重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中的表达和酶学性质研究

用LB培养基培养转化重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因的工程菌BL21(DE3),提取粗酶液,然后利用SDS-PAGE电泳考察重组ALDH的表达量和分子量;测定其活性;并对表达产物的最适pH、最适温度、金属离子的影响和Km值进行研究。结果表明,工程菌BL21(DE3)表达的ALDH量明显高于对照菌,亚基分子量约为56 kDa;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了24倍;最适反应温度为20～40℃,最适pH为9.0～9.5,K+和Na+对酶有激活作用,而Mn2+,Mg2+对酶有抑制作用;Km值为1.73 mmol/L。说明重组嗜碱耐盐芽孢杆菌(XJU-1)乙醛脱氢酶aldA基因在工程菌BL21(DE3)中能够高效表达。

嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC的克隆及组氨酸融合酶蛋白的表达

应用PCR扩增嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC,重组至原核表达载体pET30b(+),转化大肠杆菌BL21(DE3),诱导表达的重组乙醛脱氢酶在碳端含有一个组氨酸标签。SDS-PAGE考察蛋白的表达量和亚基分子量,并对Km值进行了考察。成功构建了pET30b-aldC原核表达质粒;诱导表达了亚基分子量约为56 kDa的组氨酸融合蛋白;乙醛脱氢酶活性比对照菌增加了约3.5倍;Km值为2.874 mmol/L。成功克隆并诱导表达了含组氨酸标签的嗜碱耐盐芽孢杆菌乙醛脱氢酶基因aldC。

嗜碱耐盐奇异变形杆菌病原学实验研究

为了解嗜碱耐盐性奇异变形杆菌的生物学特征及致病力 ,用生化试验、ELISA、动物试验等方法进行病原学鉴定及毒力试验。该奇异变形杆菌除能在pH1 0和 10 %Nacl的培养基上生长外 ,其余生理生化特征无特殊表现。内毒素检出率为 10 0 % ,2株检出ST ;对小白鼠的致病力很强 ,能产生耐热性溶血素 ,80 %以上菌株产生超广谱 β -内酰胺酶 ,3重以上耐药株发生率 10 0 %。本组奇异变形杆菌具有嗜碱耐盐性 ,其生物学特征与变形杆菌标准菌株无特殊区别 。

嗜碱耐盐奇异变形杆菌的分离与鉴定及致病性研究

奇异变形杆菌(P.mirablis,以下简称Pm)是引起人类感染性腹泻和食物中毒的常见病原菌[1-3].近几年国内有关Pm引起的食物中毒报告有所增多.

三株耐盐菌的筛选及蜡样芽孢杆菌对Cr(Ⅵ)的去除效应研究

为挖掘高盐环境下Cr(Ⅵ)废水处理的微生物资源,以四川自贡长山盐矿地下卤水及周边环境土壤为材料,分离纯化出3株耐盐菌N1、N2、N3,经16S测序鉴定为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、高地芽孢杆菌(Bacillus altitudinis)、希瓦氏菌(Shewanella sp.)。3株菌株在不同NaCl浓度下生长时均表现出低浓度促进、高浓度抑制的趋势,NaCl浓度为10%时,N1、N2、N3菌株均正常生长;当NaCl浓度达15%时,N1菌株可正常生长,N2、N3菌株生长受到不同程度的抑制,耐盐能力为N1>N2>N3。选取耐盐能力最佳的N1菌株为供试菌株用于研究Cr(Ⅵ)的去除效应,在NaCl浓度为10%、Cr(Ⅵ)浓度为40 mg/L条件下,72 h后Cr(Ⅵ)的去除率达到81.2%,去除速率与菌体浓度呈正相关。

Bacillus属嗜盐嗜碱细菌的研究进展

Bacillus属由于其成员表现出广泛的多系性以及彼此间几乎没有共同点,长期以来一直被认为是分类和系统发育异常的属。随着测序技术和纯培养技术的进步,自Cohn建立Bacillus属以来,不断有新的菌株从不同生境中被分离,也有许多该属的成员被重新分类为其他的属。Bacillus属由于其具有芽孢的特性而广泛分布于自然界的不同环境,其嗜盐嗜碱成员已经成为人们高度重视的双重极端微生物类群,在盐碱的双重压力下经过长期的进化选择,形成了独特的生物活性物质代谢途径、新的调控机制及与这些生理生化特征有关的新基因类型。因此,针对Bacillus属中嗜盐嗜碱菌的发现历史、分布与分类现状、生理生化特征及应用前景进行综述,以期为嗜盐嗜碱芽孢杆菌新物种资源的挖掘及功能的开发利用提供参考。

一株耐碳酸盐Bacillus属细菌的鉴定与特性分析

本研究从松嫩平原pH值在10.0以上、植物难以生存的斑块状裸地中分离到一株细菌SA-5,经鉴定该菌株为革兰氏染色阴性,杆状,接触酶阳性,氧化酶阴性,菌落呈橙黄色的好氧细菌,可水解淀粉。抗逆特性分析显示,菌株SA-5可在高达275mmol/L Na2CO3或pH 12.0以及2.0mol/L NaCl培养基中生长,中性条件下生长明显受到抑制,其中对碳酸盐的耐受性远高于普通植物。根据16SrDNA序列等分析结果显示,菌株SA-5属于Bacillus属,仅与菌株Bacillus aurantiacus K1-5T相似性最高,为99%,与其余已发表菌株均低于97%。由以上结果可见,菌株SA-5是Bacillus属中一株嗜碱耐盐菌,并且菌株SA-5对耐碳酸盐基因的开发具有潜在的价值。

枯草芽孢杆菌GB03与保水剂互作对小花碱茅生长和耐盐性的影响

本文将枯草芽孢杆菌菌株GB03和保水剂结合在一起,研究其对盐生牧草小花碱茅生长和耐盐性的促进作用。结果发现,在正常条件下,添加保水剂和GB03的幼苗比对照地上部干重增加53.5%,Na^+含量降低56.7%,K^+含量增加64.3%,K^+/Na^+提高157.5%;比单独添加GB03的幼苗地上部干重增加116.8%,Na^+含量降低49.2%,K^+含量增加119.1%,K^+/Na^+提高2.3倍。在400 mmol·mL^(-1) NaCl盐胁迫下,添加保水剂和GB03的幼苗比对照地上部Na^+含量降低19.6%,K^+含量增加119.6%,K^+/Na^+提高162.7%,渗透势降低44.7%;比单独添加GB03幼苗地上部K^+增加107.4%,K^+/Na^+提高120.7%,渗透势降低10.2%。结果表明,保水剂与枯草芽孢杆菌GB03结合能显著促进正常条件和盐逆境下小花碱茅的生长,显著降低地上部Na^+含量,增加K^+含量,提高K^+/Na^+,并降低了叶片渗透势,从而有利于小花碱茅幼苗适应盐逆境。

一株耐盐嗜热菌Aneurinibacillus thermoaerophilus H7的分离及其油脂降解特性

针对高盐、高油餐厨垃圾高温堆肥功能菌株缺乏的问题,以大豆油为唯一碳源,通过测定生物量、脂肪酶活性和油脂降解率,从餐厨垃圾堆积处的土壤样品中分离筛选出一株嗜热油脂降解菌H7.通过形态特征、生理生化特征和16SrDNA序列分析,对筛选的菌株进行鉴定,考察其耐盐能力、油脂降解和生长特性.结果表明,菌株H7为嗜热嗜气解硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillus thermoaerophilus),最高耐盐浓度为30 g/L.菌株H7在油脂浓度为15 g/L的发酵培养基中发酵72 h,油脂降解率为60.11%,菌体浓度OD600为1.88,脂肪酶活性为11.65 U/mL.菌株H7可生长的温度为40-60℃,pH值为5-8,摇床转速为120-240 r/min,最适生长的温度为50℃,pH值为6,摇床转速为220 r/min.本研究获得了具有耐盐性和能降解高浓度油脂的嗜热菌株H7,可为高盐高油脂含量的餐厨垃圾堆肥提供微生物菌种资源.(图8表2参34)

嗜热脱氮土壤芽孢杆菌β-葡萄糖苷酶的克隆与重组表达及其酶学性质研究

【目的】克隆嗜热脱氮土壤芽孢杆菌中的β-葡萄糖苷酶基因bglB,在E.coli中异源表达,纯化并研究其酶学性质。【方法】利用PCR技术从嗜热脱氮土壤芽孢杆菌的基因组DNA中克隆得到bglB基因,将该基因克隆到表达载体pGEX-2TL上并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对纯化后的β-葡萄糖苷酶的酶学性质及寡聚状态进行分析。【结果】重组表达的β-葡萄糖苷酶最适温度为65°C,最适pH为7.0,能在pH 5-10、60°C下稳定存在4 h,并能在较高的离子强度(880 mmol/L K+)下发挥其功能。Al3+离子对其有强烈的激活作用,Co2+有一定的抑制作用。最适反应条件下该酶比活力为0.043 IU/mg。该酶具有多种寡聚体形式,这些寡聚体均有β-葡萄糖苷酶活性。【结论】获得一个耐热耐盐的中性β-葡萄糖苷酶,为进一步研究β-葡萄糖苷酶的催化作用机理,提高其热稳定性提供一定的帮助。

原生质体融合选育耐高温耐盐红螺菌的研究

为选育耐高温耐盐红螺菌用于其粉状制剂研制,以降解水产养殖水体亚硝基氮功能达90%以上的耐盐红螺菌与能在60～70℃下生长的嗜热脂肪芽孢杆菌为出发菌株,通过正交试验探讨2种菌株的原生质体融合条件。分别对融合子进行温度、生长盐度和净化水质等功能测定,检出性能较优的融合子,同时采用电镜、细胞色素吸收光谱等方法,将融合子优良株与2种亲株进行比较鉴别。实验结果表明,2种菌株原生质体融合的最优条件为温度37℃,作用时间3 h,聚乙二醇(PEG)浓度为40%。在该优化条件下原生质体融合率为1.536%,筛选获得3株能在30～50℃良好生长的融合子(a、b、c)。融合子生长耐受温度较耐盐红螺菌亲株提高66%,但耐受盐度、降解养殖水体氨氮与亚硝基氮功能均与耐盐红螺菌亲株相近。其中融合子a菌株具有生长更快、性能更稳定的特点,其细胞形态特征、革兰氏染色属性、色素吸收峰等均与耐盐红螺菌相似。