重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中的表达和酶学性质研究

用LB培养基培养转化重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因的工程菌BL21(DE3),提取粗酶液,然后利用SDS-PAGE电泳考察重组ALDH的表达量和分子量;测定其活性;并对表达产物的最适pH、最适温度、金属离子的影响和Km值进行研究。结果表明,工程菌BL21(DE3)表达的ALDH量明显高于对照菌,亚基分子量约为56 kDa;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了24倍;最适反应温度为20～40℃,最适pH为9.0～9.5,K+和Na+对酶有激活作用,而Mn2+,Mg2+对酶有抑制作用;Km值为1.73 mmol/L。说明重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中能够高效表达。

嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC的克隆及组氨酸融合酶蛋白的表达

应用PCR扩增嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC,重组至原核表达载体pET30b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达的重组乙醛脱氢酶在碳端含有一个组氨酸标签。SDS-PAGE考察蛋白的表达量和亚基分子量,并对Km值进行了考察。成功构建了pET30b-aldC原核表达质粒;诱导表达了亚基分子量约为56 kDa的组氨酸融合蛋白;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了约3.5倍;Km值为2.874 mmol/L。成功克隆并诱导表达了含组氨酸标签的嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC。

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉。抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物。根据16SrDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%。由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值。