为9.0～9.5,K+和Na+对酶有激活作用,而Mn2+,Mg2+对酶有抑制作用;Km值为1.73 mmol/L。说明重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中能够高效表达。

嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC的克隆及组氨酸融合酶蛋白的表达

应用PCR扩增嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC,重组至原核表达载体pET30b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达的重组乙醛脱氢酶在碳端含有一个组氨酸标签。SDS-PAGE考察蛋白的表达量和亚基分子量,并对Km值进行了考察。成功构建了pET30b-aldC原核表达质粒;诱导表达了亚基分子量约为56 kDa的组氨酸融合蛋白;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了约3.5倍;Km值为2.874 mmol/L。成功克隆并诱导表达了含组氨酸标签的嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC。

碱蓬根系嗜盐耐盐真菌的分离与鉴定

为分析耐盐植物碱蓬根系真菌的组成和耐盐程度,采用常规植物组织真菌分离方法对盐碱地中生长健康的碱蓬根系进行真菌分离,将分离得到的真菌在不同Na Cl浓度培养基上进行培养,检测菌株的嗜盐耐盐性,并对分离得到的嗜盐耐盐真菌进行形态学鉴定和分子生物学鉴定。结果显示:分离得到耐盐真菌40株,分别属于镰刀菌属(Fusarium sp.)、链格孢属(Alternaria sp.)、曲霉属(Aspergillus sp.)、腐霉属(Pythium sp.)等,其中,棘孢曲霉(Aspergillus aculeatus)和尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)是没有被报道过的耐盐真菌;分离得到嗜盐真菌3株,都属于聚多曲霉(Aspergillus sydowii)。结果表明,耐盐植物碱蓬中嗜盐耐盐真菌多样性丰富。

Halomonas sp. TTW4盐敏感突变株的筛选与耐盐基因克隆

TTW4是本实验室自内蒙古盐湖中分离得到的一株中度嗜盐菌,经形态学、生理生化和16srDNA序列分析确定其属于Halomonas属。通过紫外诱变获得该菌株具有利福平抗性的突变株UV-1。利用三亲本杂交得到UV-1的8株盐敏感突变株。碘结晶法测定UV-1和突变株胞内甜菜碱含量,UV-1胞内甜菜碱最多可达190μg/mg,盐敏感突变株胞内甜菜碱含量有明显降低,一般在150μg/mg以下,最低的只有110μg/mg。以其中一株盐敏感突变株S3为实验材料,反向PCR扩增转座子Tn5插入位点侧翼序列,BLAST分析表明插入位点为色氨酸合酶α亚基基因,推测该基因与耐盐功能相关。

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉。抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物。根据16SrDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%。由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值。

新疆罗布泊嗜碱细菌的分离及其生理学特性的初步研究

从新疆罗布泊“大耳朵”地区的湖盆沉积物中分离得到151个细菌菌株。研究比较了不同培养基的分离效果,测定了嗜碱细菌生长的pH值范围,对不同碱性物质KOH、K2CO3、NaOH、Na2CO3的选择性和对NaCl、KCl的耐受性。结果表明,添加了罗布泊盐壳浸提物的培养基更有利于嗜碱细菌的富集培养和分离。分离菌株中专性嗜碱菌、兼性嗜碱菌和耐碱菌的比例分别为29.8%,39.7%和30.5%。54.3%的嗜碱菌菌株对4种碱性物质具有广泛的适应性,13.2%菌株对Na^＋有一定的依赖性,对含K^＋碱性物质敏感,只有1.9%的菌株对CO32-碱性物质敏感。77.1%嗜碱细菌可以耐受7%-15%的NaCl和10%-20%的KCl,具有较强的耐盐特性,其中是否存在嗜盐碱双极端因子的古菌,尚有待进一步研究确定。

谨防饭菜中的“定时炸弹”

一般说多数细菌“怕”盐,在盐渍的食品中很难生存。但也有不怕盐的细菌,如“副溶血性弧菌”就恰恰喜欢含盐的环境。因此,有人把这类细菌统称为“嗜盐性弧菌群”(简称“嗜盐菌”)。嗜盐菌广泛存在于含有一定盐分的海水、海底部沉积物及海产食品中(如海鱼、海虾、海蟹及贝类)。